高效液相色谱串联质谱法测定当归芍药散提取物和含药血清中3种活性-USB迷|专注于互联网分享

2024年5月7日发(作者：礼琼)

·92· Chinese Journal of Information on TCM Jan.2021 Vol.28 No.1

高效液相色谱串联质谱法测定当归芍药散提取物

和含药血清中3种活性成分含量

宋祯彦

，何攀

，李富周

，贺春香

，余婧萍

，成绍武

1.中西医结合心脑疾病防治湖南省重点实验室，湖南中医药大学，湖南长沙 410208；

2.中南粮油食品科学研究院有限公司，湖南粮食集团有限责任公司，湖南长沙 410005

摘要：目的建立测定当归芍药散提取物和含药血清中3种活性成分含量的高效液相色谱串联质谱方法。

方法药物提取物样品经甲醇-水（1∶1，V/V）溶液溶解、离心、净化后过0.45 μm滤膜，血清样品适当稀释、

过膜后用高效液相色谱串联质谱法测定。色谱柱为Agilent Poroshell 120 EC-C18（100 mm×2.1 mm，2.7 μm），

茯苓酸流动相为乙腈-0.5 mmol/L乙酸铵水溶液（9∶1，V/V），阿魏酸和芍药苷以乙腈-5 mmol/L乙酸铵水溶

液为流动相梯度洗脱，流速0.4 mL/min，柱温35 ℃，进样量5 μL，采用电喷雾离子源，负离子模式，干燥气

温度350 ℃，干燥气流速12 L/min，检测方式为多反应监测。结果当归芍药散中阿魏酸、芍药苷和茯苓酸

分别在0.1～20.0 μg/mL、1～100 μg/mL、0.1～20.0 μg/mL范围内线性关系良好，加样回收率高，重复性好。

当归芍药散提取物中阿魏酸、芍药苷和茯苓酸含量分别为（127.6±14.9）μg/g、

（6081.8±468.0）μg/g和（14.7±

0.75）μg/g，当归芍药散含药血清中阿魏酸和芍药苷含量分别为（0.026±0.004）μg/g和（0.61±0.07）μg/g。

结论本研究建立的方法样品处理简单，方法特异性强，精确度高，重复性偏差小，回收率高，可用于当归芍

药散提取物和含药血清中活性成分的质量控制。

关键词：高效液相色谱串联质谱法；阿魏酸；芍药苷；茯苓酸；当归芍药散；含药血清

中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304(2021)01-0092-08

DOI：10.19879/.1005-5304.202005099 开放科学（资源服务）标识码（OSID）：

Content Determination of Three Active Components in Danggui Shaoyao Powder Extracts

and Its Drug-containing Serum by HPLC-MS/MS

SONG Zhenyan

, HE Pan

, LI Fuzhou

, HE Chunxiang

, YU Jingping

, CHENG Shaowu

1. Key Laboratory of Hunan Province for Integrated Traditional Chinese and Western Medicine on Prevention and

Treatment of Cardio-cerebral Diseases, Hunan University of Chinese Medicine, Changsha 410208, China;

2. Research Institute of Zhongnan Grain and Oil Foods, Hunan Grain Group Co., Ltd, Changsha 410005, China

Abstract: Objective To establish a method for the determination of three active components in Danggui

Shaoyao Powder extracts and its drug-containing serum by HPLC-MS/MS. Methods The extract samples were

dissolved in methanol-water (1:1, V/V) solution, centrifuged and purified, and then passed through a 0.45 μm filter

membrane. Serum samples were appropriately diluted, passed through the membrane and determined by

HPLC-MS/MS. The column was Agilent Poroshell 120 EC-C18 (100 mm × 2.1 mm, 2.7 μm). The mobile phase of

porcine acid was acetonitrile- 0.5 mmol/L ammonium acetate aqueous solution (9:1, V/V), and the mobile phase of

ferulic acid and paeoniflorin was acetonitrile- 5 mmol/L ammonium acetate aqueous solution (gradient elution). The

flow rate was 0.4 mL/min; the column temperature was 35 ℃; the injection volume was 5 μL. Electrospray ion

source and negative ion mode were used; drying gas temperature was 350 ℃; drying gas flow rate was 12 L/min;

detection method was multiple reaction monitoring. Results The linear relationship of ferulic acid, paeoniflorin and

基金项目：国家自然科学基金（81774129、82004184）；湖南省自然科学基金面上项目（2018JJ2296）；湖南省自然科学基金青

年基金（2019JJ50441）；湖南省高校创新平台开放基金项目（19K065）；湖南省教育厅科学研究项目（18B246）；湖南创新型省

份建设专项（2019RS1064）

通讯作者：成绍武，E-mail：****************.cn

2021年1月第28卷第1期中国中医药信息杂志 ·93·

pachymic acid in Danggui Shaoyao Powder was good in the range of 0.1–20.0 μg/mL, 1–100 μg/mL, and 0.1–

20.0 μg/mL, respectively. The standard recovery was high and the repeatability was good. The contents of ferulic acid,

paeoniflorin and pachymic acid in Danggui Shaoyao Powder extracts were (127.6±14.9)μg/g, (6081.8±468.0)μg/g,

and (14.7±0.75)μg/g, respectively. The contents of ferulic acid and paeoniflorin in Danggui Shaoyao Powder-

containing serum were (0.026±0.004) μg/g and (0.61±0.07) μg/g, respectively. Conclusion The method established in

this study is simple in sample processing, strong in method specificity, high in accuracy, small in repeatability

deviation, and high in recovery rate, and can be used for the quality control of the active components in the Danggui

Shaoyao Powder extracts and drug-containing serum.

Keywords: HPLC-MS/MS; ferulic acid; paeoniflorin; pachymic acid; Danggui Shaoyao Powder;

drug-containing serum

当归芍药散出自《金匮要略》，全方由当归、芍

药、川芎、茯苓、白术和泽泻6味药组成，具有滋补

肝肾、活血化瘀、化痰通络功效。目前已对当归芍药

散进行了大量临床和实验研究

[1-2]

，该方可用于治疗

痛经与慢性盆腔炎

[3-4]

、慢性肾小球肾炎

[5]

、黄褐斑

[6]

等。此外，近年研究表明，当归芍药散可以改善认知

功能障碍和记忆损伤

[7-8]

，是治疗神经退行性疾病的

潜在方剂，具有广阔的临床应用前景。

当归芍药散重用芍药补养肝血为君药，配以当归

养血柔肝，川芎辛窜舒达、活血通络，三药共以疏理

肝脾，是方中主药；茯苓、白术燥湿健脾除水气，泽

泻利水除湿，助脾运化，起辅助作用

[9]

。其中，芍药

的主要药效成分是以芍药苷和芍药内酯苷为代表的

单萜苷类成分，具有抗炎、抗氧化、调节免疫作

用

[10-11]

；当归和川芎的主要有机酸类成分均为阿魏

酸，具有抗炎、抗氧化、调节代谢、改善认知等作

用

[12-14]

；茯苓的代表性成分为茯苓酸，具有抗氧化、

抗凋亡和抗脑缺血等作用

[15-16]

；泽泻的代表性三萜类

成分为24-乙酰泽泻醇A和24-乙酰泽泻醇B，白术的

代表性成分为白术内酯Ⅰ，均具有降脂、抗炎和抗凋

已有研究采用HPLC测定当归芍药散亡等作用

[17-19]

。

的活性成分

[20-21]

，但存在精度差、分析时间长、样品

处理复杂等缺点，尤其对药物成分含量较低的含药血

清极难检测。高效液相色谱串联质谱（high

spectrometry，HPLC-MS/MS）技术由于前处理方法相

对简单，基质干扰小，方法灵敏度高，且兼分离、定

量和定性（分子结构信息）于一体，因而特别适用于

药物定量和确证分析，可用于中药复方质量控制及中

药药理研究中含药血清的质量控制

[22-23]

。本研究建立

测定当归芍药散提取物和含药血清中阿魏酸、芍药苷

和茯苓酸含量的HPLC-MS/MS检测方法，用于该方

提取物及含药血清的质量控制。

1 仪器、试药与动物

Agilent 1290-6460液相色谱-串联质谱仪，电喷雾

离子源（ESI），Agilent Poroshell 120 EC-C18色谱柱

（100 mm×2.1 mm，2.7 μm），毕克氮气发生器。

N-1100旋转蒸发仪（EYELA东京理化器械株式会

社），LGJ-10普通型真空冷冻干燥机（北京松源华兴

科技发展有限公司），MixOne涡旋仪（合肥艾本森科

学仪器有限公司）。

当归、白芍、茯苓、白术、泽泻、川芎饮片购自

湖南中医药大学第一附属医院药剂科。甲醇和乙腈均

为色谱纯（货号分别为67-56-1、75-05-8，德国默克

集团），超纯水（电阻率18.25 Ω•cm，Milli-Q，德国

默克密理博），乙酸铵为优级纯（货号631-61-8，国

药集团），对照品阿魏酸、芍药苷、茯苓酸（货号分

别为SF8030、SP8030、SP8010，HPLC纯度≥98%，

北京索莱宝科技有限公司），0.25 μm有机相滤膜（天

津博纳艾杰尔科技有限公司）。

雄性SD大鼠10只，SPF级，体质量200～250 g，

购于湖南斯莱克景达实验动物有限公司，实验动物生

产许可证号SCXK（湘）2013-0004，饲养于湖南中医

药大学第一附属医院实验动物中心。动物实验方案通

过湖南中医药大学第一附属医院伦理委员会批准

（ZYFY20190905）。

2 方法与结果

根据课题组前期研究，采用水提法提取当归芍药

散药液并制备冻干粉

[7]

。按《金匮要略》当归芍药散

组方比例（当归14 g，白芍74.4 g，茯苓18.6 g，白

术18.6 g，泽泻37.2 g，川芎37.2 g）称取饮片200 g，

加5倍量蒸馏水浸泡2 h，武火煮沸0.5 h，文火煮1 h，

收集滤液，按上述步骤再次提取，合并2次提取液，

用旋转蒸发仪浓缩成浸膏，再用冻干机真空冷冻干燥

2～3 d，得到冻干粉。200 g饮片共收集冻干粉25.2 g。

performance liquid chromatography tandem mass 2.1 当归芍药散提取和冻干粉制备

·94· Chinese Journal of Information on TCM Jan.2021 Vol.28 No.1

2.2 当归芍药散浓缩液和含药血清制备

称取冻干粉20 g溶于40 mL超纯水，涡旋混匀，

定性滤纸过滤，制备0.5 g/mL浓缩液。分别于每日

8:00、20:00予大鼠浓缩液6.05 mL/（kg•d）灌胃，相

当于24 g原药材/（kg•d），连续7 d。末次灌胃后2 h，

3%水合氯醛10 mL/kg麻醉，用负压采血管经腹主动

脉采集全血5 mL，静置过夜，3000 r/min离心10 min，

收集上清液，0.22 μm滤膜过滤，-80 ℃冻存备用。

2.3 溶液制备

2.3.1 对照品溶液

准确称取阿魏酸、芍药苷和茯苓酸对照品1 mg，

用甲醇溶解并定容至1.00 mL，制成1000 μg/mL的对

照品贮备液。茯苓酸贮备液用90%甲醇水溶液稀释为

0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 μg/mL系列对照品溶液，阿

魏酸、芍药苷贮备液用10%乙腈稀释为50、500 μg/mL

混合对照品溶液，再用10%乙腈稀释成阿魏酸和芍药

苷浓度分别为0.1、1.0、2.0、5.0、10 μg/mL和1、10、

20、50、100 μg/mL的系列混合对照品溶液。

2.3.2 供试品溶液

准确称取0.5 g（精确至0.000 1）当归芍药散冻

干粉于10 mL离心管，准确加50%甲醇水溶液5.0 mL，

涡旋溶解3 min后10 000 r/min离心5 min，取上清液，

过0.25 μm有机滤膜，待测。血清样品用乙腈-0.5 mmol/L

乙酸铵水溶液适当稀释后过0.25 μm有机滤膜，用于

茯苓酸测定。

准确称取0.5 g（精确至0.000 1）当归芍药散冻干

粉于10 mL离心管中，准确加50%甲醇水溶液5.0 mL，

涡旋溶解3 min后10 000 r/min离心5 min，取上清液

0.10 mL，用10%乙腈水溶液定容至1.0 mL，过0.25 μm

滤膜，再取该样品溶液0.10 mL，用10%乙腈水溶液

定容至1.0 mL，过0.25 μm滤膜，待测。血清样品用

乙腈-5 mmol/L乙酸铵水溶液适当稀释后过0.25 μm

有机滤膜，用于阿魏酸和芍药苷测定。

2.4 仪器条件

色谱柱：Poroshell 120 EC-C18（100 mm×2.1 mm，

2.7 μm）；茯苓酸流动相：乙腈-0.5 mmol/L乙酸铵水

溶液（1∶1，V/V），等度洗脱；阿魏酸和芍药苷流动

相：乙腈（B）-5 mmol/L乙酸铵水溶液（A），梯度

洗脱（0～7 min，10%B；7.01～10 min，60%B；10.01～

15 min，10%B）；流速：0.4 mL/min；柱温：35 ℃，

进样量：5 μL；离子源：电喷雾离子源（ESI），负离

子模式；干燥气温度：350 ℃，干燥气流速：12 L/min；

干燥气压力：35 psi；检测方式：多反应监测（MRM）。

离子源控制条件见表1，定量离子对和定性离子对的

相对丰度误差＜10%。

表1 离子源控制条件

化合物定量/定性离子对（m/z）碰撞能/eV 碎解电压/V

阿魏酸定量 193.0→177.8 8

定性 193.0→133.8 12

芍药苷定量 479.2→449.0 4

定性 479.2→120.9 20

118

茯苓酸定量 527.4→465.2 44

定性 527.4→ 59.1 60

270

2.5 色谱图和质谱图

在同一仪器条件下对供试品和对照品分别进样，

得到色谱图（见图1～图5）。3种化合物在供试品和

对照品中的定量离子对都仅有一个峰，表明方法特异

性强，样品中杂质均不产生干扰信号且峰形对称性好。

阿魏酸对照品定性离子对（193.0→133.8）与定量离

子对（193.0→177.8）的相对丰度为41.3%，在当归

芍药散提取液中的相对丰度为41.5%（误差为0.2%），

在当归芍药散含药血清中的相对丰度为40.2%（误差

为1.1%），误差均小于10%（见图1B、C，图2B、C，

图3B、C）；芍药苷对照品定性离子对（479.2→120.9）

与定量离子对（479.2→449.0）的相对丰度为50.9%，

在当归芍药散提取液中的相对丰度为44.9%（误差为

6.0%），在当归芍药散含药血清中的相对丰度为56.0%

（误差为5.1%），误差均小于10%（见图1E、F，图2E、

F，图3E、F）；茯苓酸对照品定性离子对（527.4→59.1）

与定量离子对（527.4→465.2）的相对丰度为69.7%，

在当归芍药散提取液中的相对丰度为73.9%（误差为

5.8%），误差均小于10%（见图4B、C，图5B、C）。

表明检测方法能准确定性当归芍药散提取液和含药血

清中阿魏酸、芍药苷和茯苓酸。

2.6 方法学考察

2.6.1 线性关系考察

取阿魏酸、芍药苷和茯苓酸系列对照品溶液进样

测定，以所得峰面积为纵坐标，对照品浓度（μg/mL）

为横坐标，绘制标准曲线，结果见表2。阿魏酸、芍

药苷、茯苓酸分别在0.1～20.0 μg/mL、1～100 μg/mL、

0.1～20.0 μg/mL范围内线性关系良好，线性宽度可满

足样品质量控制的需求。

2.6.2 检出限与定量限

将供试品溶液稀释至3倍信噪比为检出限，10

倍信噪比为定量限。阿魏酸、芍药苷、茯苓酸的检出

限分别为5、50、5 ng/mL，定量限分别为50、200、

50 ng/mL，检出限远低于供试品浓度，可满足对样品

的质量控制要求。

2021年1月第28卷第1期中国中医药信息杂志 ·95·

计

数

0.854

相

对

丰

度

计

数

计

数

t/min

5.701

t/min

质荷比（m/z）

相

对

丰

度

计

数

t/min

计

数

质荷比（m/z）

注：A.总离子流图；B.阿魏酸定性离子对色谱图；C.阿魏酸定量离子对色谱图；D.阿魏酸离子对MRM质谱图；

E.芍药苷定性离子对色谱图；F.芍药苷定量离子对色谱图；G.芍药苷离子对MRM质谱图

图1 阿魏酸和芍药苷对照品色谱及质谱图

计

数

0.881

相

对

丰

度

t/min

计

数

5.667

t/min

计

数

质荷比（m/z）

相

对

丰

度

计

数

t/min

计

数

质荷比（m/z）

注：A.总离子流图；B.阿魏酸定性离子对色谱图；C.阿魏酸定量离子对色谱图；D.阿魏酸离子对MRM质谱图；

E.芍药苷定性离子对色谱图；F.芍药苷定量离子对色谱图；G.芍药苷离子对MRM质谱图

图2 当归芍药散提取液中阿魏酸和芍药苷色谱及质谱图

·96· Chinese Journal of Information on TCM Jan.2021 Vol.28 No.1

计

数

0.854

相

对

丰

度

t/min

计

数

5.570

t/min

计

数

质荷比（m/z）

相

对

丰

度

计

数

t/min

E F

t/min

计

数

质荷比（m/z）

注：A.总离子流图；B.阿魏酸定性离子对色谱图；C.阿魏酸定量离子对色谱图；D.阿魏酸离子对MRM质谱图；

E.芍药苷定性离子对色谱图；F.芍药苷定量离子对色谱图；G.芍药苷离子对MRM质谱图

图3 当归芍药散含药血清中阿魏酸和芍药苷色谱及质谱图

计

数

1.583

相

对

丰

度

t/min

计

数

t/min

计

数

质荷比（m/z）

注：A.总离子流图；B.定性离子对色谱图；C.定量离子对色谱图；D.离子对MRM质谱图

图4 茯苓酸对照品色谱及质谱图

2021年1月第28卷第1期中国中医药信息杂志 ·97·

计

数

t/min

1.662

相

对

丰

度

计

数

t/min

计

数

质荷比（m/z）

注：A.总离子流图；B.定性离子对色谱图；C.定量离子对色谱图；D.离子对MRM质谱图

图5 当归芍药散提取液中茯苓酸色谱及质谱图

表2 3种成分线性关系考察结果

化合物线性范围/（μg/mL）回归方程 r

2.6.4 稳定性试验

取新制备的同一份供试品溶液，分别于室温放置

0、2、4、6 h后进样，记录色谱图，测得阿魏酸、芍

药苷和茯苓酸峰面积RSD分别为4.0%、2.9%和4.3%，

结果表明供试品溶液在6 h内稳定。

2.7 样品含量测定

取当归芍药散冻干粉，制备提取物供试品溶液并

测定，6次测定结果见表4。当归芍药散提取物中阿

魏酸、芍药苷和茯苓酸含量分别为（127.6±14.9）μg/g、

（6081.8±468.0）μg/g和（14.7±0.75）μg/g。同时

随机取6只大鼠的当归芍药散含药血清，按“2.3.2”

项下方法制备供试品溶液并测定，重复测定3次，结

果见表5。大鼠来源的当归芍药散含药血清中阿魏酸

和芍药苷含量分别为（0.026±0.004）μg/g和（0.61±

0.07）μg/g，表明当归芍药散提取液灌胃不同大鼠获

取的含药血清中阿魏酸和芍药苷含量比较稳定。

表4 当归芍药散提取液样品含量测定结果（μg/g）

—

阿魏酸 0.1～20.0

芍药苷 1～100

Y＝1528.4X＋341.6 0.992 9

Y＝215.7X－74.4 0.999 8

Y＝1204.2X＋269.3 0.999 6 茯苓酸 0.1～20.0

2.6.3 加样回收率试验

称取同一已知浓度供试品3份，加入阿魏酸、芍

药苷和茯苓酸对照品溶液，按低、中、高3个水平添

加，按“2.3.2”项下方法制备供试品溶液并测定，加

样回收率试验结果见表3。阿魏酸回收率为89.5%～

95.7%，RSD＝3.1%；芍药苷回收率为97.3%～99.7%，

RSD＝1.2%；茯苓酸回收率为96.7%～99.8%，RSD＝

1.6%。表明3种化合物回收率好，方法准确度高。

表3 加样回收率试验结果

化合物

加入量/

（μg/mL）

测得量/

（μg/mL）

回收率

平均回收

率/%

RSD

阿魏酸 0.1 0.089 5 89.5

化合物1 2 3 4 5 6 平均值（

x±s）

2.0 1.856 0 92.8 92.7 3.1

阿魏酸102.4148.2133.4115.7 128.6 137.4 127.6±14.9

5.0 4.785 0 95.7

芍药苷6775532057646220 5980 64326081.8±468.0

芍药苷 1.0 0.973 97.3

茯苓酸14.415.413.914.5 13.9 15.9 14.7±0.75

20.0 19.720 98.6 98.5 1.2

表5 当归芍药散含药血清样品含量测定结果（μg/g，n＝3）

50.0 49.850 99.7

茯苓酸 0.1 0.096 7 96.7

化合物1 2 3 4 5 6 平均值（

x±s）

0.026±0.004

0.61±0.07

—

阿魏酸0.024 50.021 60.032 3 0.026 8 0.021 9 0.031 1

0.2 0.199 6 99.8 98.4 1.6

1.0 0.986 0 98.6

芍药苷0.709 90.665 00.498 7 0.634 5 0.611 2 0.546 3

·98· Chinese Journal of Information on TCM Jan.2021 Vol.28 No.1

3 讨论

质量是中药临床安全、有效、可控的基础，也是

基础研究结果可靠、稳定的保证

[24]

。中药含药血清是

方剂药理学细胞实验常用的媒介，但其中有效药物成

分含量较低，一般在ng级。目前常用HPLC无法准

确测定中药含药血清中有效成分含量，而液相色谱串

联质谱法灵敏度高，可用于快速、准确地检测中药含

药血清中的有效成分。彭国梅等

[25]

使用UPLC-MS/MS

同时测定了葛根芩连汤含药血清10个有效成分的含

量。闫寒等

[26]

使用LC-MS/MS检测血府逐瘀胶囊大

鼠含药血清中芍药苷的含量。本研究使用

HPLC-MS/MS能够准确定量当归芍药散含药血清中2

个主要活性成分——阿魏酸和芍药苷的含量，可作为

当归芍药散含药血清质量控制的方法。

阿魏酸、芍药苷和茯苓酸分别是当归芍药散中当

归、川芎、芍药和茯苓的主要活性成分，其含量是否

稳定影响当归芍药散的药效。目前，阿魏酸、芍药苷

和茯苓酸测定主要使用液相色谱紫外检测器法，该方

法杂质干扰大，要求对样品进行净化处理。样品在经

过醇溶液提取后，需要使用乙酸乙酯、三氯甲烷和乙

醚等提取剂净化萃取

[27-30]

，以排除复杂样品基质中强

极性物质的干扰，若杂质去除不净可能影响定量准确

性。本研究建立的方法样品处理简单，用醇溶液提取

稀释后即可直接测定，且质谱三重四级杆质量筛选器

的MRM特异性强，定性定量的准确性大大优于紫外

检测器。

茯苓酸、阿魏酸和芍药苷均为酸性化合物，容易

失去氢得到负离子，故选择ESI负离子模式进行测定。

在负离子模式下对10.0 μg/mL对照品溶液进行全扫

描，茯苓酸、阿魏酸和芍药苷的最强离子分别为

527.4、193.0、525.0（m/z），均为分子脱氢后产生的

负离子，因此选择其作为母离子进行子离子扫描，初

步优化碎解电压的同时寻找特征子离子，选择其中2

个信号较强的子离子进行MRM扫描，进一优化碎解

电压，并得到最佳碰撞能。

本研究供试品溶液制备时，溶剂的选择分别考察

了水及不同浓度的甲醇、乙醇，结果表明甲醇作为溶

剂的检测效率最高，其中50%甲醇水溶液制备供试品

的检测效率高且杂质少。采用甲醇为溶剂时，分别考

察了涡旋振荡法和超声法溶解当归芍药散冻干粉，结

果3种化合物的检测效率相差不大，涡旋震荡法检测

含量略高，故选择涡旋振荡法。

对流动相的选择，本研究分析的化合物均为离子

型化合物，离子型化合物容易与色谱柱中未封端的硅

羟基发生强相互作用（次级保留）而使色谱峰拖尾。

为改善峰形以提高积分准确度，本研究使用乙酸铵作

为改良剂以减少次级保留，但由于气态离子的竞争，

加入乙酸铵会使被分析物响应降低。综合考虑，茯苓

酸采用乙腈-0.5 mmol/L乙酸铵水溶液为流动相等度

洗脱，阿魏酸和芍药苷采用乙腈-5 mmol/L乙酸铵水

溶液为流动相梯度洗脱，峰形和信号强度最佳。

在本研究中，当归芍药散含药血清未检测出茯苓

酸，可能由于提取物中茯苓成分含量低，导致含药血

清中茯苓酸含量低于检出限。今后将继续改进方法，

提高检出限。

参考文献：

[1] 李佳曦,贾淑琳,瞿融.近三年当归芍药散实验及临床研究进展[J].江

西中医药,2008,39(9)：58-60.

[2] 刘敏,任存霞.当归芍药散的实验研究进展[J].中医药学报,2019,

47(5)：117-119.

[3] 鄢胜君,操燕明.当归芍药散治疗原发性痛经研究进展[J].中药药理

与临床,2020,36(1)：243-248.

[4] 陈湘宜,胡欣欣.当归芍药散加味治疗盆腔炎患者的临床效果[J].中

华全科医学,2020,18(2)：255-257,261.

[5] 苏浩武.当归芍药散治疗湿瘀互结证慢性肾小球肾炎患者的临床效果

观察[J].中医临床研究,2020,12(5)：133-135.

[6] 常亚利.当归芍药散治疗黄褐斑临床观察[J].实用中医药杂志,2020,

36(3)：285-286.

[7] 余婧萍,贺春香,成绍武,等.当归芍药散通过调控NF-κB炎性通路改

善H

诱导的SH-SY5Y细胞氧化损伤的作用[J].中国实验方剂学杂

志,2020,26(10)：1-7.

[8] 宋祯彦,陈易璇,余婧萍,等.当归芍药散活性成分治疗阿尔兹海默病

作用机制的生物网络分析[J].世界科学技术－中医药现代化,2018,

20(6)：834-846.

[9] 刘艳娜.当归芍药散的组方和药理药效研究[J].世界最新医学信息文

摘,2017,17(17)：102.

[10] ZHANG L, WEI W. Anti-inflammatory and immunoregulatory effects

of paeoniflorin and total glucosides of paeony[J]. Pharmacology

and Therapeutics,2020,207：107452.

[11] ZHAI A, ZHANG Z, KONG X J. Paeoniflorin alleviates H

-induced

oxidative injury through down-regulation of microRNA-135a in

HT-22 cells[J]. Neurochem Res,2019,44(12)：2821–2831.

[12] SALAU V F, ERUKAINURE O L, IBEJI C U, et al. Ferulic acid

modulates dysfunctional metabolic pathways and purinergic

activities, while stalling redox imbalance and cholinergic

activities in oxidative brain injury[J]. Neurotox Res,2020,

37(4)：944–955.

[13] DIEGO L, IVAN L, LICETH C M, et al. Maize extract rich in ferulic

2021年1月第28卷第1期中国中医药信息杂志 ·99·

acid and anthocyanins prevents high-fat-induced obesity in mice

by modulating SIRT1, AMPK and IL-6 associated metabolic and

inflammatory pathways[J]. J Nutr Biochem,2020,79：108343.

[14] 杜雪蓓,燕灏敏,梁津瑜,等.阿魏酸钠对慢性脑低灌注大鼠认知功能

及对磷酸化ERK、CREB和BDNF表达的影响[J].武汉大学学报(医学

版),2017,38(5)：713-718.

[15] PANG Y, ZHU S, PEI H. Pachymic acid protects against cerebral

ischemia/reperfusion injury by the PI3K/Akt signaling

pathway[J]. Metab Brain Dis,2020,35(4)：673-680.

[16] 陈伟光,张学峰,官莹,等.茯苓酸对小鼠病毒性心肌炎Caspase-3及

Akt表达的相关研究[J].心脑血管病防治,2019,19(6)：501-503,519,593.

[17] WANG C F, FENG L, MA L, et al. Alisol A 24-acetate and alisol

B 23-acetate induced autophagy mediates apoptosis and

nephrotoxicity in human renal proximal tubular cells[J]. Front

Pharmacol,2017,8：172.

[18] LI Y X, WANG Y P, LIU Z X, et al. Atractylenolide I induces

apoptosis and suppresses glycolysis by blocking the JAK2/STAT3

signaling pathway in colorectal cancer cells[J]. Front Pharmacol,

2020,11：273.

[19] ZHOU X, REN Q, WANG B, et al. Alisol A 24-acetate isolated from

the alismatis rhizoma improves hepatic lipid deposition in

hyperlipidemic mice by ABCA1/ABCG1 pathway[J]. J Nanosci

Nanotechnol,2019,19(9)：5496-5502.

[20] 付新,张洪财,张贺,等.HPLC测定当归芍药散中的芍药苷和芍药内酯

苷的含量[J].化学工程师,2020,34(1)：25-27.

[21] 贺晓艳,宋秋月,郑丹,等.HPLC法测定当归芍药散中芍药苷、白芍苷、

阿魏酸、洋川芎内酯Ⅰ的含量[J].亚太传统医药,2011,7(7)：36-39.

[22] 饶怡菲,江志辉,何明珍,等.基于超高效液相色谱-串联质谱法研究

宽缨酮在大鼠体内的生物利用度及代谢产物[J].中药新药与临床药

理,2020,31(4)：455-463.

[23] LIU B, SONG Z, YU J, et al. The atherosclerosis-ameliorating

effects and molecular mechanisms of BuYangHuanWu decoction[J].

Biomed Pharmacother,2020,123：109664.

[24] 林朝展,李宝晶,韩立炜.从近5年国家自然科学基金资助项目浅谈中

药质量评价研究现状[J].中草药,2020,51(2)：281-286.

[25] 彭国梅,张启云,李冰涛,等.UPLC-MS/MS同时测定葛根芩连汤含药血

清10个有效成分的含量[J].中药新药与临床药理,2016,27(3)：393-

398.

[26] 闫寒,付衍,彭娟,等.大鼠含药血清中芍药苷的含量测定[J].中国实

验方剂学杂志,2013,19(14)：89-91.

[27] 杨慧敏,杨彪,胡玉梅,等.基于UPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS 技术的桂枝

茯苓胶囊化学成分分析[J].中国中药杂志,2020,45(4)：861-877.

[28] 张莉野,田成旺,刘素香,等.桂枝茯苓方的化学成分、药理作用及质

量标志物(Q-marker)的预测分析[J].中草药,2019,50(2)：265-272.

[29] 梁乙川,伍清芳,刘素娟,等.HPLC法同时测定川芎药材中10种成分含

量[J].中药材,2019,42(1)：136-138.

[30] 荀秀彪,张顺平.HPLC同时测定归芍疏肝散中芍药苷阿魏酸和甘草酸

铵的含量[J].中国现代中药,2020,22(2)：278-281.

（收稿日期：2020-05-08）

（修回日期：2020-05-19；编辑：陈静）