2024年4月8日发(作者：陆开霁)
2.3 划痕法检测细胞迁移
(1)选择第3-5代生长良好的VSMCs，胰蛋白酶制备细胞悬液，调整细胞密度为1.0x10
／ml，均匀接种于6
孔板中。在铺板前，在板的背面用记号笔划5-6道平行的横线。
(2)待细胞贴壁生长至70-80％汇合时，吸弃原含10％血清的培养液，换用含0.3％血清的DMEM培养液继
续培养24h，使VSMCs同步化，处于G0／G1期。
(3)用无菌的200μl枪头管尖(约0.7 mm)在各培养板细胞生长单层相同位置划垂直或平行直线，与以上的横
线要垂直，造成几条“伤口"。PBS清洗2次，去除被枪头管尖破坏而脱落的细胞并照相(每个时间点都在相
同的位置)。
(4)进行吡哆胺及替米沙坦对VSMCs迁移实验时，分为对照组、AngⅡ组、P组、T组及TP组，分别于P
组中加入1mmol/L吡哆胺，T组中加入10
-7
mol/L替米沙坦及TP组中加入1mmol/L吡哆胺和10
-7
mol/L替
米沙坦，2小时后，于AngⅡ组、P组、T组及TP组中分别加入10
mol/L AngⅡ。
(5)于24h时观察各组细胞迁移情况，计算100倍显微镜下4个独立视野中超过划线的细胞数，实验重复3
次，重复照相，并计算平均值。
吡哆胺及替米沙坦对 VSMCs 迁移的影响
划痕法检测 VSMCs 迁移细胞数，见图 4。
-7
5
图 4 倒置相差显微镜下(X100)，0h 即刚划痕时未见细胞超越边缘线，24h 时各组
均可见数量不等的细胞超越边缘线，向空白区生长。
AngⅡ组迁移细胞数即细胞迁移水平较对照组显著升高（P﹤0.01），P 组、T 组及 TP
组较 AngⅡ组显著下降（P﹤0.01），且 TP 组较 P 组及 T 组显著下降（P﹤0.01），见图 5。
2024年4月8日发(作者：陆开霁)
2.3 划痕法检测细胞迁移
(1)选择第3-5代生长良好的VSMCs，胰蛋白酶制备细胞悬液，调整细胞密度为1.0x10
／ml，均匀接种于6
孔板中。在铺板前，在板的背面用记号笔划5-6道平行的横线。
(2)待细胞贴壁生长至70-80％汇合时，吸弃原含10％血清的培养液，换用含0.3％血清的DMEM培养液继
续培养24h，使VSMCs同步化，处于G0／G1期。
(3)用无菌的200μl枪头管尖(约0.7 mm)在各培养板细胞生长单层相同位置划垂直或平行直线，与以上的横
线要垂直，造成几条“伤口"。PBS清洗2次，去除被枪头管尖破坏而脱落的细胞并照相(每个时间点都在相
同的位置)。
(4)进行吡哆胺及替米沙坦对VSMCs迁移实验时，分为对照组、AngⅡ组、P组、T组及TP组，分别于P
组中加入1mmol/L吡哆胺，T组中加入10
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mol/L替米沙坦及TP组中加入1mmol/L吡哆胺和10
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mol/L替
米沙坦，2小时后，于AngⅡ组、P组、T组及TP组中分别加入10
mol/L AngⅡ。
(5)于24h时观察各组细胞迁移情况，计算100倍显微镜下4个独立视野中超过划线的细胞数，实验重复3
次，重复照相，并计算平均值。
吡哆胺及替米沙坦对 VSMCs 迁移的影响
划痕法检测 VSMCs 迁移细胞数，见图 4。
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5
图 4 倒置相差显微镜下(X100)，0h 即刚划痕时未见细胞超越边缘线，24h 时各组
均可见数量不等的细胞超越边缘线，向空白区生长。
AngⅡ组迁移细胞数即细胞迁移水平较对照组显著升高（P﹤0.01），P 组、T 组及 TP
组较 AngⅡ组显著下降（P﹤0.01），且 TP 组较 P 组及 T 组显著下降（P﹤0.01），见图 5。