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叶酸代谢相关基因多态性的检测方法与设计方案
2024年5月30日发(作者：范姜流如)
本技术提供了一种叶酸代谢相关基因多态性的检测方法，包括：提取受试者的基因组
DNA
；配置单碱基延伸反应体系和聚合酶链式反应
PCR
扩增体系；顺次进行扩增反应；顺
次进行消化处理；顺次混合消化处理后的体系和单碱基延伸反应体系，进行延伸反应，并进
行纯化；利用液相色谱质谱联用仪检测纯化处理后的产物，确定基因组
DNA
特定
SNP
位点
的基因型；其中，洗脱流动相为含
1
％～
5
％
(v/v)
六氟异丙醇和
0.05
％～
0.3
％
(v/v)
三乙胺的蒸
馏水，以及含
1
％～
5
％
(v/v)
六氟异丙醇和
0.05
％～
0.3
％
(v/v)
三乙胺的甲醇，洗脱方式为梯度
洗脱。本方案能够灵敏、简便的对目标基因的
SNP
位点进行基因分型。
权利要求书
1.
一种叶酸代谢相关基因多态性的检测方法，其特征在于，包括：
提取受试者的基因组
DNA
；
配置包含
SEQ ID NO.1
～
SEQ ID NO.3
所示的单碱基延伸引物序列的单碱基延伸反应体系，
并配置包含
SEQ ID NO.4
～
SEQ ID NO.9
所示的特异性扩增引物序列和所述基因组
DNA
的聚
合酶链式反应
PCR
扩增体系；
顺次对所述
PCR
扩增体系进行扩增反应；
顺次对扩增反应后的体系进行消化处理；
顺次混合消化处理后的体系和所述单碱基延伸反应体系，获得混合液，并对所述混合液进行
延伸反应；
顺次对延伸反应后的体系进行纯化处理；
利用液相色谱
-
质谱联用仪检测纯化处理后的产物，确定所述基因组
DNA
特定
SNP
位点的基
因型；
其中，所述液相色谱
-
质谱联用仪的洗脱流动相为含
1
％～
5
％
(v/v)
六氟异丙醇和
0.05
％～
0.3
％
(v/v)
三乙胺的蒸馏水，以及含
1
％～
5
％
(v/v)
六氟异丙醇和
0.05
％～
0.3
％
(v/v)
三乙胺的
甲醇，洗脱方式为梯度洗脱。
2.
根据权利要求
1
所述的叶酸代谢相关基因多态性的检测方法，其特征在于，
所述高效液相色谱仪的色谱条件包括：
C18
反相色谱柱，所述
C18
反相色谱柱的柱温为：
40
～
70
℃，所述纯化产物的进样量为：
10
～
50μl
。
3.
根据权利要求
1
所述的叶酸代谢相关基因多态性的检测方法，其特征在于，
所述液相色谱
-
质谱联用仪中，
2024年5月30日发(作者：范姜流如)
本技术提供了一种叶酸代谢相关基因多态性的检测方法，包括：提取受试者的基因组
DNA
；配置单碱基延伸反应体系和聚合酶链式反应
PCR
扩增体系；顺次进行扩增反应；顺
次进行消化处理；顺次混合消化处理后的体系和单碱基延伸反应体系，进行延伸反应，并进
行纯化；利用液相色谱质谱联用仪检测纯化处理后的产物，确定基因组
DNA
特定
SNP
位点
的基因型；其中，洗脱流动相为含
1
％～
5
％
(v/v)
六氟异丙醇和
0.05
％～
0.3
％
(v/v)
三乙胺的蒸
馏水，以及含
1
％～
5
％
(v/v)
六氟异丙醇和
0.05
％～
0.3
％
(v/v)
三乙胺的甲醇，洗脱方式为梯度
洗脱。本方案能够灵敏、简便的对目标基因的
SNP
位点进行基因分型。
权利要求书
1.
一种叶酸代谢相关基因多态性的检测方法，其特征在于，包括：
提取受试者的基因组
DNA
；
配置包含
SEQ ID NO.1
～
SEQ ID NO.3
所示的单碱基延伸引物序列的单碱基延伸反应体系，
并配置包含
SEQ ID NO.4
～
SEQ ID NO.9
所示的特异性扩增引物序列和所述基因组
DNA
的聚
合酶链式反应
PCR
扩增体系；
顺次对所述
PCR
扩增体系进行扩增反应；
顺次对扩增反应后的体系进行消化处理；
顺次混合消化处理后的体系和所述单碱基延伸反应体系，获得混合液，并对所述混合液进行
延伸反应；
顺次对延伸反应后的体系进行纯化处理；
利用液相色谱
-
质谱联用仪检测纯化处理后的产物，确定所述基因组
DNA
特定
SNP
位点的基
因型；
其中，所述液相色谱
-
质谱联用仪的洗脱流动相为含
1
％～
5
％
(v/v)
六氟异丙醇和
0.05
％～
0.3
％
(v/v)
三乙胺的蒸馏水，以及含
1
％～
5
％
(v/v)
六氟异丙醇和
0.05
％～
0.3
％
(v/v)
三乙胺的
甲醇，洗脱方式为梯度洗脱。
2.
根据权利要求
1
所述的叶酸代谢相关基因多态性的检测方法，其特征在于，
所述高效液相色谱仪的色谱条件包括：
C18
反相色谱柱，所述
C18
反相色谱柱的柱温为：
40
～
70
℃，所述纯化产物的进样量为：
10
～
50μl
。
3.
根据权利要求
1
所述的叶酸代谢相关基因多态性的检测方法，其特征在于，
所述液相色谱
-
质谱联用仪中，