2024年4月22日发(作者：濮成济)
产品详细说明
2×Master PCR Mix
2×Master PCR Mix中含有2×Taq DNA Polymerase，2×PCR Buffer，2×dNTP及PCR反应的优化剂
和稳定剂，只需加入适量引物、模板和水即可进行PCR扩增。大大简化了PCR操作，使操作更加快捷，提
高了效率；也减少了PCR操作过程中可能导致的污染，使PCR的重复性更好。且含有电泳时所必需的试剂，
可直接上样电泳。
2×Master PCR Mix可以进行各种常规的PCR扩增，特别适合用于定量和半定量的PCR扩增。
二、试剂盒组份
组份
2×Master PCR Mix
Cat ：BM321
0.5mL
Cat ：BM322
1.0mL
Cat ：BM323
1.0mL×6
2×Master PCR Mix中的组份包括：
2×PCR buffer
0.4mM dNTPs
3 mM Mg
0.1u/μL Taq DNA Polymerase
溴酚蓝和比重增加物
三、试剂盒以外自备仪器和试剂
无菌双蒸水，模板，PCR管，可调移液器，PCR仪。
四、保存条件：
-20℃保存，一年有效。
五、注意事项：
1、
由于PCR反应非常灵敏可以扩增目的基因序列超过1000万倍，在使用Taq酶时请注意避免微量待
扩增DNA的污染，并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。
2、
Taq DNA polymerase在PCR过程中每循环的出错几率约为2.2×10，对于大于1kb的DNA片断的
克隆推荐使用出错几率更低的DNA聚合酶，例如Pfu DNA polymerase。对于普通的PCR或RT-PCR
定性检测或定量检测，Taq DNA polymerase是最佳选择。
3、
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
六、操作规程
1、
使用前每个组份轻轻混匀，然后2000rpm离心20s。
2、
取灭过菌的0.2ml PCR管，参考如下表格设置反转录反应（50 μL反应体系）：
双蒸水
2×Master PCR Mix
引物I(10μM)
引物II(10μM)
模板DNA
总体积
23
-
n μL
25 μL
1 μL
1 μL
n μL
50 μL
-5
2＋
注：对于不同类型的模板在50µl反应体积中推荐用量如下：
哺乳动物基因组DNA：0.1-1µg；大肠杆菌基因组DNA：10-100ng；质粒DNA：0.1-10ng。
过多的模板DNA容易导致非特异性的PCR产物
3、
轻轻混匀(可以用Vortex在最低速度轻轻混匀或用移液器吹打混匀)，随后2000rpm离心20s沉淀
液体。
4、
如果所使用的PCR仪有热盖则省略本步骤。如果PCR仪没有热盖，则在管内滴入一滴矿物油。
5、
各设置好的PCR反应管置于PCR仪上，开始PCR反应。
a、
PCR扩增条件参考：
Step1(起始变性)： 94
℃
3min
Step2(变性)： 94
℃
30sec
Step3(退火)： 45～65
℃
30sec
Step4(延伸)： 72
℃
1min
Step5(循环)： Go To Step2 for 25～35 cycles
Step6(最终延伸)： 72
℃
10min
StepP6(临时保存)： 4
℃
forever
b、
PCR反应的设置需根据模板、引物、PCR产物的长度和GC含量等条件的不同设定不同的PCR
反应条件包括温度、时间、循环数及镁离子的浓度等。
c、
Step4(延伸)的时间设置需根据PCR产物的长度进行设置，通常每kb产物的延伸时间为1
分钟。例如PCR产物的长度为1kb，则延伸时间可以设置为1分钟，PCR产物的长度为2kb，
则延伸时间可以设置为2分钟，以此类推。
d、
对于初次进行的PCR，为尽量确保可以扩增出预期的PCR产物，可以把循环数设置为35。
对于需进行半定量或定量的PCR反应循环数一定要进行适当优化，使PCR反应没有达到
平台期。
6、
反应结束后，取反应液10μL进行琼脂糖凝胶电泳，确认PCR反应产物。如果此PCR产物需用于
以后实验，应将PCR产物冷冻保存。
七、常见问题分析及解决方案
常见问题 可能原因
引物设计不合适，靶
假阳性
序列太短或引物太短
靶序列或扩增产物的
交叉污染
重新设计引物
操作时应小心轻柔，所有试剂或器材均应高压消毒，所用
离心管及进样枪头等均应一次性使用。
1、
请选择适当的引物设计软件进行引物设计，注意引物
的GC含量、二级结构、二聚体、退火温度、长度、特
异性等方面的问题。
2、
在加入酶切位点等的引物中，一定要注意加入酶切位
无扩增条带、
PCR产物非常少
或有非特异性条
带
点等后整条引物的GC含量、二级结构、二聚体、退火
温度、长度、特异性等方面的问题。
建议解决方案
引物设计不佳
3、
引物的浓度除了测定OD值，还要做琼脂糖凝胶电泳，
两个引物的条带的亮度要相当，假如相差太大，在稀
释引物时要平衡其浓度。
4、
引物应高浓度小量分装保存，防止多次冻融或长期放
冰箱冷藏部分，导致引物变质降解失效；
5、
在原有引物效果不佳的情况并且阳性对照引物可以正
常工作的情况下，可以考虑更换引物。
2024年4月22日发(作者：濮成济)
产品详细说明
2×Master PCR Mix
2×Master PCR Mix中含有2×Taq DNA Polymerase，2×PCR Buffer，2×dNTP及PCR反应的优化剂
和稳定剂，只需加入适量引物、模板和水即可进行PCR扩增。大大简化了PCR操作，使操作更加快捷，提
高了效率；也减少了PCR操作过程中可能导致的污染，使PCR的重复性更好。且含有电泳时所必需的试剂，
可直接上样电泳。
2×Master PCR Mix可以进行各种常规的PCR扩增，特别适合用于定量和半定量的PCR扩增。
二、试剂盒组份
组份
2×Master PCR Mix
Cat ：BM321
0.5mL
Cat ：BM322
1.0mL
Cat ：BM323
1.0mL×6
2×Master PCR Mix中的组份包括：
2×PCR buffer
0.4mM dNTPs
3 mM Mg
0.1u/μL Taq DNA Polymerase
溴酚蓝和比重增加物
三、试剂盒以外自备仪器和试剂
无菌双蒸水，模板，PCR管，可调移液器，PCR仪。
四、保存条件：
-20℃保存，一年有效。
五、注意事项：
1、
由于PCR反应非常灵敏可以扩增目的基因序列超过1000万倍，在使用Taq酶时请注意避免微量待
扩增DNA的污染，并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。
2、
Taq DNA polymerase在PCR过程中每循环的出错几率约为2.2×10，对于大于1kb的DNA片断的
克隆推荐使用出错几率更低的DNA聚合酶，例如Pfu DNA polymerase。对于普通的PCR或RT-PCR
定性检测或定量检测，Taq DNA polymerase是最佳选择。
3、
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
六、操作规程
1、
使用前每个组份轻轻混匀，然后2000rpm离心20s。
2、
取灭过菌的0.2ml PCR管，参考如下表格设置反转录反应（50 μL反应体系）：
双蒸水
2×Master PCR Mix
引物I(10μM)
引物II(10μM)
模板DNA
总体积
23
-
n μL
25 μL
1 μL
1 μL
n μL
50 μL
-5
2＋
注：对于不同类型的模板在50µl反应体积中推荐用量如下：
哺乳动物基因组DNA：0.1-1µg；大肠杆菌基因组DNA：10-100ng；质粒DNA：0.1-10ng。
过多的模板DNA容易导致非特异性的PCR产物
3、
轻轻混匀(可以用Vortex在最低速度轻轻混匀或用移液器吹打混匀)，随后2000rpm离心20s沉淀
液体。
4、
如果所使用的PCR仪有热盖则省略本步骤。如果PCR仪没有热盖，则在管内滴入一滴矿物油。
5、
各设置好的PCR反应管置于PCR仪上，开始PCR反应。
a、
PCR扩增条件参考：
Step1(起始变性)： 94
℃
3min
Step2(变性)： 94
℃
30sec
Step3(退火)： 45～65
℃
30sec
Step4(延伸)： 72
℃
1min
Step5(循环)： Go To Step2 for 25～35 cycles
Step6(最终延伸)： 72
℃
10min
StepP6(临时保存)： 4
℃
forever
b、
PCR反应的设置需根据模板、引物、PCR产物的长度和GC含量等条件的不同设定不同的PCR
反应条件包括温度、时间、循环数及镁离子的浓度等。
c、
Step4(延伸)的时间设置需根据PCR产物的长度进行设置，通常每kb产物的延伸时间为1
分钟。例如PCR产物的长度为1kb，则延伸时间可以设置为1分钟，PCR产物的长度为2kb，
则延伸时间可以设置为2分钟，以此类推。
d、
对于初次进行的PCR，为尽量确保可以扩增出预期的PCR产物，可以把循环数设置为35。
对于需进行半定量或定量的PCR反应循环数一定要进行适当优化，使PCR反应没有达到
平台期。
6、
反应结束后，取反应液10μL进行琼脂糖凝胶电泳，确认PCR反应产物。如果此PCR产物需用于
以后实验，应将PCR产物冷冻保存。
七、常见问题分析及解决方案
常见问题 可能原因
引物设计不合适，靶
假阳性
序列太短或引物太短
靶序列或扩增产物的
交叉污染
重新设计引物
操作时应小心轻柔，所有试剂或器材均应高压消毒，所用
离心管及进样枪头等均应一次性使用。
1、
请选择适当的引物设计软件进行引物设计，注意引物
的GC含量、二级结构、二聚体、退火温度、长度、特
异性等方面的问题。
2、
在加入酶切位点等的引物中，一定要注意加入酶切位
无扩增条带、
PCR产物非常少
或有非特异性条
带
点等后整条引物的GC含量、二级结构、二聚体、退火
温度、长度、特异性等方面的问题。
建议解决方案
引物设计不佳
3、
引物的浓度除了测定OD值，还要做琼脂糖凝胶电泳，
两个引物的条带的亮度要相当，假如相差太大，在稀
释引物时要平衡其浓度。
4、
引物应高浓度小量分装保存，防止多次冻融或长期放
冰箱冷藏部分，导致引物变质降解失效；
5、
在原有引物效果不佳的情况并且阳性对照引物可以正
常工作的情况下，可以考虑更换引物。