2024年7月14日发(作者：蒲雨南)
高效感受态细胞制备试剂盒
产品编号：SK9305/SK9306
包装规格：40支/200支
试剂盒组成
组分 SK9305，40支 SK9306，200支
BT Buffer F
BT Buffer E
BT Media
(1 Capsules for 50 mL)
操作手册
保存方法及注意事项
BT Media以胶囊的形式提供，请于室温密封干燥保存。BT Buffer F和BT Buffer E可于常温运输，收到后请于4°C保
存，长期保存请置-20°C。
产品介绍
生工BT高效感受态制备试剂盒采用了一种简单而可靠的方法制备感受态细胞，由该试剂盒制备的感受态细胞在进行转
化时无需经过热激步骤，对于Ampicillin抗性质粒而言，甚至连活化步骤都可以省略，感受态细胞和DNA混合后即可直接涂
布，极大地简化了转化过程，提高了实验效率。用该试剂盒制备的大肠杆菌DH5α细胞使用pUC19质粒DNA转化，转化率
可以达到10
7
~10
9
cfu/µg DNA，对其他常用的工程菌株和质粒也同样适用。
产品特色
1. 感受态制备流程快速简单。
2. 转化过程无需热激。
3. 转化效率高达10
7
~10
9
cfu/µg DNA。
4. 使用感受态专用培养基，最大化感受态效率。
5. 适合大量制备。
高效感受态细胞制备流程
自备材料：目标菌种、LB培养基及平板、离心机、50 ml离心管、冰等。
BT Media培养基准备：将一只胶囊投入50 mL蒸馏水中，高压灭菌即可。
准备工作：将BT Buffer F和BT Buffer E放冰上预冷，预冷低温离心机至4°C。
1. 用超低温冰箱中保存的菌种在LB平板上进行划线培养，置37°C培养箱中静置培养12~16 h待菌落生长至直径1~2 mm大
小。
2. 挑取一个生长正常的菌落，接种至10~15 mL液体LB培养基中，于37°C摇床充分振荡（≥ 250 rpm）培养12~16 h。
3. 取上述活化好的菌液0.5 mL接种至准备好的50 mL BT Media中，于37°C摇床充分振荡培养至菌液OD
600
= 0.4~0.6。
50 mL培养物请使用容量大于250 mL的锥形瓶，同时摇床转速超过250 rpm以保证充气充分。
使用较低的温度（18·26°C）培养细菌将使感受态效率进一步提高一个数量级，室温状态下菌液培养至OD
600
= 0.4~0.6
需要10~36 h。
1份 1份
10 ml
4 ml
5 × 10 ml
5 × 4 ml
2个 10个
4. 将菌液转移至50 mL聚丙烯塑料离心管中，冰上放置10 min。
5. 3,500-5,000 rpm离心5 min收集菌体沉淀。
6. 倒掉上清，每50 mL培养物菌体沉淀用5 mL冰上预冷的BT Buffer F轻柔充分重悬菌体，冰上放置10~15 min。
7. 于4°C，3,500-5,000 rpm 离心2~5 min收集菌体沉淀。
8. 每50 mL培养物菌体沉淀用2 mL冰上预冷的BT Buffer E轻柔充分重悬菌体，按每管100 μl分装至冰上预冷的1.5 mL离心
管中。
9. 菌体直接用于转化或用液氮速冻后于超低温冰箱中保存。
标准转化步骤
该试剂盒制备的感受态亦可以使用普通的转化步骤，参见Page 5。
快速转化步骤（不经过热激的转化步骤）
自备材料：LB培养基、LB平板、合适抗生素、待转化质粒或连接产物等。
准备工作：将含合适抗生素的LB平板预热至37°C。
1. 将从超低温冰箱中取出的感受态细胞置冰上融化。
2. 每管感受态加入100 pg~10 ng待转化DNA，用枪头轻柔混匀，于冰上静置10 min。
3. 加入1 mL预热至37°C不含抗生素的LB或SOC培养基，混匀。于37°C摇床缓慢振荡培养45~60 min。
对于使用Ampicillin筛选而言，该步骤可以省略，可以直接将感受态和DNA的混合溶液涂布至含有抗生素的平板上。
制备好的感受态可于冰上保存48 h，-70°C保存有效期为6个月。
4. 取适量菌液涂布至含有与目标质粒抗性相应的抗生素的LB平板中，37°C培养箱中倒置培养过夜。
2024年7月14日发(作者：蒲雨南)
高效感受态细胞制备试剂盒
产品编号：SK9305/SK9306
包装规格：40支/200支
试剂盒组成
组分 SK9305，40支 SK9306，200支
BT Buffer F
BT Buffer E
BT Media
(1 Capsules for 50 mL)
操作手册
保存方法及注意事项
BT Media以胶囊的形式提供，请于室温密封干燥保存。BT Buffer F和BT Buffer E可于常温运输，收到后请于4°C保
存，长期保存请置-20°C。
产品介绍
生工BT高效感受态制备试剂盒采用了一种简单而可靠的方法制备感受态细胞，由该试剂盒制备的感受态细胞在进行转
化时无需经过热激步骤，对于Ampicillin抗性质粒而言，甚至连活化步骤都可以省略，感受态细胞和DNA混合后即可直接涂
布，极大地简化了转化过程，提高了实验效率。用该试剂盒制备的大肠杆菌DH5α细胞使用pUC19质粒DNA转化，转化率
可以达到10
7
~10
9
cfu/µg DNA，对其他常用的工程菌株和质粒也同样适用。
产品特色
1. 感受态制备流程快速简单。
2. 转化过程无需热激。
3. 转化效率高达10
7
~10
9
cfu/µg DNA。
4. 使用感受态专用培养基，最大化感受态效率。
5. 适合大量制备。
高效感受态细胞制备流程
自备材料：目标菌种、LB培养基及平板、离心机、50 ml离心管、冰等。
BT Media培养基准备：将一只胶囊投入50 mL蒸馏水中，高压灭菌即可。
准备工作：将BT Buffer F和BT Buffer E放冰上预冷，预冷低温离心机至4°C。
1. 用超低温冰箱中保存的菌种在LB平板上进行划线培养，置37°C培养箱中静置培养12~16 h待菌落生长至直径1~2 mm大
小。
2. 挑取一个生长正常的菌落，接种至10~15 mL液体LB培养基中，于37°C摇床充分振荡（≥ 250 rpm）培养12~16 h。
3. 取上述活化好的菌液0.5 mL接种至准备好的50 mL BT Media中，于37°C摇床充分振荡培养至菌液OD
600
= 0.4~0.6。
50 mL培养物请使用容量大于250 mL的锥形瓶，同时摇床转速超过250 rpm以保证充气充分。
使用较低的温度（18·26°C）培养细菌将使感受态效率进一步提高一个数量级，室温状态下菌液培养至OD
600
= 0.4~0.6
需要10~36 h。
1份 1份
10 ml
4 ml
5 × 10 ml
5 × 4 ml
2个 10个
4. 将菌液转移至50 mL聚丙烯塑料离心管中，冰上放置10 min。
5. 3,500-5,000 rpm离心5 min收集菌体沉淀。
6. 倒掉上清，每50 mL培养物菌体沉淀用5 mL冰上预冷的BT Buffer F轻柔充分重悬菌体，冰上放置10~15 min。
7. 于4°C，3,500-5,000 rpm 离心2~5 min收集菌体沉淀。
8. 每50 mL培养物菌体沉淀用2 mL冰上预冷的BT Buffer E轻柔充分重悬菌体，按每管100 μl分装至冰上预冷的1.5 mL离心
管中。
9. 菌体直接用于转化或用液氮速冻后于超低温冰箱中保存。
标准转化步骤
该试剂盒制备的感受态亦可以使用普通的转化步骤，参见Page 5。
快速转化步骤（不经过热激的转化步骤）
自备材料：LB培养基、LB平板、合适抗生素、待转化质粒或连接产物等。
准备工作：将含合适抗生素的LB平板预热至37°C。
1. 将从超低温冰箱中取出的感受态细胞置冰上融化。
2. 每管感受态加入100 pg~10 ng待转化DNA，用枪头轻柔混匀，于冰上静置10 min。
3. 加入1 mL预热至37°C不含抗生素的LB或SOC培养基，混匀。于37°C摇床缓慢振荡培养45~60 min。
对于使用Ampicillin筛选而言，该步骤可以省略，可以直接将感受态和DNA的混合溶液涂布至含有抗生素的平板上。
制备好的感受态可于冰上保存48 h，-70°C保存有效期为6个月。
4. 取适量菌液涂布至含有与目标质粒抗性相应的抗生素的LB平板中，37°C培养箱中倒置培养过夜。