2024年5月11日发(作者：邰梓)
天然产物研究与开发！
文章编号：
1
〇〇
1'880(2018)7-1176'5
2018,30:1176-1180
广蕾香内生真菌
Daldinia
eschscholtzii
C
630
次级代谢产物及其细胞毒活性研究
卢梦梦
U
，陈玉婵
刘洪新
李赛妮
李浩华
陶美华
郝再彬
2,
章卫民
1!
1
广东省微生物研究所省部共建华南应用微生物国家重点实验室广东省菌种保藏与应用重点实验室广东省微生物应
用新技术公共实验室，广州
510070%2
桂林理工大学化学与生物工程学院，桂林
541006
摘要
:
采用色谱法从广蕾香内生真菌
Dalna eCshOzi
发酵液中分离得到
9
个化合物，通过波谱数据分析
分另
"
鉴％
为
dihydrosphaerolone ( 1 )
、
2
，
3-dihydro-5-hydroxy-2-methyl'2-1-benzopyran-4-one ( 2 )
、6
-hydroxymellein
(3)
、
4
，
8-dihydroxy-1 -tetralone(4)
、
8-methoxy-1 -naphthol(5)、helicascolide A(6)
、
1-(2,6-dihydroxyphenyl) butan-1 -
one(7)
、
1-(2,6-dihydroxyphenyl)ethan-1-one(8)、diiobutyl phthalate(9
)，其中化合物
5、9
为首次从该属真菌中分
离得到。细胞毒活性测试显示化合物
6
、
7
对肿瘤细胞
SF-268
、
MCF-7
、
NCI-H460
、
HepG-2
具有较好的抑制活性，
1C
,。值在
16.52 ~28.42 %m
〇
l/L
之间。
关键词
:
广藿香
;
内生真菌
;Dalia eCshOzi%
次级代谢产物;细胞毒活性
中图分类号：
R284. 1 ;Q93-3
文献标识码
:A D0I
：
10. 16333/j. 1001 -6880.2018. 7. 014
Secondary
Metabolites
of
Endophytic
Daldinia
eschscholtzii
A
630
from
Pogostemon
cablin
and
Their
Cytotoxic
Acti'^ities
LU
Meng
-
meng1'2，CHEN
Yu
-
chan1，LIU
Hong
-
xin1，LI
Sai
-
ni1，LI
Hao
-
liua
1，
TAOMei
-
hua^HAO
Zai
-
bin
2,
ZHANG
Wei
-
min
1*
1
State Key Laboratory of Applied Microbiolo^^y Southern China，Guangdong Provincial Key Laboratory of
Microbial Culture Collection and Application
，
Guangdong Open Laboratorr
〇
o Applied Microbiology
，
Guangdong Institute
2
Microbiology，Guangzhoo 510070
，
China;
College oj Chemistrr and Bioengineering，Guiliri Universitt
〇
o Technology，Guilin 541006，China
Abstract
：
Nine compounds were isolated from the fermentation brotli of endophytic fungus
Daldinia eschscholtzii
from
Pogostemoo cablin
by using various chromatographic metliods such as silica gel，reverse silica gel，Sephadex LH-20,pre
parative TLC and HPLC. Their structures were identified as dihydrosjDhaerolone (l)
42-1-benzopyran--one(2)
，
6-hydroxymellein (3)
，
4,8-dihydroxy-1-tetralone (4)
cclide A ( 6 )，1 - ( 2
phthalate(9)
，
2,3-dihydro-5-hydroxy-2-methyl-
，
8-methoxy-1-naphthol (5)
，
helicas-
，6
-dihydroxyphenyl) -butan-1 -one ( 7 )，1 -( 2，6-dihydroxyphenyl ) ethan-1 -one ( 8 )，diisobutyl
，
respectively，based on spectroscopic analysis. Among them，compounds 5 and 9 were isolated from the ge
nus Dalia for the first time. Compounds 6 and 7 showed moderate growth-inhibitory activities i ,to against SF-268
，
MCF-7，NCI-H460 and HepG-2 tumor cell lines with IC
50
values ranging from16. 52 to 28.42 %mol/L.
Key words
：
Pogostemon cablin
% endophytic fungus %
Daldinii eschscholtzii
% secondary metabolites % cytotoxic activity
广霍香
（PogoSmon
cabn
(
Blanco
)
Benth
.]为
唇形科
（Labiatae
)刺蕊草属
（Pogotmon
Desf
.)植
物，原产于东南亚地区，我国引种栽培历史悠久，可
追溯到梁代或以前。广藿香作为我国著名的“十大
收稿日期
:
2017-10-12
接受日期
:
2018-03-13
基金项目：国家自然科学基金（
31600271
)%国家
973
前期专项（
20
14CB460613
)%
广东省科技计划（
2015 A030302060
，
2
。
14A
。
3
。
3
。
4
。
5
。
）；广东省自然科学基金（
2015A0303
13710
)
广药”之一，是30多种中成药的主要组成原料。中
国药典记载，广藿香全草入药，味辛，性微温，具有芳
香化浊、开胃止呕、发表解暑等功效。现代药理研究
表明广藿香具有抗菌、抗炎、止咳和调节肠道功能、
抗肿瘤等作用[1]。
植物体内普遍存在内生真菌，它们与宿主协同
进化，形成了互惠共生关系，能产生与宿主植物相同
或相似的代谢产物。本实验室前期对广藿香内生真
菌的类群进行了分析，发现其内生真菌多样性丰富，
*
通信作者
:
wmzhang@gdim. cn
Vol
. 30
卢梦梦等:广藿香内生真菌+"366
e
*—
A
630次级代谢产物及其细胞毒活性研究
1177
25个属40个
的活性次
[
2
]，为了发掘广藿香内生真菌
真菌
Arne
"
sp
.
2
)，LPM
I-
1640培养基（吉 物医药技术有限公
广州化学试剂厂。
产物，对其
)，其余试剂均为分析纯，
实验方法
A
593
'
Bipolaris
sorokiniana
A
606
“
Myrotheciumrori
-
A
553进了 研究，发现了多个具有细胞毒
活性的 产物[1，3,4]。 期研究发现广香 ：
真菌+"366
e
*
h
*
ho
3>
A
630发酵液提取物的代
产物 ，且该提取物对神 细胞
SF
-268和
腺癌细胞
MCF
-7具有较好的抑制活性。为了进
一步发掘广藿香 真菌的活性 产物，本研究
对菌株
A
630发 的乙酸乙酯部位进行了分离纯
2.1菌株与发酵培养
株
A
630
2012
年
10
月自广东省 马
镇采集的广藿香枝条中分离得到，广香由广东
药科大学严寒静教授鉴定为
^ootmo
ca
.
n
。将
离得到的菌株
DNA
制备，采用引物
ITS
1 (5
ITCCGTAGGTGAAACCTGCGG
-3
W
) “
ITS
4(5'-
化，从中分离获得9个化合物（图1 )，其中化合物5'
]为该属首次分离得到，化合物
B
、7对 细胞
SF
-
268'
MCF
-7 、
NCI
-
H
460 、
HepG
-2 具有较好的细胞毒
活性，
IC50
16.52 〜28.42 %
mol/L
之间。
图
1
化合物
1~9
的结构式
Fig. 1 Structures of compounds 1 -9
1仪器与试剂
PZ
1000
B
旋转式大容量普通摇床（武汉瑞华仪
器设备有 ），旋 发仪（上海亚荣生化仪器
厂），超净工作台（上海恒益科技有 ），
Hang
ping
FA
2004 电 析天平（上海天平仪器厂），
LC
-
20
A
色谱仪（日 ），
WHF
-
203
B
用 析仪（上海禾汽化工科技有 -
司），核磁 波谱仪（
Bruker
公司），酶仪（
Bio
-
Tek
)， 化碳培养箱
（Shellab
)，倒置显
微镜
（Nikon
)。
色谱硅胶（
100
〜
200、200
]300目，青岛海洋
化工厂），
GF254
薄层板
（Merck
)，反硅
胶（40 ] 75 %
m，Fuji
Silysia
Chemical
Ltd
.)，凝胶
Sephadex
LH
-20( 18 〜110 %
m，Amersham
Biosciences
Ltd
.
)，MCI
GEL
(日本三菱化学株
S
；
G
)，
Sulforho
-
damine
B
sodium
salt
(
SLB
)(
Sigma-Aldrich
公司），
DMS
0(
Sigma-Aldrich
)，销（齐鲁制药有限公
司），胎牛血清（杭州季青生物 材料有 、
TCCTCCGCTTATTGATATGC
-3
W
反向）扩增分离菌
株
rDNA
I
TS
区，测序获得的序列通过
BLAST
:
NCBI
上进 性序列检 析， 与株
+"366
e
*
h
*
ho
3>
UM
1400 (
GenBank
登录号为
J
X
966561)的相似度为100
C
，因此鉴定株
A
630
为 +"366
e
*
h
*
hd
> (
GenBank
登录号为
KF
494831)，菌株保存于广东省微生物研究所。
发酵培养基为马铃薯 培养基（
PD
):
马铃薯 200
g
/
L
，
KH2PO4
0. 3
C
，葡萄糖 2
C
，
KH2P
0
4
0. 3
C
，维生素
Bi
0. 01
C
，
MgS
0
4
,7
H
20
0. 15
C
，
pH
自然。在无条件下，用接种铲挑取3
块0.5
X
0.5
cm
2的菌丝体接种到装有250
mL
培
养基的500
mL
三角瓶内。在120
rpm
、28 °
C
条件下
荡培养5天，得到 。然后将 积
数10
C
的接 接到装有250
mL
培养基的500
mL
三角瓶内，相同条件下培养7天，共发50
L
。
2.2分离纯化
发 用4层纱布过滤后，滤 乙酸乙酯反
复萃取4次，45 ~ 50
C
下减压浓缩得浸膏20. 1
g
。
浸膏经
MCI
柱以甲醇-水（70: 30 ] 100: 0)梯度洗
，用薄层色谱（
TLC
)检测（显色剂：茴香醛-浓硫
酸），合 组分，得到10个组分（
M
1 ~
M
10)〇
M6
经反硅 层析 -水（80: 20〜100
k
)
t
，到组分
M6
-
1
〜
M6
-，将
M6
-
1
经过
Sepha
-
dex
LH
20以纯甲醇洗脱得到
M
6-1-1〜
M
6-1浓，将
组分
M
6-1-经反制 乙腈-水(70: 30) ，
得到化合物 1(8. 0
mg
)。
M
9 经过
Sephadex
LH
-20
氯 -甲醇（50: 50) ，到
M
9-1 〜
M
9-，
将组分
M
9浓经反相制 乙腈-水（60: 40)
i
，到化合物5(12.
0
mg
)。
M
3经反制：以
乙腈-水(50:50) 纯化，得到化合物7(5.1
mg
)。
M
5经
Sephadex
LH
甲0以纯甲醇洗脱得到
M
5-]
M
5'，组
M
5-1通反相制 乙腈-水（70:
30)洗脱纯化，得到化合物6(3.1
mg
)。组分
M
5甲
1178
天然产物研究与开发
Vo
1. 30
通过反相制备柱以乙腈-水（40: 60)洗脱纯化，得到
化合物3(2. 2
mg
)、化合物4(5. 3
mg
)。组分
M
7经
S
e
phad
e
x
LH
水0以纯甲醇洗脱得到
M
7' ~
M
7'，
M
7水过正相柱以正己烷-乙酸乙酯（
20
:
1
~
1
:
1
)梯
(C-1)，173.0 (C-3)，161.7 (C-8)，156.5 (C-8’），
128. 0(C-8a’，151.6 (C-4’，129. 5 (C-4a)，129.4
(C-4a’，128.9 (C-6’，118.7 (C-4)，118.6 (C-7)，
118.3(C-7’，118.3 (C-5’，115.5 (C-5)，114.2
(C-8a)，113.9 (C-6)，113.9 (C-3’，98.7 (C-2’），
63.7 (C-r)，42.7 (C-2’。以上数据与文献[6]报道
基本一致，鉴定该化合物为Dihydrosphaerolone。
化合物2白色粉末（CD3OD);分子式为C。
H10O3 ；[H NMR (500 MH
z
，CD30D)5:7. 17 (1H，t，N
= 8.3Hz，H-7)，6.29(1H，dd，N = 8.3，1.0Hz，H-
度洗脱得到组分
M
7水水~
M
7水水，将
M
7水水过半制
备柱以乙腈-水（40: 60)洗脱得化合物2 (5. 4
mg
)，
组分
M6
过
Sephadex
LH
水0以纯甲醇洗脱得到皿
6
-
1 ~
M
6-3，
M
6-1过正相柱以石油醚-乙酸乙酯（30: 1
~1:1)梯度洗脱，得到化合物9(2.1
mg
)。组分
M
4
经反相柱以甲醇-水（80:
10
~
100
:
0
)梯度洗脱得到
M
4-1 ~
M
4-6，
M
4-6经正相柱以石油醚-乙酸乙酯（40
:
1
~
10
:
1
)梯度洗脱，得到化合物
8
(
8.0
mg
)。
2?细胞毒活性测试
采用
SRB
法[
5
]测定化合物的细胞毒活性。取
对数期生长的
SF
-268、
MCF
-7、
NCI
水460、
HepG
-2 细
胞，用胰酶消化，台盼蓝染色计数，台盼蓝排斥实验
检测细胞活力大于95%后，用新鲜培养基调整细胞
浓度为3
x
10
4
个/
mL
。将肿瘤细胞接种于96孔板，
每孔加入180
%L
的细胞悬浮液，并设3个空白孔调
零，于37 °
C
、5%
C
〇2培养箱培养24
h
。待细胞贴壁
后，每孔加人
20
%L
待测样品，空白对照加
20
%L
培
养基，以顺铂为阳性对照。置于
C
〇
2
培养箱中培养
72
h
后，加入50
%L
50%的冷
三
氯醋酸固定细胞，4
C
条件下放置1
h
，用蒸馏水洗涤5次，空气中自然
干燥。然后加人由1%冰醋酸配制的4
mg
/
mL
的
SRB
溶液，每孔100
%L
，室温中染色30
m
5,去上清，用1%
冰醋酸洗涤5次，空气干燥。最后每孔加入200
%L
10
mmol/L
的
Tri
s溶液，用酶标仪测定570
nm
处的吸光
值(
A
)，用以下公式计算化合物对细胞生长的抑制率，
采用
S
i
gmaP
l
o
t 10.0软件计算I
C50
值。
细胞生长抑制率（％ )=
OD
空白对照组
P
+样品组
Q
+空白对照组
x
100 %
3实验结果
3.1结构鉴定
化合物1黄色粉末（
DMSO
);分子式为
C
m
H
14
06;
1HNMR
(500
MH
z
，
DMS
0-'6)5:13.87(1
H
，
s
，8-
OH
)，8.02 (1
H
，
d，N
=7.9
Hz
，
H
-5)，7.49 (2
H
，
m
，
H
-6，
H
-4
a
’），7.39 (1
H
，
t
，
N
=7.9
Hz
，
H
-5’），7.02
(2
H
，
dd
，
overlapped
，
H
-7，
H
-7 ’），5. 97 (1
H
，
s
，
H
-2 )，
5.16 (1
H
，
t
，
N
=7.3
Hz
，
H
-
r
)，2.98 (1
H
，
dd，N
=
13.3,7. 2
Hz
，
H
-2
a
’，2. 00 (1
H
，
dd
，
N
= 13.3,7.5
H
z
，
H
-21
);13CNMR
(125
MH
z
，
DMS
0-'6)$:190. 8
6)，6.24 (1H，dd
，J
= 8.3，1.0 H
z
，H-8 )，4.36
(1H，m，H-2)，2.54(1H，dd，N = 17.2，12.4Hz，H-
3a)，2.48，（1H，dd，J = 17.2,3.4H
z
，H-31)，1.33
(3H，d，J = 8.3 H
z
，1.0,2-Me)；13C NMR (125
MH
z
，CD30D)5:199.6 (C-4)，162.5 (C-9)，162.5
(C-5)，138.5 (C-7)，109.5 (C-6)，108.5 (C-10)，
108. 0(C-8)，74. 7 (C-2)，44. 1 (C-3)，21.0 (2-
Me)。以上数据与文献[7]报道基本一致，鉴定该化
合为 2,3-dihydro-5-hydroxy-2-methyl-42-1-1enzopyr-
an-4-one。
化合物3浅黄色油状液体(DMSO);分子式为
C10H10O4 ；[H NMR (500 MH
z
，DMSO-'6) 5： 11.12
(1H，s，8-OH)，10.61 (1H，s，6-OH)，6.22 (1H，d，J
= 2.2 H
z
，H-5)，6. 17 (1H，d，J = 1.9 H
z
，H-7)，
4.66 (1H，m，H-3)，2. 90 (1H，m，H-4a)，2. 78 (1H，
m，H-4b )，1.38 ( 3H，s，3-CH3 )；13C NMR (125
MH
z
，DMS0-'6)5:169.5 (C-1)，164. 4 (C-6)，163. 5
(C-8)，142. 2 (C-4a)，106. 8 (C-5)，100. 1 (C-8a)，
100. 9 ( C-7 )，75. 4 ( C-3 )，33. 8 ( C-4 )，20. 3 (3-
CH3)。以上数据与文献[8]报道基本一致，鉴定该化
合物为 6-hydroxymellein。
化合物4白色粉末（CD3OD);分子式为C0
H10O3;1HNMR(500 MH
z
，CD30D)5:7.50 (1H，m，
H-6)，7.06 (1H，m，H-5)，6.84 (1H，m，H-7)，4.83
(1H，dd，J=8. 1，3.9 H
z
，H-4)，2.89 (2H，m，H-2a，
H-2a)，2.66 (1H，m，H-2b)，2.29 (1H，m，H-3a)，
2. 10 (1H，m，H-3b);13CNMR (125 MH
z
，CD30D)
5:206.4 (C-1)，163. 7 (C-8)，148.6 (C-4a)，138.0
(C-6)，119. 0 (C-5)，117. 8 (C-7)，116.6 (C-8a)，
68.4 (C-4)，36. 1 (C-2)，32.5 (C-3)。以上数据与
文献报道[9]基本一致，鉴定该化合物为4, 8-di-
hydroxy-1-tetralone。
化合物5白色粉末（
dmso
);分子式为C^H。
O2;1HNMR(500 MH
z
，DMS0-'6)$:9. 31 (1H，s，1-
Vol
. 30卢梦梦等:广藿香内生真菌+"366 )?*?&>
A
630次级代谢产物及其细胞毒活性研究
1179
OH)，7.41(lH，d, N=8.3 Hz，H-4)，7.32 (3H，m,
H-3,H-5,H-6),6. 87 (1H,d,N = 7. 5 Hz,H-7),
3.99(3H，
s
，8-CH3);13CNMR(125MH
z
，DMSO-
'6)$:155.6 (C-8)，154. 1 (C-1)，136. 5 (C-4a)，
127.6(C-3)，126.3(C-6)，121.1(C-5)，118.6(C-
4)，114.7 (C-8a)，110.2 (C-2)，104.5 (C-7)，56.2
(8-OCH%)。以上数据与文献(10)报道基本一致，鉴
定该化合物为 8-methoxy-1-naphtho10
化合物B白色粉末（CD3OD);分子式为C12
H20O3 ；1HNMR(500 MHz，CD3OD)5：5.58 (1H，m，
H-7)，4.65 (1H，d，N = 11.2 Hz，H-5)，3.46 (1H，d，
N=3.5 Hz，H-3)，2.34 (2H，m，H-4)，1.67 (3H，m，
H-12)，1.64(3H，t，N = 1.2Hz，H-11)，1.29(4H，〇-
verlapped，H-8，H-9)，0.90(3H，d，N=6.7Hz，H-
10) ；13C NMR (125 MHz，CD3OD) 5： 180. 7 ( C-1 )，
133.5(C-6)，127.3(C-7)，90.2(C-5)，77.5(C-
3)，45.7(C-2)，32.5(C-4)，27.1(C-8)，23.5(C-
9)，14.4 (C-10)，13.4 (C-12)，10.6 (C-11)。以上
数据与文献[11]报道基本一致，鉴定该化合物为He-
licascolideA。
化合物7白色粉末（CD3OD);分子式为C10
H12O3 ；1H NMR(500 MH
z
，CD3OD)5:7. 18 (1H，t
，J
= 8.3Hz，H-5)，6.33(2H，d，N = 8.3Hz，H-4，H-
6)，3.09(2H，t，J=7.6Hz，H-2’），1.70(2H，m，H-
3，），0.97 (3H，m，H-4，）；13C NMR (125 MHz，
CD3OD)5:209.6 (C-r)，163.6(C-3)，163.6(C-
1)，137.0 (C-5)，111.5(C-2)，108.6 (C-4)，108.5
(C-6)，47. 8 (C-2’），19. 1 (C-3’），14.4 (C-4’）。以
上数据与文献[12]报道基本一致，鉴定该化合物1-
(2，6-dihydroxypheny1) Iutan-1-one。
表
1
Table 1
化合物8 白色粉末（CD3OD);分子式
C8H8O3 ；1H NMR(500 MH
z
，CD3OD)5:7.20 (1H，t，
J=8.8,8.2 Hz，H-3)，6.33 (2H，d，J=8.2 Hz，H-2,
H-4)，2.68 (3H，
s
，H-8);13C NMR (125 MHz，
CD3OD)5:207. 1 (C-7)，163.7 (C-1，C-5)，137.4
(C-3)，111.6 (C-6)，108.4 (C-2，C-4)。以上数据
与文献[12]报道基本一致，鉴定该化合物为1-(2,6-
dihydroxyphenyl) ethan-1-one。
化合物9黄色油状液体（CD3OD);分子式CD
H22O4；1HNMR(500 MH
z
，CD3OD)5:7.71 (2H，m，
H-3，H-6)，7.61 (2H，m，H-4，H-5)，4.07 (4H，d，J
= 7.2 Hz，H-8，H-8W，2.03 (2H，m，H-9，H-9’），
0.98(12H，d，J = 8.4Hz，H-10，H-11，H-10’，H-
11’）；13CNMR(125MH
z
，CD3OD)5:169.5(C-7，C-
7’），133.7(C-1，C-2)，132.5(C-4，C-5)，130.0(C-
3，C-6)，66.8 (C-8，C-8’），31.8 (C-9，C-9’），20.4
(c-10，c-11，c-10’c-1r)。以上数据与文献[13]报
道基本一致，鉴定该化合物为Diisobutyl phthalate。
3.2细胞毒活性
采用SRB法对所有分离得到的化合物1 ~9进
行了细胞毒活性的测试。在100 %m〇l/L浓度下，只
有化合物 1、5、6、7 对 SF-268、MCF-8、NCI-H460、
HepG-2四株肿瘤细胞有不同程度的抑制活性。进
一步对化合物1、5、6、7进行IC50值测试，结果表明，
化合物1和5对这4株肿瘤细胞的抑制活性较弱，
其IC50值在32. 81 ] 100 %m〇l/L之间，而化合物6
和7具有较好的抑制活性，对这四株肿瘤细胞的
IC50值分别为 21. 7、16. 52、21. 86、28. 42 和 27. 34、
24. 85、21. 09、28. 42 %m〇l/L，值得进一步研究。
化合物
1
、
5
、
6
、
7
对四株肿瘤细胞株的
IC™
值
= 3)
IC
50
values of compounds 1
，
5
，
6
，
7 against four tumor cells ( %±*; = 3)
化合物
Compounds
肿瘤细胞半数致死浓度
I50
（％
mol/L)
__________________________________________________________________________
SF-268 MCF-7
42.23 ±1.69
32.81 ±0.69
16.52 ±0.31
24.85 ±0.82
3.09 ±0.27
NCI-H460
66.22 ±4.72
85.16 ±3.33
21.86 ±1.84
21.09 ±1.99
2.43 ±0.15
HepG-2
46.61 ±2.91
>100
21.07 ±0.74
28.42 ±4.15
1.39 ±0.18
1
5
71.9 ±5. 02
4557 ±1.68
21.74 ±0.47
27.34 ±3.67
2.37 ±0.35
6
7
顺销
Cisplatin
4讨论
轮层炭壳属（+"366)是一类重要的木材腐朽
菌，研究发现这类真菌能产生细胞毒、抗氧化和抗
HIV等活性代谢产物[14—16]。2008年，Zhang等[17]从
蝗螂肠道共生真菌+. 中分离得到了免疫
1180
天然产物研究与开发
Vo
1. 30
抑制活性显著的新骨架炭壳菌聚酮
Dales>nJ
A
和
Dalesconol
B
。2011 年，
Zhang
等(18)进一■步对该共生
an-4-one by
Phialophora grei
5
ata[
J].
Ph■ytochemistry
，
1999
，
50:1337-1340.
8 Wang HJ(
王慧君），
Shi WS(
史文思），
Zhu HJ(
朱华结）
.
A new isocoumarin compound from marine-derived fungus
Hansforyip sinuosae[J]. Nat Pr
〇
o Res De
(天然产物研究
真菌扩大培养和分离纯化，从中发现了 4类新骨架，
其中包括7个聚酮类新化合物，它们具有很好的免
疫抑制活性。2016年
Zhang
等[19]又从+
)酵液中分离到1个能诱导大鼠骨髓间
质干细胞分化的新骨架化合物
selesconol
。2015年，
Kongyen
等[20]从红树林内生真菌
D
.
eschscholtzii
PSU
-
STD
57中分离得到具有一定抗菌活性的新化合
与开发），
2016,28 :179-181.
9 KokubunT
，
VeitchNC
，
BridgePD
，
oisocouma-
rins and a tetralone from
Cytospora eucalypticolca
[ J ].
Phyto-
chemistry，2003
，
62
：
779-782.
10 Li DL(
李冬利），
Wu ZC(
吴正超），
Chen YC(
陈玉婵），
e
al.
Chemical constituents of endophytic fungus
NoPulisporilim
物
hydronaphthalenone
。本研究从广藿香内生真菌
D
.
eshscholi
A
630中分离得到了 9个化合物，采用
SRB
法对所有分离得到化合物1 ~9进行了细胞毒
活性测试，结果表明化合物6和7对肿瘤细胞株
SF
-
268、
MCF
-7、
NC
I-
H
460、
HepG
-2 具有较好的细胞毒
活性，其1
C
,。值在16.52 ~28.42 %
m
〇
l/L
之间，具有
较好的开发利用价值。因此，今后有必要对这2个
化合物进行深入系统的研究，包括对其它肿瘤细胞
株的抑制活性。本研究丰富了轮层炭壳属真菌天然
产物的结构多样性，并为进一步研究该属真菌的生
物活性提供了基础。
参考文献
1 Xie JQ (
谢佳倩
），Chen YC (
陈玉婵
），Sun ZH (
孙章华），）
Sesquiterpenoids of endophytic fungus
Cerrena
sp. from
Pogostemon cablin
and their cytotoxic activities [ J ].
Chin J
Chi :a# :)(
中国中药杂志），
2017，42 :1693-1698.
2 Wang Y(
王营
），Li HH(
李浩华
），Tan GH(
谭国慧），）
al.
Study on communities of endophytic fungi from
Pogostemoo
cablin
and their antimicrobial activities [ J ].
Chin J Chin Ma
t Me'(
中国中药杂志），
2017:657-662.
3 Wang M，Sun ZH，Chen YC
，
et al.
Cytotoxic cochlioquinone
derivatives from the endophytic fungus
Bipolciris sorokiniana
derived from
Pogostemon cablin
[ J ].
Fitoterapia
，
2016，110
：
77-82.
4 Liu HX，Liu WZ，Chen YC
，
e^
al.
Cytotoxic trichotliecene ma-
crolides from the endophyte fungus
Myrothecium roridum
[J]
. J Asican Nat Prod
(e
，
2016，18
：
684-689.
5 Skehan P，Storeng R，Scudiero D
，
e^
al.
New colorimetric cy
totoxicity assay for anticancer-drug screening [ J ]
. J Natl
Cancer Inst
，
1990，82
：
1107-1112.
6
Bode HB，Zeeck A. Sphaerolone and dihydrosphaerolone，two
bisnaphthyl-p)igments from the fungus
Sphaeroosidales
sp. F-
24,707 [ J].
Phytochemistry
，
2000
，
54
：
597-601.
7 Gray LE，Gardner HW，Weisleder D，et
al.
Production and
toxicity of 2
，
3-dihydro-5-hydroxy-2-methyl-H-1-benzopyr-
sp. A4 from
Aquilarid sinensis
[ J ].
Chii J
(
中国中药杂志），
2011
，
36 :3276-3280.
11 Tarman K
，
Palm GJ
，
Porzel A
，
et al.
Helicascolide C
，
a new
lactone from an Indonesian marine algicolous strain of
Daldi-
nii escksckolzii
( Xylariaceae
，
Ascomycota ) [ J ].
Phytockem
-e
，
2012,5(1):83-86.
12 Han XL (
韩秀晒）
.Screening of cytotoxic mangrove endo
phytic fungi and study on its secondary meatlDolities of two
selected strains[ D]. Qingdao
：
Ocean University of China
(中
国海洋大学），
2009.
13 Ji MC(
纪明昌），
Gu
〇
DL(
郭大乐），
Jing SY(
将舜媛），
e
al.
Phenolic compounds from
Pothos skinesis
[ J ].
Nat Prod
Res De(
天然产物研究与开发），
2015
，
27 :609-12.
14 Quang DN
，
Lam DM
，
Hanh NTH
，
e《al Cytotoxic constituents
from the fungus
Daldiniaconcentrica
( Xylariaceae ) [ J ].
Nat
Prd Res2013
，
27 "486-90.
15 LeeIK
，
KimSE
，
YeomJH
，
e
《
anA
，
anovelisoin-
dolinone antioxidant from the ascomycete
Daldinii concentri-
c[ J]. J Antbit2012
，
65 :95-97.
16 Qin XD
，
Dong ZJ
，
Liu JK
，
et al Concentricolide
，
ananti-HIV
agent from the ascomycete
Daldiniaconcentrica
[ J ].
Helv
Chi Aca
，
2006
，
89 : 127-133.
17 Zhang YL
，
Ge HM
，
Zhao W
，
et al.
Unprecedented immuno
suppressive polyketids from
Daldinii escksckolzu
，
a mantis-
associated fungus[ J]
. Angew Chern Int
Jdi
，
2008
，
47
：
5823-
5826.
18 Zhang YL
，
Zhang J
，
Jiang N
，
et al.
Immunosuppressive
polyketides from mantis-associated
Daldinii escksckolzn[_
J].
J Am ChemSoc
，
2011
，
133 "5931-5940.
19 Zhang AH
，
Tan R
，
Jiang N
，
et
al.
Selesconol
，
a fungal
polyketede that induces stem cell differentiation [ J ].
Org
-e
，
2016,18 :5488-5491.
20 Kongyen W
，
Rukachaisirikul V
，
Phongpaichit S
，
e
《
al. A new
hydronaphthalenone from the mangrove derived
Daldinia
eshshotU PSU-STD57 [ J]. Naf PrdRes De
(天然产物研
究与开发），
2015,29:1995-1999.
2024年5月11日发(作者：邰梓)
天然产物研究与开发！
文章编号：
1
〇〇
1'880(2018)7-1176'5
2018,30:1176-1180
广蕾香内生真菌
Daldinia
eschscholtzii
C
630
次级代谢产物及其细胞毒活性研究
卢梦梦
U
，陈玉婵
刘洪新
李赛妮
李浩华
陶美华
郝再彬
2,
章卫民
1!
1
广东省微生物研究所省部共建华南应用微生物国家重点实验室广东省菌种保藏与应用重点实验室广东省微生物应
用新技术公共实验室，广州
510070%2
桂林理工大学化学与生物工程学院，桂林
541006
摘要
:
采用色谱法从广蕾香内生真菌
Dalna eCshOzi
发酵液中分离得到
9
个化合物，通过波谱数据分析
分另
"
鉴％
为
dihydrosphaerolone ( 1 )
、
2
，
3-dihydro-5-hydroxy-2-methyl'2-1-benzopyran-4-one ( 2 )
、6
-hydroxymellein
(3)
、
4
，
8-dihydroxy-1 -tetralone(4)
、
8-methoxy-1 -naphthol(5)、helicascolide A(6)
、
1-(2,6-dihydroxyphenyl) butan-1 -
one(7)
、
1-(2,6-dihydroxyphenyl)ethan-1-one(8)、diiobutyl phthalate(9
)，其中化合物
5、9
为首次从该属真菌中分
离得到。细胞毒活性测试显示化合物
6
、
7
对肿瘤细胞
SF-268
、
MCF-7
、
NCI-H460
、
HepG-2
具有较好的抑制活性，
1C
,。值在
16.52 ~28.42 %m
〇
l/L
之间。
关键词
:
广藿香
;
内生真菌
;Dalia eCshOzi%
次级代谢产物;细胞毒活性
中图分类号：
R284. 1 ;Q93-3
文献标识码
:A D0I
：
10. 16333/j. 1001 -6880.2018. 7. 014
Secondary
Metabolites
of
Endophytic
Daldinia
eschscholtzii
A
630
from
Pogostemon
cablin
and
Their
Cytotoxic
Acti'^ities
LU
Meng
-
meng1'2，CHEN
Yu
-
chan1，LIU
Hong
-
xin1，LI
Sai
-
ni1，LI
Hao
-
liua
1，
TAOMei
-
hua^HAO
Zai
-
bin
2,
ZHANG
Wei
-
min
1*
1
State Key Laboratory of Applied Microbiolo^^y Southern China，Guangdong Provincial Key Laboratory of
Microbial Culture Collection and Application
，
Guangdong Open Laboratorr
〇
o Applied Microbiology
，
Guangdong Institute
2
Microbiology，Guangzhoo 510070
，
China;
College oj Chemistrr and Bioengineering，Guiliri Universitt
〇
o Technology，Guilin 541006，China
Abstract
：
Nine compounds were isolated from the fermentation brotli of endophytic fungus
Daldinia eschscholtzii
from
Pogostemoo cablin
by using various chromatographic metliods such as silica gel，reverse silica gel，Sephadex LH-20,pre
parative TLC and HPLC. Their structures were identified as dihydrosjDhaerolone (l)
42-1-benzopyran--one(2)
，
6-hydroxymellein (3)
，
4,8-dihydroxy-1-tetralone (4)
cclide A ( 6 )，1 - ( 2
phthalate(9)
，
2,3-dihydro-5-hydroxy-2-methyl-
，
8-methoxy-1-naphthol (5)
，
helicas-
，6
-dihydroxyphenyl) -butan-1 -one ( 7 )，1 -( 2，6-dihydroxyphenyl ) ethan-1 -one ( 8 )，diisobutyl
，
respectively，based on spectroscopic analysis. Among them，compounds 5 and 9 were isolated from the ge
nus Dalia for the first time. Compounds 6 and 7 showed moderate growth-inhibitory activities i ,to against SF-268
，
MCF-7，NCI-H460 and HepG-2 tumor cell lines with IC
50
values ranging from16. 52 to 28.42 %mol/L.
Key words
：
Pogostemon cablin
% endophytic fungus %
Daldinii eschscholtzii
% secondary metabolites % cytotoxic activity
广霍香
（PogoSmon
cabn
(
Blanco
)
Benth
.]为
唇形科
（Labiatae
)刺蕊草属
（Pogotmon
Desf
.)植
物，原产于东南亚地区，我国引种栽培历史悠久，可
追溯到梁代或以前。广藿香作为我国著名的“十大
收稿日期
:
2017-10-12
接受日期
:
2018-03-13
基金项目：国家自然科学基金（
31600271
)%国家
973
前期专项（
20
14CB460613
)%
广东省科技计划（
2015 A030302060
，
2
。
14A
。
3
。
3
。
4
。
5
。
）；广东省自然科学基金（
2015A0303
13710
)
广药”之一，是30多种中成药的主要组成原料。中
国药典记载，广藿香全草入药，味辛，性微温，具有芳
香化浊、开胃止呕、发表解暑等功效。现代药理研究
表明广藿香具有抗菌、抗炎、止咳和调节肠道功能、
抗肿瘤等作用[1]。
植物体内普遍存在内生真菌，它们与宿主协同
进化，形成了互惠共生关系，能产生与宿主植物相同
或相似的代谢产物。本实验室前期对广藿香内生真
菌的类群进行了分析，发现其内生真菌多样性丰富，
*
通信作者
:
wmzhang@gdim. cn
Vol
. 30
卢梦梦等:广藿香内生真菌+"366
e
*—
A
630次级代谢产物及其细胞毒活性研究
1177
25个属40个
的活性次
[
2
]，为了发掘广藿香内生真菌
真菌
Arne
"
sp
.
2
)，LPM
I-
1640培养基（吉 物医药技术有限公
广州化学试剂厂。
产物，对其
)，其余试剂均为分析纯，
实验方法
A
593
'
Bipolaris
sorokiniana
A
606
“
Myrotheciumrori
-
A
553进了 研究，发现了多个具有细胞毒
活性的 产物[1，3,4]。 期研究发现广香 ：
真菌+"366
e
*
h
*
ho
3>
A
630发酵液提取物的代
产物 ，且该提取物对神 细胞
SF
-268和
腺癌细胞
MCF
-7具有较好的抑制活性。为了进
一步发掘广藿香 真菌的活性 产物，本研究
对菌株
A
630发 的乙酸乙酯部位进行了分离纯
2.1菌株与发酵培养
株
A
630
2012
年
10
月自广东省 马
镇采集的广藿香枝条中分离得到，广香由广东
药科大学严寒静教授鉴定为
^ootmo
ca
.
n
。将
离得到的菌株
DNA
制备，采用引物
ITS
1 (5
ITCCGTAGGTGAAACCTGCGG
-3
W
) “
ITS
4(5'-
化，从中分离获得9个化合物（图1 )，其中化合物5'
]为该属首次分离得到，化合物
B
、7对 细胞
SF
-
268'
MCF
-7 、
NCI
-
H
460 、
HepG
-2 具有较好的细胞毒
活性，
IC50
16.52 〜28.42 %
mol/L
之间。
图
1
化合物
1~9
的结构式
Fig. 1 Structures of compounds 1 -9
1仪器与试剂
PZ
1000
B
旋转式大容量普通摇床（武汉瑞华仪
器设备有 ），旋 发仪（上海亚荣生化仪器
厂），超净工作台（上海恒益科技有 ），
Hang
ping
FA
2004 电 析天平（上海天平仪器厂），
LC
-
20
A
色谱仪（日 ），
WHF
-
203
B
用 析仪（上海禾汽化工科技有 -
司），核磁 波谱仪（
Bruker
公司），酶仪（
Bio
-
Tek
)， 化碳培养箱
（Shellab
)，倒置显
微镜
（Nikon
)。
色谱硅胶（
100
〜
200、200
]300目，青岛海洋
化工厂），
GF254
薄层板
（Merck
)，反硅
胶（40 ] 75 %
m，Fuji
Silysia
Chemical
Ltd
.)，凝胶
Sephadex
LH
-20( 18 〜110 %
m，Amersham
Biosciences
Ltd
.
)，MCI
GEL
(日本三菱化学株
S
；
G
)，
Sulforho
-
damine
B
sodium
salt
(
SLB
)(
Sigma-Aldrich
公司），
DMS
0(
Sigma-Aldrich
)，销（齐鲁制药有限公
司），胎牛血清（杭州季青生物 材料有 、
TCCTCCGCTTATTGATATGC
-3
W
反向）扩增分离菌
株
rDNA
I
TS
区，测序获得的序列通过
BLAST
:
NCBI
上进 性序列检 析， 与株
+"366
e
*
h
*
ho
3>
UM
1400 (
GenBank
登录号为
J
X
966561)的相似度为100
C
，因此鉴定株
A
630
为 +"366
e
*
h
*
hd
> (
GenBank
登录号为
KF
494831)，菌株保存于广东省微生物研究所。
发酵培养基为马铃薯 培养基（
PD
):
马铃薯 200
g
/
L
，
KH2PO4
0. 3
C
，葡萄糖 2
C
，
KH2P
0
4
0. 3
C
，维生素
Bi
0. 01
C
，
MgS
0
4
,7
H
20
0. 15
C
，
pH
自然。在无条件下，用接种铲挑取3
块0.5
X
0.5
cm
2的菌丝体接种到装有250
mL
培
养基的500
mL
三角瓶内。在120
rpm
、28 °
C
条件下
荡培养5天，得到 。然后将 积
数10
C
的接 接到装有250
mL
培养基的500
mL
三角瓶内，相同条件下培养7天，共发50
L
。
2.2分离纯化
发 用4层纱布过滤后，滤 乙酸乙酯反
复萃取4次，45 ~ 50
C
下减压浓缩得浸膏20. 1
g
。
浸膏经
MCI
柱以甲醇-水（70: 30 ] 100: 0)梯度洗
，用薄层色谱（
TLC
)检测（显色剂：茴香醛-浓硫
酸），合 组分，得到10个组分（
M
1 ~
M
10)〇
M6
经反硅 层析 -水（80: 20〜100
k
)
t
，到组分
M6
-
1
〜
M6
-，将
M6
-
1
经过
Sepha
-
dex
LH
20以纯甲醇洗脱得到
M
6-1-1〜
M
6-1浓，将
组分
M
6-1-经反制 乙腈-水(70: 30) ，
得到化合物 1(8. 0
mg
)。
M
9 经过
Sephadex
LH
-20
氯 -甲醇（50: 50) ，到
M
9-1 〜
M
9-，
将组分
M
9浓经反相制 乙腈-水（60: 40)
i
，到化合物5(12.
0
mg
)。
M
3经反制：以
乙腈-水(50:50) 纯化，得到化合物7(5.1
mg
)。
M
5经
Sephadex
LH
甲0以纯甲醇洗脱得到
M
5-]
M
5'，组
M
5-1通反相制 乙腈-水（70:
30)洗脱纯化，得到化合物6(3.1
mg
)。组分
M
5甲
1178
天然产物研究与开发
Vo
1. 30
通过反相制备柱以乙腈-水（40: 60)洗脱纯化，得到
化合物3(2. 2
mg
)、化合物4(5. 3
mg
)。组分
M
7经
S
e
phad
e
x
LH
水0以纯甲醇洗脱得到
M
7' ~
M
7'，
M
7水过正相柱以正己烷-乙酸乙酯（
20
:
1
~
1
:
1
)梯
(C-1)，173.0 (C-3)，161.7 (C-8)，156.5 (C-8’），
128. 0(C-8a’，151.6 (C-4’，129. 5 (C-4a)，129.4
(C-4a’，128.9 (C-6’，118.7 (C-4)，118.6 (C-7)，
118.3(C-7’，118.3 (C-5’，115.5 (C-5)，114.2
(C-8a)，113.9 (C-6)，113.9 (C-3’，98.7 (C-2’），
63.7 (C-r)，42.7 (C-2’。以上数据与文献[6]报道
基本一致，鉴定该化合物为Dihydrosphaerolone。
化合物2白色粉末（CD3OD);分子式为C。
H10O3 ；[H NMR (500 MH
z
，CD30D)5:7. 17 (1H，t，N
= 8.3Hz，H-7)，6.29(1H，dd，N = 8.3，1.0Hz，H-
度洗脱得到组分
M
7水水~
M
7水水，将
M
7水水过半制
备柱以乙腈-水（40: 60)洗脱得化合物2 (5. 4
mg
)，
组分
M6
过
Sephadex
LH
水0以纯甲醇洗脱得到皿
6
-
1 ~
M
6-3，
M
6-1过正相柱以石油醚-乙酸乙酯（30: 1
~1:1)梯度洗脱，得到化合物9(2.1
mg
)。组分
M
4
经反相柱以甲醇-水（80:
10
~
100
:
0
)梯度洗脱得到
M
4-1 ~
M
4-6，
M
4-6经正相柱以石油醚-乙酸乙酯（40
:
1
~
10
:
1
)梯度洗脱，得到化合物
8
(
8.0
mg
)。
2?细胞毒活性测试
采用
SRB
法[
5
]测定化合物的细胞毒活性。取
对数期生长的
SF
-268、
MCF
-7、
NCI
水460、
HepG
-2 细
胞，用胰酶消化，台盼蓝染色计数，台盼蓝排斥实验
检测细胞活力大于95%后，用新鲜培养基调整细胞
浓度为3
x
10
4
个/
mL
。将肿瘤细胞接种于96孔板，
每孔加入180
%L
的细胞悬浮液，并设3个空白孔调
零，于37 °
C
、5%
C
〇2培养箱培养24
h
。待细胞贴壁
后，每孔加人
20
%L
待测样品，空白对照加
20
%L
培
养基，以顺铂为阳性对照。置于
C
〇
2
培养箱中培养
72
h
后，加入50
%L
50%的冷
三
氯醋酸固定细胞，4
C
条件下放置1
h
，用蒸馏水洗涤5次，空气中自然
干燥。然后加人由1%冰醋酸配制的4
mg
/
mL
的
SRB
溶液，每孔100
%L
，室温中染色30
m
5,去上清，用1%
冰醋酸洗涤5次，空气干燥。最后每孔加入200
%L
10
mmol/L
的
Tri
s溶液，用酶标仪测定570
nm
处的吸光
值(
A
)，用以下公式计算化合物对细胞生长的抑制率，
采用
S
i
gmaP
l
o
t 10.0软件计算I
C50
值。
细胞生长抑制率（％ )=
OD
空白对照组
P
+样品组
Q
+空白对照组
x
100 %
3实验结果
3.1结构鉴定
化合物1黄色粉末（
DMSO
);分子式为
C
m
H
14
06;
1HNMR
(500
MH
z
，
DMS
0-'6)5:13.87(1
H
，
s
，8-
OH
)，8.02 (1
H
，
d，N
=7.9
Hz
，
H
-5)，7.49 (2
H
，
m
，
H
-6，
H
-4
a
’），7.39 (1
H
，
t
，
N
=7.9
Hz
，
H
-5’），7.02
(2
H
，
dd
，
overlapped
，
H
-7，
H
-7 ’），5. 97 (1
H
，
s
，
H
-2 )，
5.16 (1
H
，
t
，
N
=7.3
Hz
，
H
-
r
)，2.98 (1
H
，
dd，N
=
13.3,7. 2
Hz
，
H
-2
a
’，2. 00 (1
H
，
dd
，
N
= 13.3,7.5
H
z
，
H
-21
);13CNMR
(125
MH
z
，
DMS
0-'6)$:190. 8
6)，6.24 (1H，dd
，J
= 8.3，1.0 H
z
，H-8 )，4.36
(1H，m，H-2)，2.54(1H，dd，N = 17.2，12.4Hz，H-
3a)，2.48，（1H，dd，J = 17.2,3.4H
z
，H-31)，1.33
(3H，d，J = 8.3 H
z
，1.0,2-Me)；13C NMR (125
MH
z
，CD30D)5:199.6 (C-4)，162.5 (C-9)，162.5
(C-5)，138.5 (C-7)，109.5 (C-6)，108.5 (C-10)，
108. 0(C-8)，74. 7 (C-2)，44. 1 (C-3)，21.0 (2-
Me)。以上数据与文献[7]报道基本一致，鉴定该化
合为 2,3-dihydro-5-hydroxy-2-methyl-42-1-1enzopyr-
an-4-one。
化合物3浅黄色油状液体(DMSO);分子式为
C10H10O4 ；[H NMR (500 MH
z
，DMSO-'6) 5： 11.12
(1H，s，8-OH)，10.61 (1H，s，6-OH)，6.22 (1H，d，J
= 2.2 H
z
，H-5)，6. 17 (1H，d，J = 1.9 H
z
，H-7)，
4.66 (1H，m，H-3)，2. 90 (1H，m，H-4a)，2. 78 (1H，
m，H-4b )，1.38 ( 3H，s，3-CH3 )；13C NMR (125
MH
z
，DMS0-'6)5:169.5 (C-1)，164. 4 (C-6)，163. 5
(C-8)，142. 2 (C-4a)，106. 8 (C-5)，100. 1 (C-8a)，
100. 9 ( C-7 )，75. 4 ( C-3 )，33. 8 ( C-4 )，20. 3 (3-
CH3)。以上数据与文献[8]报道基本一致，鉴定该化
合物为 6-hydroxymellein。
化合物4白色粉末（CD3OD);分子式为C0
H10O3;1HNMR(500 MH
z
，CD30D)5:7.50 (1H，m，
H-6)，7.06 (1H，m，H-5)，6.84 (1H，m，H-7)，4.83
(1H，dd，J=8. 1，3.9 H
z
，H-4)，2.89 (2H，m，H-2a，
H-2a)，2.66 (1H，m，H-2b)，2.29 (1H，m，H-3a)，
2. 10 (1H，m，H-3b);13CNMR (125 MH
z
，CD30D)
5:206.4 (C-1)，163. 7 (C-8)，148.6 (C-4a)，138.0
(C-6)，119. 0 (C-5)，117. 8 (C-7)，116.6 (C-8a)，
68.4 (C-4)，36. 1 (C-2)，32.5 (C-3)。以上数据与
文献报道[9]基本一致，鉴定该化合物为4, 8-di-
hydroxy-1-tetralone。
化合物5白色粉末（
dmso
);分子式为C^H。
O2;1HNMR(500 MH
z
，DMS0-'6)$:9. 31 (1H，s，1-
Vol
. 30卢梦梦等:广藿香内生真菌+"366 )?*?&>
A
630次级代谢产物及其细胞毒活性研究
1179
OH)，7.41(lH，d, N=8.3 Hz，H-4)，7.32 (3H，m,
H-3,H-5,H-6),6. 87 (1H,d,N = 7. 5 Hz,H-7),
3.99(3H，
s
，8-CH3);13CNMR(125MH
z
，DMSO-
'6)$:155.6 (C-8)，154. 1 (C-1)，136. 5 (C-4a)，
127.6(C-3)，126.3(C-6)，121.1(C-5)，118.6(C-
4)，114.7 (C-8a)，110.2 (C-2)，104.5 (C-7)，56.2
(8-OCH%)。以上数据与文献(10)报道基本一致，鉴
定该化合物为 8-methoxy-1-naphtho10
化合物B白色粉末（CD3OD);分子式为C12
H20O3 ；1HNMR(500 MHz，CD3OD)5：5.58 (1H，m，
H-7)，4.65 (1H，d，N = 11.2 Hz，H-5)，3.46 (1H，d，
N=3.5 Hz，H-3)，2.34 (2H，m，H-4)，1.67 (3H，m，
H-12)，1.64(3H，t，N = 1.2Hz，H-11)，1.29(4H，〇-
verlapped，H-8，H-9)，0.90(3H，d，N=6.7Hz，H-
10) ；13C NMR (125 MHz，CD3OD) 5： 180. 7 ( C-1 )，
133.5(C-6)，127.3(C-7)，90.2(C-5)，77.5(C-
3)，45.7(C-2)，32.5(C-4)，27.1(C-8)，23.5(C-
9)，14.4 (C-10)，13.4 (C-12)，10.6 (C-11)。以上
数据与文献[11]报道基本一致，鉴定该化合物为He-
licascolideA。
化合物7白色粉末（CD3OD);分子式为C10
H12O3 ；1H NMR(500 MH
z
，CD3OD)5:7. 18 (1H，t
，J
= 8.3Hz，H-5)，6.33(2H，d，N = 8.3Hz，H-4，H-
6)，3.09(2H，t，J=7.6Hz，H-2’），1.70(2H，m，H-
3，），0.97 (3H，m，H-4，）；13C NMR (125 MHz，
CD3OD)5:209.6 (C-r)，163.6(C-3)，163.6(C-
1)，137.0 (C-5)，111.5(C-2)，108.6 (C-4)，108.5
(C-6)，47. 8 (C-2’），19. 1 (C-3’），14.4 (C-4’）。以
上数据与文献[12]报道基本一致，鉴定该化合物1-
(2，6-dihydroxypheny1) Iutan-1-one。
表
1
Table 1
化合物8 白色粉末（CD3OD);分子式
C8H8O3 ；1H NMR(500 MH
z
，CD3OD)5:7.20 (1H，t，
J=8.8,8.2 Hz，H-3)，6.33 (2H，d，J=8.2 Hz，H-2,
H-4)，2.68 (3H，
s
，H-8);13C NMR (125 MHz，
CD3OD)5:207. 1 (C-7)，163.7 (C-1，C-5)，137.4
(C-3)，111.6 (C-6)，108.4 (C-2，C-4)。以上数据
与文献[12]报道基本一致，鉴定该化合物为1-(2,6-
dihydroxyphenyl) ethan-1-one。
化合物9黄色油状液体（CD3OD);分子式CD
H22O4；1HNMR(500 MH
z
，CD3OD)5:7.71 (2H，m，
H-3，H-6)，7.61 (2H，m，H-4，H-5)，4.07 (4H，d，J
= 7.2 Hz，H-8，H-8W，2.03 (2H，m，H-9，H-9’），
0.98(12H，d，J = 8.4Hz，H-10，H-11，H-10’，H-
11’）；13CNMR(125MH
z
，CD3OD)5:169.5(C-7，C-
7’），133.7(C-1，C-2)，132.5(C-4，C-5)，130.0(C-
3，C-6)，66.8 (C-8，C-8’），31.8 (C-9，C-9’），20.4
(c-10，c-11，c-10’c-1r)。以上数据与文献[13]报
道基本一致，鉴定该化合物为Diisobutyl phthalate。
3.2细胞毒活性
采用SRB法对所有分离得到的化合物1 ~9进
行了细胞毒活性的测试。在100 %m〇l/L浓度下，只
有化合物 1、5、6、7 对 SF-268、MCF-8、NCI-H460、
HepG-2四株肿瘤细胞有不同程度的抑制活性。进
一步对化合物1、5、6、7进行IC50值测试，结果表明，
化合物1和5对这4株肿瘤细胞的抑制活性较弱，
其IC50值在32. 81 ] 100 %m〇l/L之间，而化合物6
和7具有较好的抑制活性，对这四株肿瘤细胞的
IC50值分别为 21. 7、16. 52、21. 86、28. 42 和 27. 34、
24. 85、21. 09、28. 42 %m〇l/L，值得进一步研究。
化合物
1
、
5
、
6
、
7
对四株肿瘤细胞株的
IC™
值
= 3)
IC
50
values of compounds 1
，
5
，
6
，
7 against four tumor cells ( %±*; = 3)
化合物
Compounds
肿瘤细胞半数致死浓度
I50
（％
mol/L)
__________________________________________________________________________
SF-268 MCF-7
42.23 ±1.69
32.81 ±0.69
16.52 ±0.31
24.85 ±0.82
3.09 ±0.27
NCI-H460
66.22 ±4.72
85.16 ±3.33
21.86 ±1.84
21.09 ±1.99
2.43 ±0.15
HepG-2
46.61 ±2.91
>100
21.07 ±0.74
28.42 ±4.15
1.39 ±0.18
1
5
71.9 ±5. 02
4557 ±1.68
21.74 ±0.47
27.34 ±3.67
2.37 ±0.35
6
7
顺销
Cisplatin
4讨论
轮层炭壳属（+"366)是一类重要的木材腐朽
菌，研究发现这类真菌能产生细胞毒、抗氧化和抗
HIV等活性代谢产物[14—16]。2008年，Zhang等[17]从
蝗螂肠道共生真菌+. 中分离得到了免疫
1180
天然产物研究与开发
Vo
1. 30
抑制活性显著的新骨架炭壳菌聚酮
Dales>nJ
A
和
Dalesconol
B
。2011 年，
Zhang
等(18)进一■步对该共生
an-4-one by
Phialophora grei
5
ata[
J].
Ph■ytochemistry
，
1999
，
50:1337-1340.
8 Wang HJ(
王慧君），
Shi WS(
史文思），
Zhu HJ(
朱华结）
.
A new isocoumarin compound from marine-derived fungus
Hansforyip sinuosae[J]. Nat Pr
〇
o Res De
(天然产物研究
真菌扩大培养和分离纯化，从中发现了 4类新骨架，
其中包括7个聚酮类新化合物，它们具有很好的免
疫抑制活性。2016年
Zhang
等[19]又从+
)酵液中分离到1个能诱导大鼠骨髓间
质干细胞分化的新骨架化合物
selesconol
。2015年，
Kongyen
等[20]从红树林内生真菌
D
.
eschscholtzii
PSU
-
STD
57中分离得到具有一定抗菌活性的新化合
与开发），
2016,28 :179-181.
9 KokubunT
，
VeitchNC
，
BridgePD
，
oisocouma-
rins and a tetralone from
Cytospora eucalypticolca
[ J ].
Phyto-
chemistry，2003
，
62
：
779-782.
10 Li DL(
李冬利），
Wu ZC(
吴正超），
Chen YC(
陈玉婵），
e
al.
Chemical constituents of endophytic fungus
NoPulisporilim
物
hydronaphthalenone
。本研究从广藿香内生真菌
D
.
eshscholi
A
630中分离得到了 9个化合物，采用
SRB
法对所有分离得到化合物1 ~9进行了细胞毒
活性测试，结果表明化合物6和7对肿瘤细胞株
SF
-
268、
MCF
-7、
NC
I-
H
460、
HepG
-2 具有较好的细胞毒
活性，其1
C
,。值在16.52 ~28.42 %
m
〇
l/L
之间，具有
较好的开发利用价值。因此，今后有必要对这2个
化合物进行深入系统的研究，包括对其它肿瘤细胞
株的抑制活性。本研究丰富了轮层炭壳属真菌天然
产物的结构多样性，并为进一步研究该属真菌的生
物活性提供了基础。
参考文献
1 Xie JQ (
谢佳倩
），Chen YC (
陈玉婵
），Sun ZH (
孙章华），）
Sesquiterpenoids of endophytic fungus
Cerrena
sp. from
Pogostemon cablin
and their cytotoxic activities [ J ].
Chin J
Chi :a# :)(
中国中药杂志），
2017，42 :1693-1698.
2 Wang Y(
王营
），Li HH(
李浩华
），Tan GH(
谭国慧），）
al.
Study on communities of endophytic fungi from
Pogostemoo
cablin
and their antimicrobial activities [ J ].
Chin J Chin Ma
t Me'(
中国中药杂志），
2017:657-662.
3 Wang M，Sun ZH，Chen YC
，
et al.
Cytotoxic cochlioquinone
derivatives from the endophytic fungus
Bipolciris sorokiniana
derived from
Pogostemon cablin
[ J ].
Fitoterapia
，
2016，110
：
77-82.
4 Liu HX，Liu WZ，Chen YC
，
e^
al.
Cytotoxic trichotliecene ma-
crolides from the endophyte fungus
Myrothecium roridum
[J]
. J Asican Nat Prod
(e
，
2016，18
：
684-689.
5 Skehan P，Storeng R，Scudiero D
，
e^
al.
New colorimetric cy
totoxicity assay for anticancer-drug screening [ J ]
. J Natl
Cancer Inst
，
1990，82
：
1107-1112.
6
Bode HB，Zeeck A. Sphaerolone and dihydrosphaerolone，two
bisnaphthyl-p)igments from the fungus
Sphaeroosidales
sp. F-
24,707 [ J].
Phytochemistry
，
2000
，
54
：
597-601.
7 Gray LE，Gardner HW，Weisleder D，et
al.
Production and
toxicity of 2
，
3-dihydro-5-hydroxy-2-methyl-H-1-benzopyr-
sp. A4 from
Aquilarid sinensis
[ J ].
Chii J
(
中国中药杂志），
2011
，
36 :3276-3280.
11 Tarman K
，
Palm GJ
，
Porzel A
，
et al.
Helicascolide C
，
a new
lactone from an Indonesian marine algicolous strain of
Daldi-
nii escksckolzii
( Xylariaceae
，
Ascomycota ) [ J ].
Phytockem
-e
，
2012,5(1):83-86.
12 Han XL (
韩秀晒）
.Screening of cytotoxic mangrove endo
phytic fungi and study on its secondary meatlDolities of two
selected strains[ D]. Qingdao
：
Ocean University of China
(中
国海洋大学），
2009.
13 Ji MC(
纪明昌），
Gu
〇
DL(
郭大乐），
Jing SY(
将舜媛），
e
al.
Phenolic compounds from
Pothos skinesis
[ J ].
Nat Prod
Res De(
天然产物研究与开发），
2015
，
27 :609-12.
14 Quang DN
，
Lam DM
，
Hanh NTH
，
e《al Cytotoxic constituents
from the fungus
Daldiniaconcentrica
( Xylariaceae ) [ J ].
Nat
Prd Res2013
，
27 "486-90.
15 LeeIK
，
KimSE
，
YeomJH
，
e
《
anA
，
anovelisoin-
dolinone antioxidant from the ascomycete
Daldinii concentri-
c[ J]. J Antbit2012
，
65 :95-97.
16 Qin XD
，
Dong ZJ
，
Liu JK
，
et al Concentricolide
，
ananti-HIV
agent from the ascomycete
Daldiniaconcentrica
[ J ].
Helv
Chi Aca
，
2006
，
89 : 127-133.
17 Zhang YL
，
Ge HM
，
Zhao W
，
et al.
Unprecedented immuno
suppressive polyketids from
Daldinii escksckolzu
，
a mantis-
associated fungus[ J]
. Angew Chern Int
Jdi
，
2008
，
47
：
5823-
5826.
18 Zhang YL
，
Zhang J
，
Jiang N
，
et al.
Immunosuppressive
polyketides from mantis-associated
Daldinii escksckolzn[_
J].
J Am ChemSoc
，
2011
，
133 "5931-5940.
19 Zhang AH
，
Tan R
，
Jiang N
，
et
al.
Selesconol
，
a fungal
polyketede that induces stem cell differentiation [ J ].
Org
-e
，
2016,18 :5488-5491.
20 Kongyen W
，
Rukachaisirikul V
，
Phongpaichit S
，
e
《
al. A new
hydronaphthalenone from the mangrove derived
Daldinia
eshshotU PSU-STD57 [ J]. Naf PrdRes De
(天然产物研
究与开发），
2015,29:1995-1999.