2024年3月11日发(作者：悟晓瑶)
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２００７年第ｌｌ卷第ｌ期 实用临床医药杂志
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｉｎ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ・３９・
沙利度胺对类风湿关节炎滑膜成
纤维样细胞影响的体外研究
舒 强，李兴福，刘花香，李栋
（山东大学齐鲁医院风湿科，山东济南，２５００１２）
摘要：目的研究沙利度胺（Ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ）．Ｘ￣类风湿关节炎（ＲＡ）滑膜成纤维样细胞（ＦＬＳ）体外培养时的增生殖分化特性
ＲＡ－ＦＬＳ体外培养呈良性增生。沙利度胺对ＲＡ
培养和鉴
的影响。方法关节镜、关节活检针取ＲＡ患者滑膜组织，分离培养和鉴定ＦＬＳ，ＭｌｒＴ法和反转录一聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方
法观察沙利度胺对ＦＬＳ细胞存活分数（ＳＦ）和ｃ－ｆｏｓ、ＣＯＸ－２ｍＲＮＡ表达。结果
ＦＬＳ的ＳＦ值的抑制作用最强（Ｐ＜０．０５）。生理剂量的沙利度胺干预时的浓度与ＦＬＳ的ＳＦ值呈负相关。ＲＡ—ＦＬＳ的ｃ—ｆｏｓ、环
氧化酶２（ＣＸｇＸ－２）ｍＲＮＡ表达率高，加入沙利度胺共孵育３天后ｅ－ｆｏｓ和ＣＯＸ一２ｍＲＮＡ的表达率均明显下降。结论
定ＲＡ滑膜细胞，证实体外培养传代的ＲＡ－ＦＬＳ为非恶性无限制增生。实验剂量下沙利度胺通过抑制ｃ—ｆｏｓ、ＣＯＸ一２的表达、降
低ＦＬＳ增殖能力等不同途径，发挥对ＲＡ滑膜细胞的免疫调节作用。
关键词：类风湿关节炎；成纤维样细胞；滑膜；沙利度胺
中图分类号：Ｒ ５３９．２１ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７２—２３５３（２００７）０１－００３９－０３
Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ ｏｎ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ
ｏｆ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ—ｌｉｋｅ ｓｙｎｏｖｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ
ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ
ＳＨＵ Ｑｉａｎｇ，ＬＩ Ｘｉｎｇ－ｆｕ，ＬＩＵ Ｈｕａ—ｘｉａｎｇ，ＬＩ Ｄｏｎｇ
（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏ／’Ｒｈｅｕｍａｔｉｃｓ，Ｑｉｌｕ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｊｉｎａｎ ２５００１２）
ＡＢＳＴＲＡＣＴ：ｏｂｉｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ—ｌｉｋｅ ｓｙｎ
ｏｖｉａｌ ｃｅｌｌｓ（ＦＬＳ）ｉｎ ＲＡ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｔｈｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ
ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ ｏｎ ｔｈｅｍ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｓｙｎｏｖｉａｌ ｓｐｅｃｉｍｅｎｓ ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｆｒｏｍ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ＲＡ（６ ｃａｓｅｓ）
ａｔ ｔｈｅ ｔｉｍｅ ｏｆ ｓｕｒｇｉｃａｌ ａｒｔｈｒｅｃｔｏｍｙ，ａｒｔｈｒｏｓｃｏｐｙ，ｂｌｉｎｄ ｎｅｅｄｌｅ ｂｉｏｐｓｙ，ｏｒ ｐｕｍｐｉｎｇ ｓｙｎｏｖｉａｌ ｆｌｕｉｄ ｏｎ
ｋｎｅｅ．ＦＬＳ ＷａＳ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｗｉｔｈ ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉａｌｃ ｄｙｅｉｎｇ．ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｃｈｅｍｉｏｃａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ
ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ—ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｃｅｌｌ ｓｏｒｔｉｎｇ（ＦＣＳ）ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｃｅｌｌ ｓｕｒｆａｃｅ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｓｙｎｏｖｉｏｃｙｔｅ
ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｉｎ ＲＡ ｗａｓ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｗｉｔｈ ＭＴＴ ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ ａｓｓａｙ ａｎｄ ｔｈｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｆｒａｃｔｉｏｎ（ＳＦ）ｏｆ ＦＬＳ
Ｗ３Ｓ ｅｖａｌｕａｔｅｄ ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｃｅ ｏｒ ａｂｓｅｎｃｅ ｏｆ ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｃ－ｆｏｓ ａｎｄ ＣＯＸ
一
２ ｍＲＮＡ Ｗ３Ｓ ｅｘａｍｉｎｅｄ ｂｙ ｓｅｍｉ—ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＲＴ－ＰＣＲ ｉｎ ＦＬＳ ｏｆ ＲＡ ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｉｄｅｎｔｉ—
ｆｉｅｄ ｓｙｎｏｖｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ＲＡ ｗｅｒｅ ＦＬＳ（Ｖｉｍｅｎｔｉｎ ａｎｄ Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｏｓｉｔｉｖｅ）ｃｕｌ—
ｔｕｒｅｄ ｗｉｔｈ ｏｒ ｗｉｔｈｏｕｔ ａｇｅｎｔｓ．Ｔｈｅ ＳＦ ｏｆ ＦＬＳ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｄ ｂｙ ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ ＷａＳ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ｃｏｎ Ａ（ｂｌｎｋ ａ
ｃｏｎｔｒｏｌ ｗｉｔｈｏｕｔ ａｇｅｎｔｓ）ｉｎ ＲＡ（Ｐ＜０．０５）ｓｈｏｗｎ ｂｙ Ｓｓａｙ．Ｔｈｅ ｉａｍｍｕｎｏｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ
ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｄｏｓｅｓ ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ ｗａｓ ｓｔｒｏｎｇ ａｎｄ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ ｍａｒｋｅｄｌｙ ｄｏｓｅ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ
ｃｕｒｓｅｓ ｏｎ ＦＬＳ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ．Ｉｔ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｓｅｍｉ—ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＲＴ－ＰＣＲ ｔｈａｔ Ｃ－ｆｏｓ ａｎｄ
ＯＸ一Ｃ２ ｍＲＮＡ ｏｆ ＲＡ—ＦＬＳ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｈｉｇｈｌｙ ａｎｄ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ ａｆｔｅｒ ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｔｈａｌｉｄｏ—
ｍｉｄｅ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｎｏ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｕｎｌｉｍｉｔｅｄ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ｉｎ ＲＡ—ＦＬＳ ｗｉｔｈｏｕｔ ｂｅｉｎｇ
ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ ｂｙ ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｉｎ ｖｉｔｒｏ．Ｉｔ ｉｓ ｐｒｏｖｅｄ ｔｈａｔ ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ ｍｉｇｈｔｉｌｙ ｍｏｄｅｒａｔｅｓ
ｐｒｏｌｉｆｅｒｚＬｔｉｏｎ ｃｈａｒａｃｔｅｒｓ ｉｎ ＲＡ．Ｔｈｅ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｉｔｓ ３一
ｂｉｌｉｔｉｅＳ ｔｏ ｉｎｈｉｂｉｔ ＦＬＳ ｅｘｃｅｓｓｉｖｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ，ａｎｄ ｉｔ ｍｏｄｕｌａｔｅｓ Ｃ－ｆｏｓ ａｎｄ ＣＯＸ一２
ｍＲＡＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｄｉｓｔｉｎｃｔｌｙ ｉｎ ＲＡ—ＦＬＳ．ｗｉｔｈｏｕｔ ｂｅｉｎｇ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｏｒ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ．
ＫＥＹ ＷＯＲＤＳ：ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ：ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ；ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ，ｓｙｎｏｖｉａｌ ｍｅｍｂｒａｎｅ
收稿日期：２００６—０３—２６
基金项目：山东省科技厅基金资助项目（ＹＺｏＯ１Ｃ１６）
作者简介：舒强（１９７１一），女，医学博士，副主任医师。
通信作者：李兴福（１９５２一），男，主任医师。
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・
４０・ 实用临床医药杂志 第¨卷
类风湿关节炎（ＲＡ）是一种以滑膜增生炎症
１．４．２ ＲＴ—ＰＣＲ方法检测滑膜ＦＬＳ ｃ—ｌｏｓ、ＣＯＸ一２
为典型病理表现的疾病。滑膜成纤维样细胞
（ＦＬＳ）的增殖分化特性与ＲＡ滑膜炎有密切关
系。沙利度胺（Ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ）具有抑制肿瘤坏死
的表达：在ＲＡ—ＦＬＳ细胞培养瓶中加入沙利度胺
１ ０００ ｍｇ／Ｌ以不加药的ＲＡ—ＦＬＳ为对照，继续培
养７２ ｈ后收集细胞，加入细胞裂解液Ｔｒｉｚｏｌ提取
ＲＮＡ。进行ＲＴ—ＰＣＲ反应［ 。
因子ａ（ＴＮＦ＿ａ）的免疫调节作用，临床已用于治疗
炎性关节病。为了进一步探讨其作用机制，作者
观察了沙利度胺对人ＲＡ—ＦＬＳ的体外影响，现报
２结 果
告如下。
１临床资料与方法
１．１组织来源
滑膜组织取自山东大学齐鲁医院风湿科和骨
科住院ＲＡ患者６例（年龄３５～５５岁，平均４８
岁，均为女性），符合美国风湿病学院１９８７年分类
标准，行滑膜切除术或Ｐａｒｋｅｒ—Ｐｅａｒｓｏｎ闭合细针
活检法［ ］取滑膜组织或抽取膝关节积液分离培
养滑膜细胞。
１．２滑膜组织的分离和培养
滑膜组织分离、消化和培养的方法见参考文
献［２２。从关节液中分离滑膜ＦＬＳ的方法为：＿抽取
患者膝关节积液３０～６０ ｍＬ，置肝素离心管中离
心洗涤后培养换液，并用Ｄ—ｈａｎｋ Ｓ漂洗培养瓶，
去除悬浮的血细胞（如红细胞和单核细胞）。培养
传至第３代时获得纯化的滑膜成纤维样细胞
（ＦＬＳ）。
１．３ 滑膜成纤维样细胞（ＦＬＳ）的鉴定
将ＦＬＳ细胞爬片，进行苏木素一伊红（ＨＥ）、碱
性磷酸酶（ＡＫＰ）、苏丹一Ⅲ染色和细胞免疫组化检
测，其中鼠抗人Ｖｉｍｅｎｔｉｎ、ＦⅧ因子、ＣＤ６８单抗和
非免疫鼠Ｉｇｇ均为ｌ：１００稀释。收集培养的滑膜
细胞用流式细胞仪检测ＦＬＳ表面ＣＤ１４、ＣＩＮ４、
ＨＬＡ—ＤＲ、ＣＤ１ｌｂ表达和Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ含量 ｊ。
１．４滑膜成纤维样细胞的特性
１．４．１噻唑蓝（Ｍ１ｖｒ）法检测细胞增殖：将０．１ ｇ
沙利度胺（常州制药厂有限公司惠赠）加入２ ｍＬ
二甲亚砜（ＤＭＳＯ）溶解，配成５０ ｍｇ／ｍＬ原液，用
ＤＭＥＭ液稀释１０倍后微孑Ｌ滤器除菌分装备用。
ＲＡ的ＦＬＳ加入９６孑Ｌ板贴壁培养２４ ｈ。不同浓
度的沙利度胺加入ＦＬＳ培养体系，对照组为含相
同浓度的ＤＭＳＯ．不加沙利度胺共孵育７２ ｈ，
ＭＴＴ（Ｇｅｎｅｔｉｍｅｓ）法测定各孑Ｌ ＯＤ值，每组８个复
孑Ｌ，计算细胞的存活分数（ＳＦ）。
ＳＦ＝实验药物的ＯＤ值一空白对照ＯＤ值对
照Ａ的ＯＤ值一空白对照ＯＤ值
２．１ 滑膜成纤维样细胞的鉴定及生长特点
ＲＡ患者的ＦＬＳ，原代培养生长滞留期较长，
然后进入指数生长期，第２代的传代时间最短，第
６代后增殖速度明显减慢，细胞碎片和凋亡增多。
培养的ＲＡ细胞多角形或梭形，多见细胞分裂相，
核仁明显。培养细胞表面标记Ｖｉｍｅｎｔｉｎ（＋），
Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ表达为３５％，表明所培养的细胞为
ＦＬＳ。经沙利度胺作用后细胞表型未发生改变。
２．２沙利度胺对Ｆｌ 生长增殖的影响
ＲＡ－ＦＬＳ中加入沙利度胺后各组ＳＦ值下降，
沙利度胺２５００、１２５０、２５０、２５、５ ｍｇ／Ｌ组ＳＦ分别
为０．１９１±０．０５７、０．２９６±０．０４６、０．３８７±０．０１５、
０．６１６±０．０３９、０．６５３±０．０１２，与对照组Ａ（１．
００７±０．０７９）相比差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５），
沙利度胺干预ＲＡ组时药物浓度与ＦＬＳ的ＳＦ值
均呈剂量依赖性负相关，ｒ：一０．８９，ｔ：一３．
２９。Ｐ＝０．０４６，有统计学意义。
２．３ ＲＴ—ＰＣＲ方法检测ＲＡ滑膜ＦＬＳ ｃ—ｌｏｓ、环氧
化酶２（Ｃ０ｘ一２）的表达
培养的ＲＡ患者ｃ—ｌｏｓ和ＣＯＸ－２表达较高，加
入沙利度胺ｌ ０００ ｍｇ／Ｌ培养３ ｄ，ｃ＿ｌｏｓ和ＣＯＸ一２
的表达率明显下降（见图１），与不加药的ＲＡ—
ＦＩＮ和ＯＡ—ＦＬＳ对照有明显差异。
图１ ＲＡ患者成纤维样细胞ｃ—ｆＩＪｓ，ＣＯＸ一２ ｍＲＡＮＡ的表达
１．加入Ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ １ ０００ ｍｇ／Ｌ的ＲＡ－ＦＬＳ
２．ＯＡ－ＦＬＳ对照；３ ＲＡ－ＦＬＳ对照
３讨论
３．１ ＲＡ－ＦＬＳ体外生长特性比较
ＲＡ滑膜血管充血，滑膜衬里细胞增生，形成
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第ｌ期 舒强等：沙利度胺对类风湿关节炎滑膜成纤维样细胞影响的体外研究 ・４ｌ・
许多绒毛样突起，侵入软骨和软骨下的骨质。
ＦＬＳ表现出转化细胞的增生特征和侵袭性，包括
抑制ＴＮＦ－ａ产生而抗炎，治疗关节炎 。
ＲＡ的特点是滑膜增厚，增生的滑膜引起局
细胞变大、核仁明显、接触抑制的丧失等。因此抑
制ＦＬＳ的增生和活化，在控制ＲＡ的发病和疾病
进展方面具有重要意义Ｅ３ Ｊ。本研究对ＲＡ滑膜细
胞体外培养后进行形态学（倒置显微镜下活体观
察和ＨＥ染色）、组织学（ＡＫＰ和苏丹一Ⅲ染色）、免
疫组化［Ｖｉｍｅｎｔｉｎ（＋）、ＦＶＩＩＩ因子（～）、ＣＤ６８（一）］
和流式细胞仪（Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ＋，ＣＩＮ４、ＨＬＡ—ＤＲ、
部缺氧，促进血管新生；血管翳形成后又增加局部
的炎症因子浓度，滑膜ＦＬＳ增殖、血管新生和炎
症协同，加速关节破坏，导致关节畸形和功能障
碍 ］。沙利度胺在体外抑制血管内皮生长因子
（ＶＥＧＦ）和碱性纤维生长因子（ｂＦＧＦ）介导的血
管再生，是血管生成抑制剂，可治疗增生的滑膜
炎，减轻关节炎的症状和体征Ｉ ｚ０ｊ。Ｎａｇａｓｈｉｍａ将
ＣＤ１ｌｂ含量均低于１．５％）证实培养传代后的滑
膜细胞为ＦＬＳ。但是ＲＡ滑膜组织充血水肿，可
见色素沉着，分离ＦＬＳ培养时增殖传代能力强，
传代时间短，细胞分裂相多见。虽然ＲＡ关节滑
液中炎症细胞聚集，但分离的ＦＬＳ却表现出较弱
的增殖潜能，细胞传代能力低下。ＲＡ—ＦＬＳ体外
培养时倍增速度和传代时间符合非癌性细胞的生
长曲线，提示在无刺激因子干预时体外培养条件
下，ＲＡ－ＦＬＳ呈良性增殖特性。这一结果与其它
学者ｌ 』对比ＲＡ和ＯＡ患者ＦＬＳ特性的结论一
致。提示ＲＡ滑膜炎时ＦＬＳ的增殖和炎症与患
者体内多种炎症因子高表达，诱导ＦＬＳ增殖分化
障碍有更密切的关系。
３．２ Ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ对ＲＡ滑膜的作用
沙利度胺是谷氨酸衍生物，化学名为Ｎ一２（２，
６二氧一３一哌啶基）一邻苯二甲酰亚胺。体内外实验
表明沙利度胺可抑制ＴＮＦ—ａ、抗炎、抑制血管再
生和免疫调节作用。
在ＲＡ的关节腔中有多种炎细胞（中性粒细
胞、巨噬细胞及淋巴细胞）浸润分泌大量致炎因子
（ＴＮＦ－ａ、ＴＧＦ一８、ＩＦＮ－ｙ、ＩＬ一８等），促进ＶＥＧＦ、
ｂＦＧＦ和血管生成素（ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ－１，Ａｎｇ－１，其可
包裹和稳定新生血管）高表达 ５。其中最主要的
ＴＮＦ—ａ、促进ＮＦ－￣：Ｂ活化，增加Ａｎｇ一１表达，促使
单核细胞分泌ＶＥＧＦ，增强内皮细胞的增殖、迁
移及诱导ＭＭＰｓ合成，分解细胞外基质，加速骨
和软骨破坏［ 。有学者［ ］给佐剂型关节炎鼠１２１
服沙利度胺及其类似物ＣＣ１０６９，发现ＣＣ１０６９可
减轻鼠的关节炎症状，并呈剂量依赖性减少ＴＮＦ
—ａ
和ＩＬ一２ ｍＲＮＡ水平。Ｂｏｍｂｉｎｉ等观察到沙利
度胺和抗ＴＮＦ—ａ抗血清能抑制卵白蛋白在免疫
鼠膝关节中介导的中性粒细胞募集作用。并呈时
间和剂量依赖特性，这一作用可以被沙利度胺和
抗ＴＮＦ－ａ一抗血清所减弱，在培养上清液中高滴度
的ＴＮＦ－ａ分泌也可被沙利度胺抑制，证明其通过
血管生成抑制剂注射到移植有ＲＡ滑膜碎片的免
疫缺陷鼠皮下，发现不仅可抑制血管内皮细胞增
殖，还可减少滑膜细胞增殖…』。
本实验结果显示沙利度胺可抑制ＲＡ的ＦＬＳ
的增生，减少细胞的有丝分裂，延长Ｇ１期，诱导
细胞成熟。沙利度胺对炎症关节ＲＡ—ＦＬＳ增殖率
的免疫调节作用明显，并呈现出显著的量效曲线。
ＲＴ－ＰＣＲ检测证实沙利度胺是通过抑制原癌基
因ｃ－ｆｏｓ表达而起效的。说明沙利度胺ｅ不仅能
抑制ＴＮＦ－ａ分泌和血管再生，也可直接调控细胞
转录过程，降低细胞ＦＬＳ的增殖活性，这一作用
是不依赖于Ｔ细胞介导的。另一方面，沙利度胺
能抑制ＣＯＸ－２的表达，与Ｆｕｊｉｔａ等报道的沙利度
胺调节脂多糖介导的ＣＯＸ一２ ｍＲＮＡ表达，降低
ＰＧＥ２合成相一致 １ ，成为其发挥免疫抑制的一
种方式。迄今为止，沙利度胺对滑膜ＦＬＳ影响的
研究结果甚少，本试验发现沙利度胺免疫调节的
不同途径，其与沙利度胺已知的作用机制的关系
如何，值得进一步验证和完善。
参考文献
［１］Ａｒａｙｓｓｉ Ｔ Ｋ，Ｓｃｈｕｍａｃｈｅｒ Ｈ Ｒ Ｊｒ，Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｍｏｄｉｆｉｅｄ
ｎｅｅｄｌｅ ｆｏｒ ｓｍａｌｌ ｊｏｉｎｔ ｂｉｏｐｓｉｅｓ［Ｊ］．Ｊ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ，１９９８，２５：
８７６．
［２］舒强，李兴福，侯怀水．等．艾拉莫德对骨关节炎滑膜成
纤维细胞特性的影响［Ｊ］．中华风湿病学杂志，２００６，１０
（７）：３８９．
［３］Ｋｒａａｎ Ｍ Ｃ，Ｈ＆ｒｉｎｇｍａｎ Ｊ Ｊ，Ｗｅｅｄｏｎ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｔ ｃｅｌｌｓ，ｆｉ—
ｂｒｏｂｌａｓｔ－ｌｉｋｅ ｓｙｎｏｖｉｏｃｙｔｅｓ，ａｎｄ ｇｒａｎｚｙｍｅ Ｂ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ ｃｅｌｌｓ
＆ｒｅ ａｓｓｏｃｉａｔｄｅ ｗｉｔｈ ｊｏｉｎｔ ｄａｍａｇｅ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｒｅｃｅｎｔ ｏｎｓｅｔ
ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ［Ｊ］．Ａｎｎ Ｒｈｅｍｕ Ｄｉｓ，２００４，６３：４８３．
［４］ＬｏｒｉｅｓＲ ＪＵ，ＤｅｒｅｓｅＩ，ＤｅＢａｒｉ ＣＤｅ，ｅｔ ａ１．Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｇｒｏｗｔｈ
ｒａｔｅ ｏｆ ｆｉｂｍｂｌａｓｔ－ｌｉｋｅ ｓｙｎｏｖｉｌａ ｃｅｌｌｓ ｉｓ ｒｅｄｕｅｅｄ ｂｙ ｍｅｔｈｃ）ｔｒｅｘａｔｅ
ｔｒｅａｔｍｅｎｔ［Ｊ］．Ａｎｎ Ｒｈｅｍｕ Ｄｉｓｅ，２００３，６２：５６８．
［５］Ｃｕｌｏ Ｍ Ｉ，Ｖｅｒｇｌｅｓ Ｄ，Ｈｏｒｖａｔ Ｇ．ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＴＮＦ—ａｌ－
ｐｈａ，ＣＡＭＰ，ＰＧＥ２ ａｎｄ ＩＬ一１８ ｉｎ ｓｙｎｏｖｉｌａ ｆｌｕｉｄ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ
ｗｉｔｈ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ａｎｄ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ
［Ｊ Ｊ．ＡｎｎＲｈｅｕｍＤｉｓ，２００５，６４：１８３１．
（下转第４４面）
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４４ ・ 实用临床医药杂志 第１１卷
状态，主要表现为血小板活性增加，高凝血、低抗
凝及纤溶活性降低等变化。血小板表面糖蛋白受
体是血小板黏附到血管壁成分和血小板间相互作
用的关键物质，其中纤维蛋白原受体ＧＰ １Ｉ ｂ／ＧＰ
ＨＩ ａ是血小板膜上最丰富的受体，受体与纤维蛋
白原结合导致血小板聚集，成为导致血小板性血
栓形成的最后通路。ＧＰＨＩ ａ合成后不单独插到细
２型糖尿病患者血小板激活功能的机制，可能与
以下几方面有关：①运动促进一氧化氮（ＮＯ）的
合成，增加血浆ＮＯ浓度及血管ＮＯ的释放。而
ＮＯ能够减少活化后的血小板膜表面糖蛋白的表
达，包括Ｐ一选择素和Ｇｐ １ ｂ／ＩＩＩ ａ，抑制血小板的
进一步活化 ］。②运动降低血浆内皮素的含量。
高血压时，受损的内皮释放大量血管活性物质，促
进血小板聚集。其中ＥＴ一１能显著增加血小板
表面１１ ｂ／ＩＩＩａ受体的表达，激活血小板 ］。③运
动使血管内皮释放ＰＧＩ２增加 。④高甘油三酯
通过血小板上的特殊受体使血小板活化，长期高
血糖可使血小板聚集诱导剂增加、抑制物减
少［
胞膜中，与ＧＰ １ ｂ结合后按１：１组成异二聚体复
合物在血小板膜表面表达，测定血小板膜上的
ＣＤ６ｌ（ＧＰＨＩ ａ）可表示ＧＰⅡｂ／ＧＰＨＩ ａ的活性 Ｊ。
血小板胞浆内Ａ颗粒膜上的ＣＤ６，Ｐ，随活化血小
板的脱颗粒而与血小板膜融合，在血小板膜上表
达为活化血小板的另一分子标志物。血栓素Ａ２
（ＴＸＡ２）与前列环素（ＰＧＩ２）是花生四烯酸的主要
参考文献
［１］ Ｓｏｗｅｒｓ Ｊ Ｒ，Ｅｐｓｔｅｉｎ Ｍ，Ｆｒｏｈｌｉｃｈ Ｅ Ｄ Ｄｉａｂｅｔｅｓ，ｈｙｐｅｒｔｅｎ—
ｓｉｏｎ ａｎｄ ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，２００１，３７：
１０５３
代谢产物。ＴＸＡ２具有强烈的血小板聚集作用。
而ＰＧＩ２是体内合成的最强的血小板解聚物质，２
者的平衡，对于维持血液的正常生理状态具有重
要作用。但２者在体内均不稳定，通过测定其代
谢产物ＴＸＢ２及６一ｋｅｔｏ—ＰＧＦｌａ来反映血浆水平。
［２］ Ａｎｄｒｅ Ｐ，Ａｌａｉｍｏ Ｌ，Ｐｒａｓａｄ Ｓ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｐｌａｔｅｌｅｔ—ｄｅｒｉｖｅｄ
ＣＤ４０Ｌ：ｔｈｅ ｓｗｉｔｃｈ—ｈｉｔｔｉｎｇ ｐｌａｙｅｒ ｏｆ ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．
Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，２００２，１０６：８９６．
糖尿病患者血小板活性升高的原因是综合性的，
血小板活化状态成为早期预测糖尿病并发症的方
法之一＿２ Ｊ。高血压合并糖尿病患者的抗凝及抗
血小板治疗是防止并发症的重要措施，但由于服
药依从性、药物副作用以及阿司匹林抵抗等原因
［３］Ｌｉｐ Ｇ Ｙ，Ｂｌａｎｄ Ａ Ｄ．Ｄｏｅｓ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ ｃｏｎｆｅｒ ａ ｐｒｅｔｈｒｏｍ—
ｂ０ｔｉｃ ｓｔａｔｅ，Ｖｉｒｃｈｏｗ ｓｔｒｉａｌ ｒｅｖｉｓｉｔｅｄ［Ｊ ｊ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，２００２，
１Ｏ１：２１８
［４］Ｓｒｅｅｄｌａｒａ Ｒ，Ｉｔａｇａｋｉ Ｉ，Ｈａｋｉｍ Ｒ Ｍ Ｕｒｅｍｉｃ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｈａｖｅ ｉｎ—
ｄｕｃｅｄ ｐｌａｔｅｌｅｔ ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ ｍｅｄｉａｔｅｅｌ ｂｙ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ
ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｉ１ ｂ／Ｉ］］ａ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ［Ｊ］．Ａｍ Ｊ Ｋｉｎｄｅｙ，１９９６，２７：
３５５
影响了抗血小板治疗的临床效果。运动可以降低
血压及血糖，有氧运动已成为高血压及糖尿病治
疗的基本方法，但有氧运动对患者的血小板功能
状态是否产生影响，产生什么样的影响，有关的研
究报道较少。
［５］汪钟．现代血栓病学［Ｊ］．北京：中国医科大学协和医科
大学联合出版社，１９９６．１９１．
［６］夏珂高血压导致血小板活化的机制［Ｊ］国外医学・生
理、病理科学与临床分册，２００５，２５（２）：１２０．
［７］ Ｍａｅｄａ Ｓ，Ｔａｎａｂｅ Ｔ，Ｍｉｙａｕｃｈｉ Ｔ，ｅｔ ａ１．Ａｅｒｏｂｉｃ ｅｘｅｒｃｉｓｅ
ｔｒａｉｎｉｎｇ ｒｅｄｕｃｅｓ ｐｌａｓｍａ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ一１ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｏｌｄｅｒ
ｗｏｍｅｎ［Ｊ］．Ｊ Ａｐｐｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ，２００３，９５（１）：３３６．
［８］Ｗａｎｇ Ｊ Ｓ，Ｊｅｎ Ｃ Ｊ，Ｃｈｅｎ Ｈ Ｉ．Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｃｈｒｏｎｉｃ ｅｘｅｒｃｉｓｅ ａｎｄ
ｄｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇ ｏｎ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ ｗｏｍｅｎ［Ｊ］．Ｊ Ａｐｐｌ ｐｈｙｓ—
ｉｏｌ。１９９７，８３（６７）：２０８０．
在本研究中，规律运动不仅可以降低患者的
血压与血糖还可以降低患者血小板表面糖蛋白受
体的表达及ＴＸＢ２的水平，升高６一ｋｅｔｏ—ＰＧＦｌａ，
降低血小板的聚集率。有氧运动减轻高血压合并
（上接第４１面）
ｆ６］Ｃｌａｖｅｌ Ｇ，Ｂｅｓｓｉｓ Ｎ，Ｂｏｉｓｓｉｅｒ Ｍ Ｃ Ｒｅｃｅｎｔ ｄａｔａ ｏｎ ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｆｏｒ
［９］ Ｃｏｎｗａｙ Ｄ Ｓ，Ｐｅａｒｃｅ Ｌ Ａ．Ｐｌａｓｍａ ｙｏｎ Ｗｉｌｌｅｂｒｎｄ ｆａａｃｔｏｒ ａｎｄ
ｓｏｌｕｂｌｅ ｐ－ｓｅｌｃｔｉｅｎ ａｓ ｉｎｄｉｃｅｓ ｏｆ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｄａｍａｇｅ ａｎｄ ｐｌａｔｅｌｅｔ
ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｉｎ １ ３２ １ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｎｏｎｖａｌｖｕｌａｒ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ
［Ｊ］．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，２００２，１０６：１９６２．
ｂｒｏｂｌａｓｔｓ ｖｉａ ｔｈｅ ＮＦ－ｋａｐｐａ Ｂ ｓｉｇｎａｌｌｉｇ ｐａｔｈｗａｙ［Ｊ］．Ｂｉｎｏｃｈｅｍ
Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ，２００５，３２８：４０９．
ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ［Ｊ］．Ｊｏｉｎｔ Ｂｏｎｅ Ｓｐｉｎｅ，
２００３，７０：３２１．
［１０］ｂｉｎｅｒ Ｄ Ｔ，Ｂｒａｈｎ Ｅ．Ｎｅｗ ｎｔｉａ ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ
［７］ＯｌｉｖｅｒＳ Ｊ，ＦｒｅｅｍａｎＳＬ，Ｃｏｒｒａｌ ＬＧ，ｅｔａ１．Ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ ａｎａ—
ｌｏｇｕｅ ＣＣ１０６９ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｒａｔ ａｄｊｕｖａｎｔ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ
ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｓｙｎｏｖｉｔｉｓ［Ｊ］．Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｉｎｖｅｓｔｉｇ
Ｄｒｕｇｓ，２００５，１４：１．
［Ｊ］．ＣｌｉｎＥｘｐ Ｉｎｍｍｎｏｌ，１９９９，１１８：３１５．
［８］Ｂｏｍｂｉｎｉ Ｇ，Ｃａｎｅｔｔｉ Ｃ，Ｒｏｃｈａ Ｆ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｔｕｍｏｕｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ
ｆａｃｔｏｒ－ａｌｐｈａ ｍｅｄｉａｔｓ ｎｅｕｔｅｒｏｐｈｉｌ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ｔｏ ｔｈｅ ｋｍｅｅ ｓｙｎｏｖｉｌａ
［１１］Ｎａｇａｓｈｉａ Ｍ，Ｔａｎａｋｍａ Ｈ，Ｔａｋａｈａｓｈｉ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｔｈｅ
ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｓｙｎｏｖｉａｌ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒ－
ａｔｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｓｙｎｏｖｉｌａ ｔｉ￣ｕｅｓ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ
ｃａｖｉｔｙ ｄｕｒｉｎｇ ｉｍｍｕｎｅ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｅｕｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，
２００４，４９６：１９７．
ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ｕｓｉｇ ＳＣＩｎＤ ｍｉｃｅ［Ｊ］．Ｌａｂ Ｉｎｖｅｓｔ，２００２，８２：９８１．
［１２］Ｆｕ］ｉｔａ Ｊ，Ｍｅｓｔｒｅ Ｊ Ｒ，Ｊｅｒｏｍｅ Ｂ．ｅｔ ａ１．Ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ ａｎｄ Ｉｔｓ
Ａｎａｌｏｇｕｅｓ Ｉｎｈｉｂｉｔ Ｌｉｐｏｐｏｌｙ￣ｃｃｈａｒｉｄｅ—ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ
［９］Ｓｃｏｔｔ Ｂ Ｂ，Ｚａｒａｔｉｎ Ｐ Ｆ，Ｇｉｌｍａｒｔｉｎ Ａ Ｇ，ｅｔ ａ１．ＴＮＦ—ａｌｐｈａ
ｍｏｄｕｌａｔｅｓ ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ－１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ｓｙｎｏｖｉａｌ ｆｉ—
Ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ－２ Ｃｌｉｎ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，２００１，７：３３４９．
2024年3月11日发(作者：悟晓瑶)
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２００７年第ｌｌ卷第ｌ期 实用临床医药杂志
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｉｎ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ・３９・
沙利度胺对类风湿关节炎滑膜成
纤维样细胞影响的体外研究
舒 强，李兴福，刘花香，李栋
（山东大学齐鲁医院风湿科，山东济南，２５００１２）
摘要：目的研究沙利度胺（Ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ）．Ｘ￣类风湿关节炎（ＲＡ）滑膜成纤维样细胞（ＦＬＳ）体外培养时的增生殖分化特性
ＲＡ－ＦＬＳ体外培养呈良性增生。沙利度胺对ＲＡ
培养和鉴
的影响。方法关节镜、关节活检针取ＲＡ患者滑膜组织，分离培养和鉴定ＦＬＳ，ＭｌｒＴ法和反转录一聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方
法观察沙利度胺对ＦＬＳ细胞存活分数（ＳＦ）和ｃ－ｆｏｓ、ＣＯＸ－２ｍＲＮＡ表达。结果
ＦＬＳ的ＳＦ值的抑制作用最强（Ｐ＜０．０５）。生理剂量的沙利度胺干预时的浓度与ＦＬＳ的ＳＦ值呈负相关。ＲＡ—ＦＬＳ的ｃ—ｆｏｓ、环
氧化酶２（ＣＸｇＸ－２）ｍＲＮＡ表达率高，加入沙利度胺共孵育３天后ｅ－ｆｏｓ和ＣＯＸ一２ｍＲＮＡ的表达率均明显下降。结论
定ＲＡ滑膜细胞，证实体外培养传代的ＲＡ－ＦＬＳ为非恶性无限制增生。实验剂量下沙利度胺通过抑制ｃ—ｆｏｓ、ＣＯＸ一２的表达、降
低ＦＬＳ增殖能力等不同途径，发挥对ＲＡ滑膜细胞的免疫调节作用。
关键词：类风湿关节炎；成纤维样细胞；滑膜；沙利度胺
中图分类号：Ｒ ５３９．２１ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７２—２３５３（２００７）０１－００３９－０３
Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ ｏｎ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ
ｏｆ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ—ｌｉｋｅ ｓｙｎｏｖｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ
ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ
ＳＨＵ Ｑｉａｎｇ，ＬＩ Ｘｉｎｇ－ｆｕ，ＬＩＵ Ｈｕａ—ｘｉａｎｇ，ＬＩ Ｄｏｎｇ
（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏ／’Ｒｈｅｕｍａｔｉｃｓ，Ｑｉｌｕ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｊｉｎａｎ ２５００１２）
ＡＢＳＴＲＡＣＴ：ｏｂｉｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ—ｌｉｋｅ ｓｙｎ
ｏｖｉａｌ ｃｅｌｌｓ（ＦＬＳ）ｉｎ ＲＡ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｔｈｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ
ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ ｏｎ ｔｈｅｍ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｓｙｎｏｖｉａｌ ｓｐｅｃｉｍｅｎｓ ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｆｒｏｍ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ＲＡ（６ ｃａｓｅｓ）
ａｔ ｔｈｅ ｔｉｍｅ ｏｆ ｓｕｒｇｉｃａｌ ａｒｔｈｒｅｃｔｏｍｙ，ａｒｔｈｒｏｓｃｏｐｙ，ｂｌｉｎｄ ｎｅｅｄｌｅ ｂｉｏｐｓｙ，ｏｒ ｐｕｍｐｉｎｇ ｓｙｎｏｖｉａｌ ｆｌｕｉｄ ｏｎ
ｋｎｅｅ．ＦＬＳ ＷａＳ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｗｉｔｈ ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉａｌｃ ｄｙｅｉｎｇ．ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｃｈｅｍｉｏｃａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ
ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ—ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｃｅｌｌ ｓｏｒｔｉｎｇ（ＦＣＳ）ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｃｅｌｌ ｓｕｒｆａｃｅ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｓｙｎｏｖｉｏｃｙｔｅ
ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｉｎ ＲＡ ｗａｓ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｗｉｔｈ ＭＴＴ ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ ａｓｓａｙ ａｎｄ ｔｈｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｆｒａｃｔｉｏｎ（ＳＦ）ｏｆ ＦＬＳ
Ｗ３Ｓ ｅｖａｌｕａｔｅｄ ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｃｅ ｏｒ ａｂｓｅｎｃｅ ｏｆ ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｃ－ｆｏｓ ａｎｄ ＣＯＸ
一
２ ｍＲＮＡ Ｗ３Ｓ ｅｘａｍｉｎｅｄ ｂｙ ｓｅｍｉ—ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＲＴ－ＰＣＲ ｉｎ ＦＬＳ ｏｆ ＲＡ ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｉｄｅｎｔｉ—
ｆｉｅｄ ｓｙｎｏｖｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ＲＡ ｗｅｒｅ ＦＬＳ（Ｖｉｍｅｎｔｉｎ ａｎｄ Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｏｓｉｔｉｖｅ）ｃｕｌ—
ｔｕｒｅｄ ｗｉｔｈ ｏｒ ｗｉｔｈｏｕｔ ａｇｅｎｔｓ．Ｔｈｅ ＳＦ ｏｆ ＦＬＳ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｄ ｂｙ ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ ＷａＳ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ｃｏｎ Ａ（ｂｌｎｋ ａ
ｃｏｎｔｒｏｌ ｗｉｔｈｏｕｔ ａｇｅｎｔｓ）ｉｎ ＲＡ（Ｐ＜０．０５）ｓｈｏｗｎ ｂｙ Ｓｓａｙ．Ｔｈｅ ｉａｍｍｕｎｏｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ
ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｄｏｓｅｓ ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ ｗａｓ ｓｔｒｏｎｇ ａｎｄ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ ｍａｒｋｅｄｌｙ ｄｏｓｅ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ
ｃｕｒｓｅｓ ｏｎ ＦＬＳ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ．Ｉｔ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｓｅｍｉ—ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＲＴ－ＰＣＲ ｔｈａｔ Ｃ－ｆｏｓ ａｎｄ
ＯＸ一Ｃ２ ｍＲＮＡ ｏｆ ＲＡ—ＦＬＳ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｈｉｇｈｌｙ ａｎｄ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ ａｆｔｅｒ ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｔｈａｌｉｄｏ—
ｍｉｄｅ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｎｏ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｕｎｌｉｍｉｔｅｄ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ｉｎ ＲＡ—ＦＬＳ ｗｉｔｈｏｕｔ ｂｅｉｎｇ
ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ ｂｙ ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｉｎ ｖｉｔｒｏ．Ｉｔ ｉｓ ｐｒｏｖｅｄ ｔｈａｔ ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ ｍｉｇｈｔｉｌｙ ｍｏｄｅｒａｔｅｓ
ｐｒｏｌｉｆｅｒｚＬｔｉｏｎ ｃｈａｒａｃｔｅｒｓ ｉｎ ＲＡ．Ｔｈｅ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｉｔｓ ３一
ｂｉｌｉｔｉｅＳ ｔｏ ｉｎｈｉｂｉｔ ＦＬＳ ｅｘｃｅｓｓｉｖｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ，ａｎｄ ｉｔ ｍｏｄｕｌａｔｅｓ Ｃ－ｆｏｓ ａｎｄ ＣＯＸ一２
ｍＲＡＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｄｉｓｔｉｎｃｔｌｙ ｉｎ ＲＡ—ＦＬＳ．ｗｉｔｈｏｕｔ ｂｅｉｎｇ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｏｒ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ．
ＫＥＹ ＷＯＲＤＳ：ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ：ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ；ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ，ｓｙｎｏｖｉａｌ ｍｅｍｂｒａｎｅ
收稿日期：２００６—０３—２６
基金项目：山东省科技厅基金资助项目（ＹＺｏＯ１Ｃ１６）
作者简介：舒强（１９７１一），女，医学博士，副主任医师。
通信作者：李兴福（１９５２一），男，主任医师。
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・
４０・ 实用临床医药杂志 第¨卷
类风湿关节炎（ＲＡ）是一种以滑膜增生炎症
１．４．２ ＲＴ—ＰＣＲ方法检测滑膜ＦＬＳ ｃ—ｌｏｓ、ＣＯＸ一２
为典型病理表现的疾病。滑膜成纤维样细胞
（ＦＬＳ）的增殖分化特性与ＲＡ滑膜炎有密切关
系。沙利度胺（Ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ）具有抑制肿瘤坏死
的表达：在ＲＡ—ＦＬＳ细胞培养瓶中加入沙利度胺
１ ０００ ｍｇ／Ｌ以不加药的ＲＡ—ＦＬＳ为对照，继续培
养７２ ｈ后收集细胞，加入细胞裂解液Ｔｒｉｚｏｌ提取
ＲＮＡ。进行ＲＴ—ＰＣＲ反应［ 。
因子ａ（ＴＮＦ＿ａ）的免疫调节作用，临床已用于治疗
炎性关节病。为了进一步探讨其作用机制，作者
观察了沙利度胺对人ＲＡ—ＦＬＳ的体外影响，现报
２结 果
告如下。
１临床资料与方法
１．１组织来源
滑膜组织取自山东大学齐鲁医院风湿科和骨
科住院ＲＡ患者６例（年龄３５～５５岁，平均４８
岁，均为女性），符合美国风湿病学院１９８７年分类
标准，行滑膜切除术或Ｐａｒｋｅｒ—Ｐｅａｒｓｏｎ闭合细针
活检法［ ］取滑膜组织或抽取膝关节积液分离培
养滑膜细胞。
１．２滑膜组织的分离和培养
滑膜组织分离、消化和培养的方法见参考文
献［２２。从关节液中分离滑膜ＦＬＳ的方法为：＿抽取
患者膝关节积液３０～６０ ｍＬ，置肝素离心管中离
心洗涤后培养换液，并用Ｄ—ｈａｎｋ Ｓ漂洗培养瓶，
去除悬浮的血细胞（如红细胞和单核细胞）。培养
传至第３代时获得纯化的滑膜成纤维样细胞
（ＦＬＳ）。
１．３ 滑膜成纤维样细胞（ＦＬＳ）的鉴定
将ＦＬＳ细胞爬片，进行苏木素一伊红（ＨＥ）、碱
性磷酸酶（ＡＫＰ）、苏丹一Ⅲ染色和细胞免疫组化检
测，其中鼠抗人Ｖｉｍｅｎｔｉｎ、ＦⅧ因子、ＣＤ６８单抗和
非免疫鼠Ｉｇｇ均为ｌ：１００稀释。收集培养的滑膜
细胞用流式细胞仪检测ＦＬＳ表面ＣＤ１４、ＣＩＮ４、
ＨＬＡ—ＤＲ、ＣＤ１ｌｂ表达和Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ含量 ｊ。
１．４滑膜成纤维样细胞的特性
１．４．１噻唑蓝（Ｍ１ｖｒ）法检测细胞增殖：将０．１ ｇ
沙利度胺（常州制药厂有限公司惠赠）加入２ ｍＬ
二甲亚砜（ＤＭＳＯ）溶解，配成５０ ｍｇ／ｍＬ原液，用
ＤＭＥＭ液稀释１０倍后微孑Ｌ滤器除菌分装备用。
ＲＡ的ＦＬＳ加入９６孑Ｌ板贴壁培养２４ ｈ。不同浓
度的沙利度胺加入ＦＬＳ培养体系，对照组为含相
同浓度的ＤＭＳＯ．不加沙利度胺共孵育７２ ｈ，
ＭＴＴ（Ｇｅｎｅｔｉｍｅｓ）法测定各孑Ｌ ＯＤ值，每组８个复
孑Ｌ，计算细胞的存活分数（ＳＦ）。
ＳＦ＝实验药物的ＯＤ值一空白对照ＯＤ值对
照Ａ的ＯＤ值一空白对照ＯＤ值
２．１ 滑膜成纤维样细胞的鉴定及生长特点
ＲＡ患者的ＦＬＳ，原代培养生长滞留期较长，
然后进入指数生长期，第２代的传代时间最短，第
６代后增殖速度明显减慢，细胞碎片和凋亡增多。
培养的ＲＡ细胞多角形或梭形，多见细胞分裂相，
核仁明显。培养细胞表面标记Ｖｉｍｅｎｔｉｎ（＋），
Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ表达为３５％，表明所培养的细胞为
ＦＬＳ。经沙利度胺作用后细胞表型未发生改变。
２．２沙利度胺对Ｆｌ 生长增殖的影响
ＲＡ－ＦＬＳ中加入沙利度胺后各组ＳＦ值下降，
沙利度胺２５００、１２５０、２５０、２５、５ ｍｇ／Ｌ组ＳＦ分别
为０．１９１±０．０５７、０．２９６±０．０４６、０．３８７±０．０１５、
０．６１６±０．０３９、０．６５３±０．０１２，与对照组Ａ（１．
００７±０．０７９）相比差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５），
沙利度胺干预ＲＡ组时药物浓度与ＦＬＳ的ＳＦ值
均呈剂量依赖性负相关，ｒ：一０．８９，ｔ：一３．
２９。Ｐ＝０．０４６，有统计学意义。
２．３ ＲＴ—ＰＣＲ方法检测ＲＡ滑膜ＦＬＳ ｃ—ｌｏｓ、环氧
化酶２（Ｃ０ｘ一２）的表达
培养的ＲＡ患者ｃ—ｌｏｓ和ＣＯＸ－２表达较高，加
入沙利度胺ｌ ０００ ｍｇ／Ｌ培养３ ｄ，ｃ＿ｌｏｓ和ＣＯＸ一２
的表达率明显下降（见图１），与不加药的ＲＡ—
ＦＩＮ和ＯＡ—ＦＬＳ对照有明显差异。
图１ ＲＡ患者成纤维样细胞ｃ—ｆＩＪｓ，ＣＯＸ一２ ｍＲＡＮＡ的表达
１．加入Ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ １ ０００ ｍｇ／Ｌ的ＲＡ－ＦＬＳ
２．ＯＡ－ＦＬＳ对照；３ ＲＡ－ＦＬＳ对照
３讨论
３．１ ＲＡ－ＦＬＳ体外生长特性比较
ＲＡ滑膜血管充血，滑膜衬里细胞增生，形成
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第ｌ期 舒强等：沙利度胺对类风湿关节炎滑膜成纤维样细胞影响的体外研究 ・４ｌ・
许多绒毛样突起，侵入软骨和软骨下的骨质。
ＦＬＳ表现出转化细胞的增生特征和侵袭性，包括
抑制ＴＮＦ－ａ产生而抗炎，治疗关节炎 。
ＲＡ的特点是滑膜增厚，增生的滑膜引起局
细胞变大、核仁明显、接触抑制的丧失等。因此抑
制ＦＬＳ的增生和活化，在控制ＲＡ的发病和疾病
进展方面具有重要意义Ｅ３ Ｊ。本研究对ＲＡ滑膜细
胞体外培养后进行形态学（倒置显微镜下活体观
察和ＨＥ染色）、组织学（ＡＫＰ和苏丹一Ⅲ染色）、免
疫组化［Ｖｉｍｅｎｔｉｎ（＋）、ＦＶＩＩＩ因子（～）、ＣＤ６８（一）］
和流式细胞仪（Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ＋，ＣＩＮ４、ＨＬＡ—ＤＲ、
部缺氧，促进血管新生；血管翳形成后又增加局部
的炎症因子浓度，滑膜ＦＬＳ增殖、血管新生和炎
症协同，加速关节破坏，导致关节畸形和功能障
碍 ］。沙利度胺在体外抑制血管内皮生长因子
（ＶＥＧＦ）和碱性纤维生长因子（ｂＦＧＦ）介导的血
管再生，是血管生成抑制剂，可治疗增生的滑膜
炎，减轻关节炎的症状和体征Ｉ ｚ０ｊ。Ｎａｇａｓｈｉｍａ将
ＣＤ１ｌｂ含量均低于１．５％）证实培养传代后的滑
膜细胞为ＦＬＳ。但是ＲＡ滑膜组织充血水肿，可
见色素沉着，分离ＦＬＳ培养时增殖传代能力强，
传代时间短，细胞分裂相多见。虽然ＲＡ关节滑
液中炎症细胞聚集，但分离的ＦＬＳ却表现出较弱
的增殖潜能，细胞传代能力低下。ＲＡ—ＦＬＳ体外
培养时倍增速度和传代时间符合非癌性细胞的生
长曲线，提示在无刺激因子干预时体外培养条件
下，ＲＡ－ＦＬＳ呈良性增殖特性。这一结果与其它
学者ｌ 』对比ＲＡ和ＯＡ患者ＦＬＳ特性的结论一
致。提示ＲＡ滑膜炎时ＦＬＳ的增殖和炎症与患
者体内多种炎症因子高表达，诱导ＦＬＳ增殖分化
障碍有更密切的关系。
３．２ Ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ对ＲＡ滑膜的作用
沙利度胺是谷氨酸衍生物，化学名为Ｎ一２（２，
６二氧一３一哌啶基）一邻苯二甲酰亚胺。体内外实验
表明沙利度胺可抑制ＴＮＦ—ａ、抗炎、抑制血管再
生和免疫调节作用。
在ＲＡ的关节腔中有多种炎细胞（中性粒细
胞、巨噬细胞及淋巴细胞）浸润分泌大量致炎因子
（ＴＮＦ－ａ、ＴＧＦ一８、ＩＦＮ－ｙ、ＩＬ一８等），促进ＶＥＧＦ、
ｂＦＧＦ和血管生成素（ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ－１，Ａｎｇ－１，其可
包裹和稳定新生血管）高表达 ５。其中最主要的
ＴＮＦ—ａ、促进ＮＦ－￣：Ｂ活化，增加Ａｎｇ一１表达，促使
单核细胞分泌ＶＥＧＦ，增强内皮细胞的增殖、迁
移及诱导ＭＭＰｓ合成，分解细胞外基质，加速骨
和软骨破坏［ 。有学者［ ］给佐剂型关节炎鼠１２１
服沙利度胺及其类似物ＣＣ１０６９，发现ＣＣ１０６９可
减轻鼠的关节炎症状，并呈剂量依赖性减少ＴＮＦ
—ａ
和ＩＬ一２ ｍＲＮＡ水平。Ｂｏｍｂｉｎｉ等观察到沙利
度胺和抗ＴＮＦ—ａ抗血清能抑制卵白蛋白在免疫
鼠膝关节中介导的中性粒细胞募集作用。并呈时
间和剂量依赖特性，这一作用可以被沙利度胺和
抗ＴＮＦ－ａ一抗血清所减弱，在培养上清液中高滴度
的ＴＮＦ－ａ分泌也可被沙利度胺抑制，证明其通过
血管生成抑制剂注射到移植有ＲＡ滑膜碎片的免
疫缺陷鼠皮下，发现不仅可抑制血管内皮细胞增
殖，还可减少滑膜细胞增殖…』。
本实验结果显示沙利度胺可抑制ＲＡ的ＦＬＳ
的增生，减少细胞的有丝分裂，延长Ｇ１期，诱导
细胞成熟。沙利度胺对炎症关节ＲＡ—ＦＬＳ增殖率
的免疫调节作用明显，并呈现出显著的量效曲线。
ＲＴ－ＰＣＲ检测证实沙利度胺是通过抑制原癌基
因ｃ－ｆｏｓ表达而起效的。说明沙利度胺ｅ不仅能
抑制ＴＮＦ－ａ分泌和血管再生，也可直接调控细胞
转录过程，降低细胞ＦＬＳ的增殖活性，这一作用
是不依赖于Ｔ细胞介导的。另一方面，沙利度胺
能抑制ＣＯＸ－２的表达，与Ｆｕｊｉｔａ等报道的沙利度
胺调节脂多糖介导的ＣＯＸ一２ ｍＲＮＡ表达，降低
ＰＧＥ２合成相一致 １ ，成为其发挥免疫抑制的一
种方式。迄今为止，沙利度胺对滑膜ＦＬＳ影响的
研究结果甚少，本试验发现沙利度胺免疫调节的
不同途径，其与沙利度胺已知的作用机制的关系
如何，值得进一步验证和完善。
参考文献
［１］Ａｒａｙｓｓｉ Ｔ Ｋ，Ｓｃｈｕｍａｃｈｅｒ Ｈ Ｒ Ｊｒ，Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｍｏｄｉｆｉｅｄ
ｎｅｅｄｌｅ ｆｏｒ ｓｍａｌｌ ｊｏｉｎｔ ｂｉｏｐｓｉｅｓ［Ｊ］．Ｊ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ，１９９８，２５：
８７６．
［２］舒强，李兴福，侯怀水．等．艾拉莫德对骨关节炎滑膜成
纤维细胞特性的影响［Ｊ］．中华风湿病学杂志，２００６，１０
（７）：３８９．
［３］Ｋｒａａｎ Ｍ Ｃ，Ｈ＆ｒｉｎｇｍａｎ Ｊ Ｊ，Ｗｅｅｄｏｎ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｔ ｃｅｌｌｓ，ｆｉ—
ｂｒｏｂｌａｓｔ－ｌｉｋｅ ｓｙｎｏｖｉｏｃｙｔｅｓ，ａｎｄ ｇｒａｎｚｙｍｅ Ｂ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ ｃｅｌｌｓ
＆ｒｅ ａｓｓｏｃｉａｔｄｅ ｗｉｔｈ ｊｏｉｎｔ ｄａｍａｇｅ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｒｅｃｅｎｔ ｏｎｓｅｔ
ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ［Ｊ］．Ａｎｎ Ｒｈｅｍｕ Ｄｉｓ，２００４，６３：４８３．
［４］ＬｏｒｉｅｓＲ ＪＵ，ＤｅｒｅｓｅＩ，ＤｅＢａｒｉ ＣＤｅ，ｅｔ ａ１．Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｇｒｏｗｔｈ
ｒａｔｅ ｏｆ ｆｉｂｍｂｌａｓｔ－ｌｉｋｅ ｓｙｎｏｖｉｌａ ｃｅｌｌｓ ｉｓ ｒｅｄｕｅｅｄ ｂｙ ｍｅｔｈｃ）ｔｒｅｘａｔｅ
ｔｒｅａｔｍｅｎｔ［Ｊ］．Ａｎｎ Ｒｈｅｍｕ Ｄｉｓｅ，２００３，６２：５６８．
［５］Ｃｕｌｏ Ｍ Ｉ，Ｖｅｒｇｌｅｓ Ｄ，Ｈｏｒｖａｔ Ｇ．ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＴＮＦ—ａｌ－
ｐｈａ，ＣＡＭＰ，ＰＧＥ２ ａｎｄ ＩＬ一１８ ｉｎ ｓｙｎｏｖｉｌａ ｆｌｕｉｄ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ
ｗｉｔｈ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ａｎｄ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ
［Ｊ Ｊ．ＡｎｎＲｈｅｕｍＤｉｓ，２００５，６４：１８３１．
（下转第４４面）
维普资讯
・
４４ ・ 实用临床医药杂志 第１１卷
状态，主要表现为血小板活性增加，高凝血、低抗
凝及纤溶活性降低等变化。血小板表面糖蛋白受
体是血小板黏附到血管壁成分和血小板间相互作
用的关键物质，其中纤维蛋白原受体ＧＰ １Ｉ ｂ／ＧＰ
ＨＩ ａ是血小板膜上最丰富的受体，受体与纤维蛋
白原结合导致血小板聚集，成为导致血小板性血
栓形成的最后通路。ＧＰＨＩ ａ合成后不单独插到细
２型糖尿病患者血小板激活功能的机制，可能与
以下几方面有关：①运动促进一氧化氮（ＮＯ）的
合成，增加血浆ＮＯ浓度及血管ＮＯ的释放。而
ＮＯ能够减少活化后的血小板膜表面糖蛋白的表
达，包括Ｐ一选择素和Ｇｐ １ ｂ／ＩＩＩ ａ，抑制血小板的
进一步活化 ］。②运动降低血浆内皮素的含量。
高血压时，受损的内皮释放大量血管活性物质，促
进血小板聚集。其中ＥＴ一１能显著增加血小板
表面１１ ｂ／ＩＩＩａ受体的表达，激活血小板 ］。③运
动使血管内皮释放ＰＧＩ２增加 。④高甘油三酯
通过血小板上的特殊受体使血小板活化，长期高
血糖可使血小板聚集诱导剂增加、抑制物减
少［
胞膜中，与ＧＰ １ ｂ结合后按１：１组成异二聚体复
合物在血小板膜表面表达，测定血小板膜上的
ＣＤ６ｌ（ＧＰＨＩ ａ）可表示ＧＰⅡｂ／ＧＰＨＩ ａ的活性 Ｊ。
血小板胞浆内Ａ颗粒膜上的ＣＤ６，Ｐ，随活化血小
板的脱颗粒而与血小板膜融合，在血小板膜上表
达为活化血小板的另一分子标志物。血栓素Ａ２
（ＴＸＡ２）与前列环素（ＰＧＩ２）是花生四烯酸的主要
参考文献
［１］ Ｓｏｗｅｒｓ Ｊ Ｒ，Ｅｐｓｔｅｉｎ Ｍ，Ｆｒｏｈｌｉｃｈ Ｅ Ｄ Ｄｉａｂｅｔｅｓ，ｈｙｐｅｒｔｅｎ—
ｓｉｏｎ ａｎｄ ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，２００１，３７：
１０５３
代谢产物。ＴＸＡ２具有强烈的血小板聚集作用。
而ＰＧＩ２是体内合成的最强的血小板解聚物质，２
者的平衡，对于维持血液的正常生理状态具有重
要作用。但２者在体内均不稳定，通过测定其代
谢产物ＴＸＢ２及６一ｋｅｔｏ—ＰＧＦｌａ来反映血浆水平。
［２］ Ａｎｄｒｅ Ｐ，Ａｌａｉｍｏ Ｌ，Ｐｒａｓａｄ Ｓ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｐｌａｔｅｌｅｔ—ｄｅｒｉｖｅｄ
ＣＤ４０Ｌ：ｔｈｅ ｓｗｉｔｃｈ—ｈｉｔｔｉｎｇ ｐｌａｙｅｒ ｏｆ ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．
Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，２００２，１０６：８９６．
糖尿病患者血小板活性升高的原因是综合性的，
血小板活化状态成为早期预测糖尿病并发症的方
法之一＿２ Ｊ。高血压合并糖尿病患者的抗凝及抗
血小板治疗是防止并发症的重要措施，但由于服
药依从性、药物副作用以及阿司匹林抵抗等原因
［３］Ｌｉｐ Ｇ Ｙ，Ｂｌａｎｄ Ａ Ｄ．Ｄｏｅｓ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ ｃｏｎｆｅｒ ａ ｐｒｅｔｈｒｏｍ—
ｂ０ｔｉｃ ｓｔａｔｅ，Ｖｉｒｃｈｏｗ ｓｔｒｉａｌ ｒｅｖｉｓｉｔｅｄ［Ｊ ｊ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，２００２，
１Ｏ１：２１８
［４］Ｓｒｅｅｄｌａｒａ Ｒ，Ｉｔａｇａｋｉ Ｉ，Ｈａｋｉｍ Ｒ Ｍ Ｕｒｅｍｉｃ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｈａｖｅ ｉｎ—
ｄｕｃｅｄ ｐｌａｔｅｌｅｔ ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ ｍｅｄｉａｔｅｅｌ ｂｙ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ
ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｉ１ ｂ／Ｉ］］ａ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ［Ｊ］．Ａｍ Ｊ Ｋｉｎｄｅｙ，１９９６，２７：
３５５
影响了抗血小板治疗的临床效果。运动可以降低
血压及血糖，有氧运动已成为高血压及糖尿病治
疗的基本方法，但有氧运动对患者的血小板功能
状态是否产生影响，产生什么样的影响，有关的研
究报道较少。
［５］汪钟．现代血栓病学［Ｊ］．北京：中国医科大学协和医科
大学联合出版社，１９９６．１９１．
［６］夏珂高血压导致血小板活化的机制［Ｊ］国外医学・生
理、病理科学与临床分册，２００５，２５（２）：１２０．
［７］ Ｍａｅｄａ Ｓ，Ｔａｎａｂｅ Ｔ，Ｍｉｙａｕｃｈｉ Ｔ，ｅｔ ａ１．Ａｅｒｏｂｉｃ ｅｘｅｒｃｉｓｅ
ｔｒａｉｎｉｎｇ ｒｅｄｕｃｅｓ ｐｌａｓｍａ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ一１ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｏｌｄｅｒ
ｗｏｍｅｎ［Ｊ］．Ｊ Ａｐｐｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ，２００３，９５（１）：３３６．
［８］Ｗａｎｇ Ｊ Ｓ，Ｊｅｎ Ｃ Ｊ，Ｃｈｅｎ Ｈ Ｉ．Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｃｈｒｏｎｉｃ ｅｘｅｒｃｉｓｅ ａｎｄ
ｄｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇ ｏｎ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ ｗｏｍｅｎ［Ｊ］．Ｊ Ａｐｐｌ ｐｈｙｓ—
ｉｏｌ。１９９７，８３（６７）：２０８０．
在本研究中，规律运动不仅可以降低患者的
血压与血糖还可以降低患者血小板表面糖蛋白受
体的表达及ＴＸＢ２的水平，升高６一ｋｅｔｏ—ＰＧＦｌａ，
降低血小板的聚集率。有氧运动减轻高血压合并
（上接第４１面）
ｆ６］Ｃｌａｖｅｌ Ｇ，Ｂｅｓｓｉｓ Ｎ，Ｂｏｉｓｓｉｅｒ Ｍ Ｃ Ｒｅｃｅｎｔ ｄａｔａ ｏｎ ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｆｏｒ
［９］ Ｃｏｎｗａｙ Ｄ Ｓ，Ｐｅａｒｃｅ Ｌ Ａ．Ｐｌａｓｍａ ｙｏｎ Ｗｉｌｌｅｂｒｎｄ ｆａａｃｔｏｒ ａｎｄ
ｓｏｌｕｂｌｅ ｐ－ｓｅｌｃｔｉｅｎ ａｓ ｉｎｄｉｃｅｓ ｏｆ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｄａｍａｇｅ ａｎｄ ｐｌａｔｅｌｅｔ
ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｉｎ １ ３２ １ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｎｏｎｖａｌｖｕｌａｒ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ
［Ｊ］．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，２００２，１０６：１９６２．
ｂｒｏｂｌａｓｔｓ ｖｉａ ｔｈｅ ＮＦ－ｋａｐｐａ Ｂ ｓｉｇｎａｌｌｉｇ ｐａｔｈｗａｙ［Ｊ］．Ｂｉｎｏｃｈｅｍ
Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ，２００５，３２８：４０９．
ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ［Ｊ］．Ｊｏｉｎｔ Ｂｏｎｅ Ｓｐｉｎｅ，
２００３，７０：３２１．
［１０］ｂｉｎｅｒ Ｄ Ｔ，Ｂｒａｈｎ Ｅ．Ｎｅｗ ｎｔｉａ ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ
［７］ＯｌｉｖｅｒＳ Ｊ，ＦｒｅｅｍａｎＳＬ，Ｃｏｒｒａｌ ＬＧ，ｅｔａ１．Ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ ａｎａ—
ｌｏｇｕｅ ＣＣ１０６９ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｒａｔ ａｄｊｕｖａｎｔ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ
ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｓｙｎｏｖｉｔｉｓ［Ｊ］．Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｉｎｖｅｓｔｉｇ
Ｄｒｕｇｓ，２００５，１４：１．
［Ｊ］．ＣｌｉｎＥｘｐ Ｉｎｍｍｎｏｌ，１９９９，１１８：３１５．
［８］Ｂｏｍｂｉｎｉ Ｇ，Ｃａｎｅｔｔｉ Ｃ，Ｒｏｃｈａ Ｆ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｔｕｍｏｕｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ
ｆａｃｔｏｒ－ａｌｐｈａ ｍｅｄｉａｔｓ ｎｅｕｔｅｒｏｐｈｉｌ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ｔｏ ｔｈｅ ｋｍｅｅ ｓｙｎｏｖｉｌａ
［１１］Ｎａｇａｓｈｉａ Ｍ，Ｔａｎａｋｍａ Ｈ，Ｔａｋａｈａｓｈｉ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｔｈｅ
ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｓｙｎｏｖｉａｌ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒ－
ａｔｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｓｙｎｏｖｉｌａ ｔｉ￣ｕｅｓ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ
ｃａｖｉｔｙ ｄｕｒｉｎｇ ｉｍｍｕｎｅ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｅｕｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，
２００４，４９６：１９７．
ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ｕｓｉｇ ＳＣＩｎＤ ｍｉｃｅ［Ｊ］．Ｌａｂ Ｉｎｖｅｓｔ，２００２，８２：９８１．
［１２］Ｆｕ］ｉｔａ Ｊ，Ｍｅｓｔｒｅ Ｊ Ｒ，Ｊｅｒｏｍｅ Ｂ．ｅｔ ａ１．Ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ ａｎｄ Ｉｔｓ
Ａｎａｌｏｇｕｅｓ Ｉｎｈｉｂｉｔ Ｌｉｐｏｐｏｌｙ￣ｃｃｈａｒｉｄｅ—ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ
［９］Ｓｃｏｔｔ Ｂ Ｂ，Ｚａｒａｔｉｎ Ｐ Ｆ，Ｇｉｌｍａｒｔｉｎ Ａ Ｇ，ｅｔ ａ１．ＴＮＦ—ａｌｐｈａ
ｍｏｄｕｌａｔｅｓ ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ－１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ｓｙｎｏｖｉａｌ ｆｉ—
Ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ－２ Ｃｌｉｎ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，２００１，７：３３４９．