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细胞线粒体分离试剂盒

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2024年5月12日发(作者:乜乐安)

细胞线粒体分离试剂盒

产品编号

C3601

产品名称

细胞线粒体分离试剂盒

包装

50-100次

产品简介:

细胞线粒体分离试剂盒(Cell Mitochondria Isolation Kit)是用于快速便捷分离培养细胞线粒体的试剂盒。

本试剂盒在分离线粒体的同时可以获得去除线粒体的细胞浆蛋白,可用于研究细胞色素c等线粒体蛋白向胞浆的释放。

使用本试剂盒分离获得的线粒体纯度较高,并且绝大部分分离获得的线粒体都含有完整的内膜和外膜,并具有线粒体的

生理功能。因此本试剂盒分离得到的线粒体可以用于线粒体的生理功能等方面的研究。例如可以使用碧云天的C2006 线

粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)测定分离得到的线粒体的膜电位。

本试剂盒分离得到的线粒体也可以被试剂盒中的线粒体裂解液或其它适当裂解液裂解后用于SDS-PAGE、Western、双向

电泳等蛋白分析。

本试剂盒提供了线粒体制备过程中匀浆程度的重要判断指标,即台盼蓝染色,使分离得到的线粒体的质量更加有保证。

台盼蓝染色液为选用试剂,在实验条件成熟后可以不必使用。

本试剂盒提供了蛋白酶抑制剂PMSF,使匀浆时蛋白酶的活性被适当抑制,这样在获得线粒体的同时还可以获得有时有用

的去除了大量线粒体的蛋白,在进行蛋白或酶活分析时可以作为对照。

如果每个样品的细胞数量为2000-5000万,本试剂盒可以处理50-100个样品。

包装清单:

产品编号

C3601-1

C3601-2

C3601-3

C3601-4

C3601-5

C3601-6

产品名称

线粒体分离试剂

台盼蓝染色液

线粒体储存液

线粒体裂解液

PMSF(晶体)

PMSF(溶剂)

说明书

包装

125ml

10ml

15ml

15ml

可配制1.5ml 100mM PMSF

1.5ml

1份

保存条件:

-20℃保存,一年有效。其中台盼蓝染色液也可以4℃保存,PMSF(晶体)和PMSF(溶剂)在配制成100mM PMSF溶液前可以

室温保存。

注意事项:

试剂盒中的试剂对于不同的实验目的不必全部使用。

如果不是用于制备线粒体蛋白样品,线粒体分离试剂和线粒体裂解液中不必加入PMSF。

如果用于制备线粒体蛋白样品,线粒体分离试剂和线粒体裂解液中需添加PMSF。PMSF一定要在线粒体分离试剂或线粒

体裂解液加入到样品中前2-3分钟内加入,以免PMSF在水溶液中很快失效。

分离线粒体的所有步骤均需在冰上或4℃进行,所用溶液需冰浴或4℃预冷。

通常在分离线粒体时前后两次离心速度选取600g和11,000g,如果希望纯度更高,但对线粒体的得率要求不高,前后两次

离心速度可以采用1000g和3500g。

台盼蓝与PMSF对人体有毒,请注意小心防护。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:

1. 准备溶液:室温融解试剂盒中的各种溶液,溶解后立即置于冰上并混匀。第一次使用时,把1.5ml PMSF(溶剂)加入到

PMSF(晶体)中,溶解并混匀,即得到1.5ml 100mM PMSF。配制好的100mM PMSF溶液-20℃保存。如果最终目的是制备

线粒体蛋白样品,根据样品数量,取适量线粒体分离试剂备用,在线粒体分离试剂加入到细胞样品中前数分钟内加入

PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。取适量线粒体裂解液备用,在线粒体裂解液加入到线粒体样品中前数分钟内加入

PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。

2. 收集细胞:

对于贴壁细胞:用PBS洗一遍,用胰酶细胞消化液(Trypsin-EDTA Solution)消化细胞,离心收集细胞。胰酶细胞消化液

(C0201)可以向碧云天订购。

对于悬浮细胞:直接离心收集细胞。

3. 洗涤细胞:用冰浴预冷的PBS轻轻重悬细胞沉淀,取少量细胞用于计数,剩余细胞600g,4℃离心5分钟沉淀细胞。弃上

清。

4. 预处理:加入1-2.5ml线粒体分离试剂或临用前添加了PMSF的线粒体分离试剂至2000-5000万细胞中,轻轻悬浮细胞,冰

浴放置10-15分钟。

5. 匀浆:把细胞悬液转移到一适当大小的玻璃匀浆器中,匀浆10-30下左右。

6. 匀浆效果的鉴定:不同细胞不同匀浆器所需的匀浆次数有所不同,需自行优化。通常可以在匀浆10次后取约2微升细胞匀

浆,加入30-50微升台盼蓝染色液,混匀后显微镜下观察台盼蓝染色阳性(蓝色)细胞的比例。如果阳性细胞比例不足

50%,增加5次匀浆。随后再同前取样进行台盼蓝染色鉴定。当阳性比例超过50%时即可停止匀浆进入下一步。请勿过度

匀浆,过度匀浆会导致线粒体的机械损伤。同时记录对于该细胞的匀浆次数,通常在后续实验时不必再摸索匀浆次数。

7. 把细胞匀浆在600g,4℃离心10分钟。

注:如需获得纯度更高的线粒体,可以将此步骤的离心速度改为1000g,其它离心条件不变;获得更高纯度线粒体的缺点

是相同数量细胞的线粒体抽提得率会下降。

8. 小心把上清转移到另一离心管中,在11,000g,4℃离心10分钟。

注:如需获得纯度更高的线粒体,可以将此步骤的离心速度改为3500g,其它离心条件不变;获得更高纯度线粒体的缺点

是相同数量细胞的线粒体抽提得率会下降。

9. 小心去除上清。沉淀即为分离得到的细胞线粒体。

注:如果希望获得去除线粒体的细胞浆蛋白,在本步骤需收集上清,并且在收集上清时注意勿触及沉淀。随后把收集的

上清12000g,4℃离心10分钟。取上清即为去除线粒体的细胞浆蛋白。

10. 线粒体的使用:

10A. 如果用于完整线粒体的功能或酶活性研究,初始2000-5000万细胞分离得到的线粒体样品中可以加入150-200微升线粒体储

存液,重悬线粒体。

10B. 如果用于线粒体的蛋白分析,初始2000-5000万细胞分离得到的线粒体样品中可以加入150-200微升临用前添加了PMSF的

线粒体裂解液裂解线粒体。裂解后的线粒体可以用于PAGE、Western、IP以及线粒体中的一些酶活性的测定等。裂解后的

蛋白样品可以使用BCA法测定蛋白浓度。BCA蛋白浓度测定试剂盒(P0009/P0010/P0010S/P0011/P0012/P0012S)可以向碧云

天订购。

10C. 如果用于双向电泳,请使用适当的用于双向电泳的裂解液处理线粒体。

使用本产品的文献:

1. Shen J, Huang C, Jiang L, Gao F, Wang Z, Zhang Y, Bai J, Zhou H, Chen Q.

Enhancement of cisplatin induced apoptosis by suberoylanilide hydroxamic acid in human oral squamous cell carcinoma cell lines.

Biochem Pharmacol. 2007 Jun 15;73(12):1901-9.

2. Zhang WC, Peng YJ, He WQ, Lv N, Chen C, Zhi G, Chen HQ, Zhu MS.

Identification and functional characterization of an aggregation domain in long myosin light chain kinase.

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3. Yu K, He Y, Yeung LW, Lam PK, Wu RS, Zhou B.

DE-71-induced apoptosis involving intracellular calcium and the Bax-mitochondria-caspase protease pathway in human neuroblastoma cells in vitro.

Toxicol Sci. 2008;104(2):341-51. Epub 2008 May 2.

4. Chen K, Zhang Q, Wang J, Liu F, Mi M, Xu H, Chen F, Zeng K.

Taurine protects transformed rat retinal ganglion cells from hypoxia-induced apoptosis by preventing mitochondrial dysfunction.

Brain Res. 2009 Jul 7;1279:131-8. Epub 2009 May 7.

5.

Xu WN, Liu WB, Liu ZP.

Trichlorfon-induced apoptosis in hepatocyte primary cultures of Carassius auratus gibelio.

Chemosphere. 2009 Nov;77(7):895-901.

6. Zhang Z, Wang S, Qiu H, Duan C, Ding K, Wang Z.

Waltonitone induces human hepatocellular carcinoma cells apoptosis in vitro and in vivo.

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Butyrate induces cell apoptosis through activation of JNK MAP kinase pathway in human colon cancer RKO cells.

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ROS mediated cytotoxicity of porcine adrenocortical cells induced by QdNOs derivatives in vitro.

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LPA rescues ER stress-associated apoptosis in hypoxia and serum deprivation-stimulatedmesenchymal stem cells.

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Apoptosis induced by a new flavonoid in human hepatoma HepG2 cells involves reactive oxygenspecies-mediated mitochondrial dysfunction and MAPK

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Y, Li RJ, Ying X, Tian W, Yao HJ, Men Y, Yu Y, Zhang L, Ju RJ, Wang XX, Zhou J, Chen JX, Li N, Lu WL

Targeting therapy with mitosomal daunorubicin plus amlodipine has the potential to circumventintrinsic resistant breast cancer.

Mol Pharm. 2011 Feb 7;8(1):162-75.

D, Qing Y, Tong Q, He Y, Xing Z, Zhao Y, Li Y, Wei Y, Huang W, Wu X.

Deltonin isolated from Dioscorea zingiberensis inhibits cancer cell growth through inducingmitochondrial apoptosis and suppressing Akt and mitogen

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Curcumin attenuates peroxynitrite-induced neurotoxicity in spiral ganglion neurons.

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K, Ren H, Wang Y, Fei E, Wang H, Wang G.

DJ-1 inhibits TRAIL-induced apoptosis by blocking pro-caspase-8 recruitment to FADD.

Oncogene. 2012 Mar 8;31(10):1311-22.

L, Yao HJ, Yu Y, Zhang Y, Li RJ, Ju RJ, Wang XX, Sun MG, Shi JF, Lu WL

Mitochondrial targeting liposomes incorporating daunorubicin and quinacrine for treatment ofrelapsed breast cancer arising from cancer stem cells.

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Piperonal ciprofloxacin hydrazone induces growth arrest and apoptosis of humanhepatocarcinoma SMMC-7721 cells.

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Neurol Sci. 2012 Feb 1. [Epub ahead of print]

2024年5月12日发(作者:乜乐安)

细胞线粒体分离试剂盒

产品编号

C3601

产品名称

细胞线粒体分离试剂盒

包装

50-100次

产品简介:

细胞线粒体分离试剂盒(Cell Mitochondria Isolation Kit)是用于快速便捷分离培养细胞线粒体的试剂盒。

本试剂盒在分离线粒体的同时可以获得去除线粒体的细胞浆蛋白,可用于研究细胞色素c等线粒体蛋白向胞浆的释放。

使用本试剂盒分离获得的线粒体纯度较高,并且绝大部分分离获得的线粒体都含有完整的内膜和外膜,并具有线粒体的

生理功能。因此本试剂盒分离得到的线粒体可以用于线粒体的生理功能等方面的研究。例如可以使用碧云天的C2006 线

粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)测定分离得到的线粒体的膜电位。

本试剂盒分离得到的线粒体也可以被试剂盒中的线粒体裂解液或其它适当裂解液裂解后用于SDS-PAGE、Western、双向

电泳等蛋白分析。

本试剂盒提供了线粒体制备过程中匀浆程度的重要判断指标,即台盼蓝染色,使分离得到的线粒体的质量更加有保证。

台盼蓝染色液为选用试剂,在实验条件成熟后可以不必使用。

本试剂盒提供了蛋白酶抑制剂PMSF,使匀浆时蛋白酶的活性被适当抑制,这样在获得线粒体的同时还可以获得有时有用

的去除了大量线粒体的蛋白,在进行蛋白或酶活分析时可以作为对照。

如果每个样品的细胞数量为2000-5000万,本试剂盒可以处理50-100个样品。

包装清单:

产品编号

C3601-1

C3601-2

C3601-3

C3601-4

C3601-5

C3601-6

产品名称

线粒体分离试剂

台盼蓝染色液

线粒体储存液

线粒体裂解液

PMSF(晶体)

PMSF(溶剂)

说明书

包装

125ml

10ml

15ml

15ml

可配制1.5ml 100mM PMSF

1.5ml

1份

保存条件:

-20℃保存,一年有效。其中台盼蓝染色液也可以4℃保存,PMSF(晶体)和PMSF(溶剂)在配制成100mM PMSF溶液前可以

室温保存。

注意事项:

试剂盒中的试剂对于不同的实验目的不必全部使用。

如果不是用于制备线粒体蛋白样品,线粒体分离试剂和线粒体裂解液中不必加入PMSF。

如果用于制备线粒体蛋白样品,线粒体分离试剂和线粒体裂解液中需添加PMSF。PMSF一定要在线粒体分离试剂或线粒

体裂解液加入到样品中前2-3分钟内加入,以免PMSF在水溶液中很快失效。

分离线粒体的所有步骤均需在冰上或4℃进行,所用溶液需冰浴或4℃预冷。

通常在分离线粒体时前后两次离心速度选取600g和11,000g,如果希望纯度更高,但对线粒体的得率要求不高,前后两次

离心速度可以采用1000g和3500g。

台盼蓝与PMSF对人体有毒,请注意小心防护。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:

1. 准备溶液:室温融解试剂盒中的各种溶液,溶解后立即置于冰上并混匀。第一次使用时,把1.5ml PMSF(溶剂)加入到

PMSF(晶体)中,溶解并混匀,即得到1.5ml 100mM PMSF。配制好的100mM PMSF溶液-20℃保存。如果最终目的是制备

线粒体蛋白样品,根据样品数量,取适量线粒体分离试剂备用,在线粒体分离试剂加入到细胞样品中前数分钟内加入

PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。取适量线粒体裂解液备用,在线粒体裂解液加入到线粒体样品中前数分钟内加入

PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。

2. 收集细胞:

对于贴壁细胞:用PBS洗一遍,用胰酶细胞消化液(Trypsin-EDTA Solution)消化细胞,离心收集细胞。胰酶细胞消化液

(C0201)可以向碧云天订购。

对于悬浮细胞:直接离心收集细胞。

3. 洗涤细胞:用冰浴预冷的PBS轻轻重悬细胞沉淀,取少量细胞用于计数,剩余细胞600g,4℃离心5分钟沉淀细胞。弃上

清。

4. 预处理:加入1-2.5ml线粒体分离试剂或临用前添加了PMSF的线粒体分离试剂至2000-5000万细胞中,轻轻悬浮细胞,冰

浴放置10-15分钟。

5. 匀浆:把细胞悬液转移到一适当大小的玻璃匀浆器中,匀浆10-30下左右。

6. 匀浆效果的鉴定:不同细胞不同匀浆器所需的匀浆次数有所不同,需自行优化。通常可以在匀浆10次后取约2微升细胞匀

浆,加入30-50微升台盼蓝染色液,混匀后显微镜下观察台盼蓝染色阳性(蓝色)细胞的比例。如果阳性细胞比例不足

50%,增加5次匀浆。随后再同前取样进行台盼蓝染色鉴定。当阳性比例超过50%时即可停止匀浆进入下一步。请勿过度

匀浆,过度匀浆会导致线粒体的机械损伤。同时记录对于该细胞的匀浆次数,通常在后续实验时不必再摸索匀浆次数。

7. 把细胞匀浆在600g,4℃离心10分钟。

注:如需获得纯度更高的线粒体,可以将此步骤的离心速度改为1000g,其它离心条件不变;获得更高纯度线粒体的缺点

是相同数量细胞的线粒体抽提得率会下降。

8. 小心把上清转移到另一离心管中,在11,000g,4℃离心10分钟。

注:如需获得纯度更高的线粒体,可以将此步骤的离心速度改为3500g,其它离心条件不变;获得更高纯度线粒体的缺点

是相同数量细胞的线粒体抽提得率会下降。

9. 小心去除上清。沉淀即为分离得到的细胞线粒体。

注:如果希望获得去除线粒体的细胞浆蛋白,在本步骤需收集上清,并且在收集上清时注意勿触及沉淀。随后把收集的

上清12000g,4℃离心10分钟。取上清即为去除线粒体的细胞浆蛋白。

10. 线粒体的使用:

10A. 如果用于完整线粒体的功能或酶活性研究,初始2000-5000万细胞分离得到的线粒体样品中可以加入150-200微升线粒体储

存液,重悬线粒体。

10B. 如果用于线粒体的蛋白分析,初始2000-5000万细胞分离得到的线粒体样品中可以加入150-200微升临用前添加了PMSF的

线粒体裂解液裂解线粒体。裂解后的线粒体可以用于PAGE、Western、IP以及线粒体中的一些酶活性的测定等。裂解后的

蛋白样品可以使用BCA法测定蛋白浓度。BCA蛋白浓度测定试剂盒(P0009/P0010/P0010S/P0011/P0012/P0012S)可以向碧云

天订购。

10C. 如果用于双向电泳,请使用适当的用于双向电泳的裂解液处理线粒体。

使用本产品的文献:

1. Shen J, Huang C, Jiang L, Gao F, Wang Z, Zhang Y, Bai J, Zhou H, Chen Q.

Enhancement of cisplatin induced apoptosis by suberoylanilide hydroxamic acid in human oral squamous cell carcinoma cell lines.

Biochem Pharmacol. 2007 Jun 15;73(12):1901-9.

2. Zhang WC, Peng YJ, He WQ, Lv N, Chen C, Zhi G, Chen HQ, Zhu MS.

Identification and functional characterization of an aggregation domain in long myosin light chain kinase.

FEBS J. 2008 May;275(10):2489-500. Epub 2008 Apr 8.

3. Yu K, He Y, Yeung LW, Lam PK, Wu RS, Zhou B.

DE-71-induced apoptosis involving intracellular calcium and the Bax-mitochondria-caspase protease pathway in human neuroblastoma cells in vitro.

Toxicol Sci. 2008;104(2):341-51. Epub 2008 May 2.

4. Chen K, Zhang Q, Wang J, Liu F, Mi M, Xu H, Chen F, Zeng K.

Taurine protects transformed rat retinal ganglion cells from hypoxia-induced apoptosis by preventing mitochondrial dysfunction.

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5.

Xu WN, Liu WB, Liu ZP.

Trichlorfon-induced apoptosis in hepatocyte primary cultures of Carassius auratus gibelio.

Chemosphere. 2009 Nov;77(7):895-901.

6. Zhang Z, Wang S, Qiu H, Duan C, Ding K, Wang Z.

Waltonitone induces human hepatocellular carcinoma cells apoptosis in vitro and in vivo.

Cancer Lett. 2009 Dec 28;286(2):223-31.

7. Zhang Y, Zhou L, Bao YL, Wu Y, Yu CL, Huang YX, Sun Y, Zheng LH, Li YX.

Butyrate induces cell apoptosis through activation of JNK MAP kinase pathway in human colon cancer RKO cells.

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8. Huang XJ, Zhang HH, Wang X, Huang LL, Zhang LY, Yan CX, Liu Y, Yuan ZH.

ROS mediated cytotoxicity of porcine adrenocortical cells induced by QdNOs derivatives in vitro.

Chem Biol Interact. 2010;185(3):227-34. Epub 2010 Feb 25.

9. Li Z, Wei H, Liu X, Hu S, Cong X, Chen X

LPA rescues ER stress-associated apoptosis in hypoxia and serum deprivation-stimulatedmesenchymal stem cells.

J Cell Biochem. 2010 Nov 1;111(4):811-20.

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Cytotoxicity of berberine on human cervical carcinoma HeLa cells through mitochondria, deathreceptor and MAPK pathways, and in-silico drug-target

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H, Xiao Y, Xiong C, Wei A, Ruan J.

Apoptosis induced by a new flavonoid in human hepatoma HepG2 cells involves reactive oxygenspecies-mediated mitochondrial dysfunction and MAPK

activation.

Eur J Pharmacol. 2011 Mar 11;654(3):209-16.

Y, Li RJ, Ying X, Tian W, Yao HJ, Men Y, Yu Y, Zhang L, Ju RJ, Wang XX, Zhou J, Chen JX, Li N, Lu WL

Targeting therapy with mitosomal daunorubicin plus amlodipine has the potential to circumventintrinsic resistant breast cancer.

Mol Pharm. 2011 Feb 7;8(1):162-75.

D, Qing Y, Tong Q, He Y, Xing Z, Zhao Y, Li Y, Wei Y, Huang W, Wu X.

Deltonin isolated from Dioscorea zingiberensis inhibits cancer cell growth through inducingmitochondrial apoptosis and suppressing Akt and mitogen

activated protein kinase signals.

Biol Pharm Bull. 2011;34(8):1231-9.

W, Fan Z, Han Y, Lu S, Zhang D, Bai X, Xu W, Li J, Wang H.

Curcumin attenuates peroxynitrite-induced neurotoxicity in spiral ganglion neurons.

Neurotoxicology. 2011 Jan;32(1):150-7.

L, Lu N, Dai Q, Wei L, Zhao Q, Li Z, He Q, Dai Y, Guo Q.

GL-V9, a newly synthetic flavonoid derivative, induces mitochondrial-mediated apoptosis andG2/M cell cycle arrest in human hepatocellular carcinoma

HepG2 cells.

Eur J Pharmacol. 2011 Nov 16;670(1):13-21.

Y, Deng L, Zhong H, Wang Y, Jiang X, Chen J.

Natural plant extract tubeimoside I promotes apoptosis-mediated cell death in cultured humanhepatoma (HepG2) cells.

Biol Pharm Bull. 2011;34(6):831-8.

K, Ren H, Wang Y, Fei E, Wang H, Wang G.

DJ-1 inhibits TRAIL-induced apoptosis by blocking pro-caspase-8 recruitment to FADD.

Oncogene. 2012 Mar 8;31(10):1311-22.

L, Yao HJ, Yu Y, Zhang Y, Li RJ, Ju RJ, Wang XX, Sun MG, Shi JF, Lu WL

Mitochondrial targeting liposomes incorporating daunorubicin and quinacrine for treatment ofrelapsed breast cancer arising from cancer stem cells.

Biomaterials. 2012 Jan;33(2):565-82.

ZY, Li YQ, Kang YH, Hu GQ, Huang-fu CS, Deng JB, Liu B.

Piperonal ciprofloxacin hydrazone induces growth arrest and apoptosis of humanhepatocarcinoma SMMC-7721 cells.

Acta Pharmacol Sin. 2012 Feb;33(2):271-8.

H, Hu Y, Wang P, Zhou J, Deng Z, Wen J

Down-regulation of Notch receptor signaling pathway induces caspase-dependent and caspase-independent apoptosis in lung squamous cell carcinoma cells.

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