2024年5月23日发(作者：道寄松)
人B型脑钠肽(BNP)酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂仅供研究使用
目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关
液体样本中B型脑钠肽(BNP)的含量。
实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人B型脑钠肽(BNP)水平。用纯化的人B型脑钠
肽
(BNP)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入B型脑钠肽(BNP)，
再与
HRP标记的B型脑钠肽(BNP)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗
涤后加底物
TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终
的黄色。颜色的深浅和样品中的
B型脑钠肽(BNP)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测
，通过标准曲线计算样品中人B型脑钠肽(BNP)浓度。
定吸光度（
OD值）
试剂盒组成：
试剂盒组成
说明书
封板膜
密封袋
酶标包被板
标准品：135μg/L
标准品稀释液
酶标试剂
样品稀释液
显色剂A液
显色剂B液
终止液
浓缩洗涤液
48孔配置
1份
2片（48）
1个
1×48
0.5ml×1瓶
1.5ml×1瓶
3 ml×1瓶
3 ml×1瓶
3 ml×1瓶
3 ml×1瓶
3ml×1瓶
（20ml×20倍）×1瓶
96孔配置
1份
2片（96）
1个
1×96
0.5ml×1瓶
1.5ml×1瓶
6 ml×1瓶
6 ml×1瓶
6 ml×1瓶
6 ml×1瓶
6ml×1瓶
（20ml×30倍）×1瓶
2-8℃保存
2-8℃保存
2-8℃保存
2-8℃保存
2-8℃保存
2-8℃保存
2-8℃保存
2-8℃保存
2-8℃保存
保存
样本处理及要求：
1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上
清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心
20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次
离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程
中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/
分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞
浓度达到
100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分
1
钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备
，用手工或匀浆器
用。标本融化后仍然保持
2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4）
。仔细收集上清。分装后一份待
将标本匀浆充分。离心
20分钟左右（2000-3000转/分）
检测，其余冷冻备用。
6.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上
进行试验，可将标本放于
-20℃保存，但应避免反复冻融.
7.
不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤：
1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标
准品
100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二
再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，
孔中各取
100μl分别加到第三孔和第四孔，
混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取
50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔
中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液
50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各
取
50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混
匀后从第七、第八孔中分别取
50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准
（稀释后各孔加样量都为50μl，
品稀释液
50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。
。
浓度分别为
90μg/L，60μg/L，30μg/L，15μg/L，7.5μg/L）
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样
然后再加待测样品10μl（样
品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液
40μl，
。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混
品最终稀释度为
5倍）
匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此
重复
5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15分钟.
10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止
液后
15分钟以内进行。
注意事项：
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好
控制在
5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值
，请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计
大于标准品孔第一孔的
OD值）
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2024年5月23日发(作者：道寄松)
人B型脑钠肽(BNP)酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂仅供研究使用
目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关
液体样本中B型脑钠肽(BNP)的含量。
实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人B型脑钠肽(BNP)水平。用纯化的人B型脑钠
肽
(BNP)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入B型脑钠肽(BNP)，
再与
HRP标记的B型脑钠肽(BNP)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗
涤后加底物
TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终
的黄色。颜色的深浅和样品中的
B型脑钠肽(BNP)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测
，通过标准曲线计算样品中人B型脑钠肽(BNP)浓度。
定吸光度（
OD值）
试剂盒组成：
试剂盒组成
说明书
封板膜
密封袋
酶标包被板
标准品：135μg/L
标准品稀释液
酶标试剂
样品稀释液
显色剂A液
显色剂B液
终止液
浓缩洗涤液
48孔配置
1份
2片（48）
1个
1×48
0.5ml×1瓶
1.5ml×1瓶
3 ml×1瓶
3 ml×1瓶
3 ml×1瓶
3 ml×1瓶
3ml×1瓶
（20ml×20倍）×1瓶
96孔配置
1份
2片（96）
1个
1×96
0.5ml×1瓶
1.5ml×1瓶
6 ml×1瓶
6 ml×1瓶
6 ml×1瓶
6 ml×1瓶
6ml×1瓶
（20ml×30倍）×1瓶
2-8℃保存
2-8℃保存
2-8℃保存
2-8℃保存
2-8℃保存
2-8℃保存
2-8℃保存
2-8℃保存
2-8℃保存
保存
样本处理及要求：
1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上
清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心
20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次
离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程
中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/
分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞
浓度达到
100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分
1
钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备
，用手工或匀浆器
用。标本融化后仍然保持
2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4）
。仔细收集上清。分装后一份待
将标本匀浆充分。离心
20分钟左右（2000-3000转/分）
检测，其余冷冻备用。
6.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上
进行试验，可将标本放于
-20℃保存，但应避免反复冻融.
7.
不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤：
1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标
准品
100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二
再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，
孔中各取
100μl分别加到第三孔和第四孔，
混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取
50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔
中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液
50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各
取
50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混
匀后从第七、第八孔中分别取
50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准
（稀释后各孔加样量都为50μl，
品稀释液
50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。
。
浓度分别为
90μg/L，60μg/L，30μg/L，15μg/L，7.5μg/L）
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样
然后再加待测样品10μl（样
品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液
40μl，
。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混
品最终稀释度为
5倍）
匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此
重复
5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15分钟.
10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止
液后
15分钟以内进行。
注意事项：
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好
控制在
5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值
，请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计
大于标准品孔第一孔的
OD值）
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