2024年5月16日发(作者：买智)
维普资讯
１１．Ｎｏ ５
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆＣａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒＭｅｄｉｃ
ｉｎ
ｅ，Ｏｃｔｏｂｅｒ ２００６，Ｖ
ｏｌ
—
Ｃ．反应蛋白抑制活化的巨噬细胞分泌
基质金属蛋白酶
车京津，黄体钢，周丽娟
摘要：目的研究Ｇ反应蛋白（ＣＲＰ）对巨噬细胞分泌基质金属蛋白酶（Ｍ＾ ｓ）的影响。方法以不同浓度的ＣＲＰ
和／或５０￣ｇ／ｍｌ氧化的低密度脂蛋白（ＯＸ—ＬＤＬ）处理Ｔ 一１巨噬细胞，应用明胶酶谱法测定细胞培养上清液中
ＭＭＰ－２、ＭＭＰ一９、ＭＭＰ一１的活性。结果ＴＨＰ一１巨噬细胞在基础状态下分泌ＭＭＰ一２、ＭＭＰ一９、ＭＭＰ－１，ＣＲＰ抑制
其分泌，以ＭＭＰ一２为例，ＣＲＰ抑制ＭＭＰ一２的酶原（０．８２±０．０５１，与空白对照组比较Ｐ＜０．０１）和其活性形式（０．６１
±０．０３０，与空白对照组比较Ｐ＜０．０１）。ＯＸ—Ｌ【）Ｌ诱导ＭＭＰｓ的分泌，但这种作用被同时存在的ＣＲＰ所抑制（０．５６
±０．０９８，与０ｘ—ＬＤＬ组比较Ｐ＜０．０１）。结论
诱导作用。
ＣＲＰ抑制活化的巨噬细胞分泌ＭＭＰｓ，并抑制ｏｘ—ＬＤＬ对ＭＭＰｓ的
关键词： Ｇ反应蛋白； 氧化的低密度脂蛋白； 巨噬细胞； 基质金属蛋白酶
中国分类号：３２０．２４１０ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００７—５４１０（２００６）０５—０３２４—０４
ＣｌＩＰ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｔｈｅ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｏｆ ＭＭＰＳ ｂｙ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ ＣＨＥ ｉｎｇ－ｒｉｆｎ。ＨＵＡＮＧ —ｇａｎｇ。 ｛（）Ｕ Ｌｉ－ｊｕａｎ．
Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＣａｒｄｉｏｌｏｇｙ，Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｓｅｃｏｎｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，１ ｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔ ｉｎ ３００２１１，Ｃｈｉｎａ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：０ｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｃｌｒｉａｆｙ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ（、ＲＰ ｏｎ ｔｈｅ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｏｆ Ｍ ， ｓ（ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ）ｂｙ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ．
Ｍｅｔｈｏｄｓ ＴＨＰ一１ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ ｗｅｒｅ ｔｒｅａｔｅｄ ｂｙ ＣＲＰ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ａｎｄ／ｏｒ ＯＸ—ＬＤＬ（ｏｘｉｄｉｚｅｄ ｌｏｗ－ｄｅｎｓｉｔｙ
ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｊ ｏｆ ５０￣ｇ／ｍｌ。＾ 一２，＾ 一９ ａｎｄ＾ 一１ ｉｎ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｄｉｕｍ ｗｅｒｅ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｂｙ ｇｅｌａｔｉｎ ＳＤＳ－ＰＡＧＥ ｚｙｍｏｇ—
ｒａｐｈｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ＭＭＰ一２。ＭＭＰ＿９，ＭＭＰ一１ ｗｅｒｅ ｓｅｃｒｅｔｅｄ ｂｙ ＴＨＰ一１ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ ｉｎ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ，ａｎｄ ｗｅｒｅ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｂｙ
ＣＲＰ．Ｆｏｒ ｅｘａｍｐｌｅ。Ｐｒｏ－Ｍ＾ 一２（０．８２±０．０５１ ＶＳ ｏｎｔｃｒｏｌ ｒｏｕｐ，Ｐ＜０．０１）ａｇｎｄ＾ 一２（０．６１±０．０３０ ＶＳ ｏｎｔｃｒｏｌ
一１ ｂｙ
ｇｒｏｕｐ。Ｐ＜０．０１ Ｊ ｗｅｒｅ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃｎｔａｌｙ ｂｙ ＣＲＰ．Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅ ＣＲＰ ｉｎｈｉｂｉｔｄ ｔｅｈｅ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ＭＭＰｓ ｂｙ ＯＸ—Ｕ）Ｌ
（０．５６±０．０９８ ＶＳ ＯＸ—Ｕ）Ｌ ｇｒｏｕｐ，Ｐ＜０．０１）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ＣＲＰ ｉｎｈｉｂｉｔｄ ｅｔｈｅ ｅｃｒｓｅｔｉｏｎ ｏｆ ＭＭＰ一２，＾，Ｉ＾ 一９，＾
ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ．ａｎｄ ａｌｓｏ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｔｈｅ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ＭＭＰｓ ｂｙ ＯＸ—ＬＤ Ｌ＿
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｃ－ｒｅａｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ； Ｏｘｉｄｅｄ ｌｏｗ－ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ； Ｍａｃｍｐｈａｇｅ； Ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｍｔｅｉｎａｓｅｓ
通常认为动脉血栓形成是急性心脑血管事件的
主要病理基础，而大多数的动脉血栓发生在以大脂
核、薄纤维帽为特征的易损斑块发生破裂的部
位Ｌ１ Ｊ。斑块破裂的具体机制尚未完全阐明，但较为
明确的是在这一过程中存在着细胞外基质降解过
多。研究显示基质金属蛋白酶（ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏ—
ｔｅｉｎａｓｅ，ｃ、 ，ＩＰｓ）可能是斑块不稳定和发生破裂的“罪
犯”Ｌ２ Ｊ。Ｇ反应蛋白（Ｃ－ｒｅａｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ，ＣＲＰ）因可
巨噬细胞为材料，以氧化的低密度脂蛋白（ｏｘｉｄｉｚｅｄ
ｌｏｗ—ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ，ＯＸ—ｕ）Ｌ）对ＭＭＰｓ的影响作
为阳性对照，研究ＣＲＰ对活化的巨噬细胞分泌
ＭＭＰ－２、ＭＭＰ一９和ＭＭＰ一１的作用。
１材料与方法
１．１主要试剂、仪器及其来源
ｏｘ－ＬＤＬ购自中国协和医科大学脂蛋白研究室，
以ｌＯｔＬｍｏｌ／Ｌ的ＣｕＳ０４氧化１８ｈ，Ｌｏｗｒｙ法测定蛋
与肺炎球菌细胞壁上的Ｃ多糖结合而得名，长期以
来被认为是急性期蛋白的一种，是炎症标志物。近
来的研究显示，ＣＲＰ与动脉粥样硬化，特别是动脉
粥样硬化的进展具有密切的联系Ｌ４．５ Ｊ。目前对于
ＣＲＰ是否影响与动脉粥样硬化相关的细胞成分分
泌ＭＭＰｓ的研究尚少ｌ６ Ｊ。本实验以ｎ 一１衍生的
白含量，测定脂质过氧化产物丙二醛反映低密度脂
蛋白（１ｏｗ—ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ，ＬＤＬ）的氧化程度，用
硫代巴比妥酸反应物（ＴＢＡＲＳ）值表示，范围在３５～
５０ｎｍｏｌ／ｍｇｐｒｏ；乙酸肉豆蔻佛波醇（ＰＭＡ）：Ｇｉｂｉｃｏ
公司；人重组ＣＲＰ：Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ公司；丙烯酰胺：Ｓｉｇ—
ｍａ公司；Ｎ，Ｎ一亚甲双丙烯酰胺：Ｐｒｏｍｅｇａ公司；Ｂｒｉｊ一
３５，甘氨酸：Ｒｏｃｈｅ公司；ＴＥＭＥＤ：Ｓｉｇｍａ公司；明胶：
作者单位：天津医科大学第二医院心脏科，天津３００２１１
作者简介：车京津（１９７１一），女，天津市人，２００４年毕业于天津医科大
学，博士，主治医师，现从事心血管临床工作。
天象人生物试剂公司。
１．２方法
１．２．１ 细胞培养及处理
・
ＴＨＰ一１细胞经含终浓度
３２４・
维普资讯
中国心血管杂志２００６年１０月第１１卷第５期
为２００ｎｍｏｌ／ｇ ＰＭＡ的ＲＰＭＩ一１６４０处理１２ｈ后将培
养液换为含０．１％ＢＳＡ的ＲＰＭＩ一１６４０培养液（含双
量资料以均数±标准差（ ±Ｓ）表示，多组问比较采
用单因素方差分析，实验组与对照组比较采用Ｄｕｎ～
抗），１２ｈ后更换新的上述培养液并给予１／ｚｇ／ｍｌ、
１０／ｚｇ／ｍｌ ＣＲＰ和俄５０／，ｇ／ｍｌ ＯＸ—ＬＤＬ处理２４ｈ，留
取细胞培养上清液待测。
ｎｅｔｔ ｔ检验，实验组之间比较采』１ｊ ｑ检验，以Ｐ＜
０．０５为统计学上有显著性差片。
２结果
１．２．２明胶酶谱法测定ＭＭＰｓ活性首先将被检
细胞培养液１：１稀释，取９０／ｚｌ稀释液加入３Ｉ） ｌ加样
２．１ ＣＲＰ对激活的巨噬细胞分泌ＭＭｔ ～２的影响
如图１和表１所示，通过明胶酶｛｝牛法分忻 示，
基础条件下由ＴＨＰ一１巨噬细胞合成分 ：艟为
７２ＫＤａ的酶原形式的ＭＭＰ一２，许有少最 肜式
缓冲液（４％ＳＤＳ，０．２５Ｍ Ｔｒｉｓ—ＨＣ１，４０％甘油，０．１％
溴酚蓝）混匀，取３０／ｚｌ上样。在４℃条件下进行
ＳＤＳ－ＰＡＧＥ不连续电泳，电泳开始时，电压为８ｖ／
ｃｍ，溴酚蓝进入分离胶后电压增至１５ｖ／ｃｍ，持续电
泳直到溴酚蓝跑到胶外。而后在室温下将凝胶置于
洗脱液（２．５％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ一１００，５０ｍｍｏｌ／Ｌ Ｔｒｉｓ—ＨＣＬ，
５ｍｍｏｌ／ｇ Ｃａｃｌ２．Ｈ２Ｏ，１／ｚｍｏｌ／ｇ Ｚｎｃｌ２，ｐＨ７．６）中缓慢
的ＭＭＰ一２。ＣＲＰ以剂量依赖 ，』‘式抑制 此炎
噬细胞分泌ＭＭＰ一２，其中包括嗍 及其 形式。
５０／，ｇ／ｍｌ的ＯＸ—ＬＤＬ增加ＭＭＰ－２的分泌（ｆ，＜
０．０５），但这种作用被同时存在的（＂ＲＩ， 抑
ＯＸ．ＬＤＬ组比较，Ｐ＜０．０１）。
震荡４５ｍｉｎ×２，以去除凝胶中的ＳＤＳ；再置于漂洗
液（５０ｍｍｏｌ／Ｌ Ｔｒｉｓ—ＨＣＬ，５ｍｍｏｌ／ｇ Ｃａｃｌ２．Ｈ２Ｏ，ｌｔｘｍｏｌ／
Ｌ Ｚｎｃｌ２，ｐＨ７．６）中漂洗２次，每次２０ｍｉｎ；最后置于孵
育液（５０ｍａｍｌ／ｇ Ｔｒｉｓ—ＣＬ ｐＨ ７．６，５ｒｅｔｏｏｌ／ｑ＿ ＣａＣｌ２，
ｌｔｍａｏｌ／ｇＺｎｃｌ２，０．０２％Ｂ 一３５，０．０２％叠氮钠）中３７℃
２．２ ＣＲＰ对激活的巨噬细胞分泌ＭＭ！ 一９的影响
如图１和表１所示，基础条件下… Ｉ＇ＨＰ一１臣噬
细胞合成分子量为９２ＫＤａ的ＭＭＰ一９，ＣＲＰ以剂镶
依赖性方式抑制此类巨噬细胞分泌ＭＭＰ一９，ＯＸ—
ＬＤＬ增加ＭＭＰ一９的分泌（Ｐ＜０．０５），ｆ『Ｉ这种作用
被同时存在的ＣＲＰ所抑制（ ＯＸ—Ｉ ＤＩ
０．０１）。
条件下孵育过夜。凝胶在染色液（０．５％考马斯亮兰
Ｒ一２５０，１０％醋酸，２０％甲醇）中缓慢震荡染色３～
４ｈ，并在脱色液（１０％乙酸，３０％甲醇；１０％乙酸，
２０％甲醇；５％乙酸，１０％甲醇）中震荡脱色１－２ｈ。
ＭＭＰｓ是位于蓝色背景上的透亮带。凝胶经凝
胶成像系统和Ｌａｂｗｏｒｋ ４．５分析软件进行处理，条
匕较，Ｐ＜
２．３ ＣＲＰ对激活的巨噬细胞分泌ＭＭＩ 一１的影响
如图１和表１所示，基础条件’ …－ｒＩｌ｛Ｐ一１巨噬
细胞合成分子量为５２ＫＤａ的ＭＭＰ一１，ＣＲＰ同样以
剂量依赖性方式抑制此类臣噬细胞分泌ＭＭＰ一１，
ＯＸ—ＬＤＬ增加ＭＭＰ一１的分泌（Ｐ＜０．０１），但这种作
用被同时存在的ＣＲＰ所抑制（与ＯＸ—ＬＩ）Ｉ 组比较，Ｐ
＜０．０１）。
带酶解量＝（条带平均灰度一底色平均灰度）×条带
面积。各组数值以与空白对照组的条带酶解量之比
表示。
１．３统计学方法
所有资料均采用ＳＰＳＳ １０．０软件进行分析。计
表１ ＣＲＰ对ｎ ．１巨噬细胞分泌ＭＭＰｓ的影响
注：各组数值以与空白对照组的条带酶解量之比表示。与空白对照组比较， Ｐ＜０．０５；与空白对照组比较， Ｐ＜０．０１；与
ＯＸ—ＬＤＬ５０￣ｇ／ｍｌ组比较， Ｐ＜０．０１
・
３２５・
维普资讯
维普资讯
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｏｃｔｏｂｅｒ ２００６，Ｖｏｌ １ １．Ｎｏ ５
１１４１—１１４６．
ＭＣ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ
［８］
Ｙａｍａｄａ Ｋ，Ｉｙｅｒ ＳＮ，Ｃｈａｐｐｅｌｌ
［２］
Ｆｅｔｅｒｉｋ Ｋ，Ｓｍｉｔｈ Ｌ，Ｋａｔｕｓｉｃ ＺＳ．Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ－（１－７）
ｃａｕｓｅｓ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｒｅｌａｘａｔｉｏｎ ｉｎ ｃａｎｉｎｅ ｍｉｄｄｌｅ
ｅｎｚｙｍｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｓ ｐｌａｓｍａ ｃｌａｒａｎｃｅｅ ｏｆ ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ一（１－７）
［Ｊ］．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，１９９８，３２：４９６—５０２．
［９］
Ｈｅｉｔｓｃｈ Ｈ，Ｂｒｏｖｋｏｖｙｃｈ Ｓ，Ｍａｌｉｎｓｋｉ Ｔ，ｅｔ ａ１．Ａｎ—
ｃｅｒｅｂｒａｌ ａｒｔｅｒｙ［Ｊ］．Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ，２０００，８７３：７５—８２．
ｏ ＣＭ，Ｍｏｒｒｉｓ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ａｎｔｉｈｙｐｅｒ—
［３］
Ｂｅｎｔｅｒ ＩＦ，Ｆｅｒｒａｒｉ
ｇｉｏｔｅｎｓｉｎ－（１－７）一ｓｔｉｍｕｌａｔｄ ｎｉｅｔｉｒｃ ｏｘｉｄｅ ａｎｄ ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ
ｔｅｎｓｉｖｅ ａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ－（１ ７）ｉｎ ｓｐｏｎｔｎｅｏｕｓｌａｙ
ｒｅｌａｓｅｅ ｆｒｏｍ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，２００１，
３７：７２—７６．
ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅ ｒａｔｓ［Ｊ］．Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ，１９９５，２６９：Ｈ３１３一
Ｈ３１９．
ｋ ＴＪ，Ｗｅｓｔ ＮＥＪ，Ｐｉｌｌａｉ Ｒ，ｅｔ ａ１．Ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ ｍｏ－
［１０］
Ｇｕｚｉ
ｄｕｌａｔｅｓ ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ｒｅｌｅａｓｅ ａｎｄ ｐｅｒｏｘｙｎｉｔｒｉｔｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｉｎ
［４］
Ｉｙｅｒ ＳＮ，Ｃｈａｐｐｅｌｌ ＭＣ，Ａｖｅｒｉｌｌ ＤＢ，ｅｔ ａ１．Ｖａｓｏｄｅｐｒｅｓ—
ｓｏｒ ａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ一（１－７）ｕｎｍａｓｋｅｄ ｄｕｒｉｎｇ ｅｏｍ— ｈｕｍａｎ ｂｌｏｏｄ ｖｅｓｓｅｌｓ［Ｊ］．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，２００２，３９：
１０８８—１０９４．
ｂｉｎｅｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｗｉｔｈ ｌｉｓｉｎｏｐｒｉｌ ａｎｄ ｌｏｓａｒｔａｎ［Ｊ］．Ｈｙｐｅｒ—
ｔｅｎｓｉｏｎ，１９９８，３１：６９９—７０５．
［１１］
Ｂｒａｎｄｅｓ ＰＲ．ＫｒｅＬｌｇｅｒ Ｊ．Ｖａｓｃｕｌａｒ ＮＡＤＰＨ ｏｘｉｄａｓｅ：
ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌｒ ａ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００５，６５：１６—２７．
［５］
Ｈａｕｌｉｃａ Ｉ，Ｂｉｌｄ Ｗ，Ｍｉｈａｉｌａ ＣＮ，ｅｔ ａ１．Ｂｉｐｈａｓｉｃ ｅｆｆｅｃｔｓ
ｏｆ ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ一（１－７）ａｎｄ ｉｔｓ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｗｉｔｈ ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ
Ⅱｉｎ ｒａｔ ａｏｒｔａ［Ｊ］．Ｊ Ｒｅｎｉｎ Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ Ａｌｄｏｓｔｅｒｏｎｅ
Ｓｙｓｔ，２００３，４：１２４—１２８．
［１２］
Ｍｕｔｈａｌｉｆ ＭＭ，Ｂｅｎｔｅｒ ＩＦ，Ｕｄｄｉｎ ＭＲ，ｅｔ ａ１．Ｓｉｇｎａｌ
ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ一（１－７）一
ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ ａｃｉｄ ｒｅｌｅａｓｅ ａｎｄ ｐｒｏｓｔｎｏｉａｄ ｓｙｎ—
ｌａｃｅ ＥａＨ．Ｔｈｅ ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ ｒｅｎ—
［６］
Ｍｏｒｔｏｎ ＪＪ．Ｗａｌ
ｎｉｎ－－ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｍａｉｎｔｅ－－
Ｄａｎｃｅ ｏｆ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｔｗｏ－ｋｉｄｎｅｙ ｏｎｅ－ｃｌｉｐ ｈｙｐｅｒ—
ｔｈｅｓｉｓ ｉｎ ｒａｂｂｉｔ ａｏｒｔｉｃ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｊ Ｐｈａｒｍａ—
ｃｏｌ Ｅｘｐ Ｔｈｅｒ，１９９８，２８４：３８８—３９８．
ｔｅｎｓｉｖｅ ｒａｔ［Ｊ］．Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９８３，６４：３５９ ３７０．
ｏｓ ＲＡＳ，Ｓｉｍｏｅ８ ｅ Ｓｉｌｖａ ＡＣ，Ｍａｒｉｅ Ｃ，ｅｔ ａ１．Ａｎ—
［７］
Ｓａｎｔ
［１３］
Ｌｉｎｚ Ｗ，Ｗｉｅｍｅｒ Ｇ。Ｇｏｈｌｋｅ Ｐ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ
ｋｉｎｉｎｓ ｔｏ ｔｈｅ ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌｒ ａｃｔｉａｏｎｓ ｏｆ ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ．．ｏｎ．ｃ．
ｇｉｏｔｅｎｓｉｎ－（１－７）ｉｓ ａｎ ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ ｌｉｇａｎｄ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｇ ｐｒｏ—
ｖｅｔｔｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ［Ｊ］．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｒｅｖ，１９９５，
４７：２５—４９．
ｔｅｉｎ－ｏｕｐｌｃｄ ｅｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｍａｓ［Ｊ］．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，
２００３，１００：８２５８—８２６３．
（收稿日期：２００６—０３—１６；修回日期：２００６—０４—２８）
（上接第３２６页）
［６］Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＴＮ，Ｚｈａｎｇ ＣＸ，Ｇａｍｅ ＢＡ，ｅｔ ａ１．Ｃ￣ｒａｃｅｔｉｖｅ
ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ ＭＭＰ—．１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ Ｕ９３７ ｈｉｓｔｉｏ—．
ｉｃ ｐｌａｑｕｅ ｂｕｔ ｅｎｈａｎｃｅｄ ａｎｅｕｒｙｓｍ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｉｎ ｍｉｃｅ ｗｉｔｈ
ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｔｉｓｓｕｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ－１
（ＴＩＭＰ一１）ｇｅｎｅ［Ｊ］．Ｃｉｒｃ Ｒｅｓ，２００２，９０：８９７—９０３．
Ｖ，Ｗｉｌｌｅｒｓｏｎ ＪＴ，Ｙｅｈ ＥＴ．Ｄｉｒｅｃｔ ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａ—
［１１］
Ｐａｓｃｅｒｉ
ｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｃ－ｒｅａｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｎ ｈｕｍａｎ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｌ ａ
ｃｙｔｓ ｅｔｈｒｏｕｇｈ Ｆｃ［ｇａｍｍａ］ＲＩＩ ａｎｄ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｓｉｎａｇｌ—
ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｋｉｎａｓｅ ｐａｔｈｗａｙ：ａｎ ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＣＲＰ ｉｎ—
ｖｏｌｖｅｍｅｎｔ ｉｎ ｐｌａｑｕｅ ｄｅｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ
Ｆｈｒｏｍｂ Ｖａｓｅ Ｂｉｏｌ，２００４，２４：６１—６６．
ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，２０００，１０２：２１６５ ２１６８．
Ｖ，Ｃｈｅｎｇ ＪＳ，Ｗｉｌｌｅｒｓｏｎ ＪＴ，ｅｔ ａ１．Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ
［１２］
Ｐａｓｅｅｒｉ
ｏｆ Ｃ￣ｒｅａｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ—ｍｅｄｉａｔｅｄ ｍｏｎｏｃｙｔｅ ｃｈｅｍｏａｔｔｒａｃ—
ｔａｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ一１ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｌ ｃｅｌａｌｓ ｂｙ
［７］ｕ Ｄ，Ｌｉｕ Ｌ，Ｃｈｅｎ Ｈ，ｅｔ ａ１．ＬＯＸ一１ ｍｅｄｉａｔｓ ｅｏｘｉｄｉｚｅｄ
ｌｏｗ—ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｏｐｒｏｔｅｉｐｎ．．ｉｎｄｕｃｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｍａｔｒｉｘ
ｍｅｔｌｌａｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃｏｒｏｎａｒｙ ａｒｔｅｒｙ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｌ ａ
ａｎｔｉ－ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ ｄｒｕｇｓ［Ｊ］．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，２００１，１０３：
２５３１－２５３４．
ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｃｉｒｃｌａｔｕｉｏｎ，２００３，１０７：６１２—６１７．
［８］Ｕｚｕｉ Ｈ，Ｈａｒｐｆ Ａ，Ｌｉｕ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｃｒｅａｓｄ ｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ
ｍｅｍｂｒａｎｅ ｔｙｐｅ ３－ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ ｉｎ ｈｕｍａｎ
ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃ ｐｌａｑｕｅ：ｒｏｌｅ ｏｆ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ ａｎｄ
ｌａｉ ＡＩ，Ｎａｔａｌ Ｓ，Ｈｕ ＸＺ，ｅｔ ａ１．Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｌｌｅｒｇｉｃ
［１３］
Ｓｚａ
ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ ｉｓ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｉｎ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｉｃｅ ｅｘｐｒｅｓｓ—
ｉｎｇ ｈｕｍａｎ Ｃ－ｒｅａｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ［Ｊ］．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００２，
１６８：５７９２—５７９７．
ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ［Ｊ］．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，２００２，１０６：
３０２４—３０３０．
［１４］
Ｍｏｌｄ Ｃ，Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ Ｗ，Ｒｏｄｉｃ—Ｐｏｌｉｃ Ｂ，ｅｔ ａ１．Ｃ－ｒｅａｃｔｉｖｅ
ｐｒｏｔｅｉｎ ｍｅｄｉａｔｅｓ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｌｉｏｐｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ
［９］ＬｅｍａｉｔｒｅＶ，Ｏ’Ｂｙｒｎｅ ＴＫ，Ｂｏｒｃｚｕｋ ＡＣ，ｅｔ ａｔ．ＡＰＯＥ
ｋｎｏｃｋｏｕｔ ｍｉｃｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｇ ｈｕｍａｎｎ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏ—
ｔｅｉｎａｓｅ－１ ｉｎ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ ｈａｖｅ ｌｅｓｓ ａｄｖａｎｃｅｄ ａｔｈｅｒｏｓｄｅ—
ｔｒｏｕｇｈ ｈｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｗｉｔｈ Ｆｃ Ｒ［Ｊ］．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００２，
１６９：７０１９—７０２５．
ｏｓｒｉｓ￣Ｊ］ Ｊ ａｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ，２００１，１０７：１２２７—１２３４
［１０］Ｓｉｌｅｎｃｅ Ｊ，Ｃｏｌｌｅｎ Ｄ，Ｌ￣ｎｅｎ ＨＲ．Ｒｅｄｕｃｄ ｅａｔｈｅｍｓｃｌｅｒｏｔ一
（收稿日期：２００５—０９—２９；修回日期：２００６一Ｏ１—１７）
・
３３０・
2024年5月16日发(作者：买智)
维普资讯
１１．Ｎｏ ５
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆＣａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒＭｅｄｉｃ
ｉｎ
ｅ，Ｏｃｔｏｂｅｒ ２００６，Ｖ
ｏｌ
—
Ｃ．反应蛋白抑制活化的巨噬细胞分泌
基质金属蛋白酶
车京津，黄体钢，周丽娟
摘要：目的研究Ｇ反应蛋白（ＣＲＰ）对巨噬细胞分泌基质金属蛋白酶（Ｍ＾ ｓ）的影响。方法以不同浓度的ＣＲＰ
和／或５０￣ｇ／ｍｌ氧化的低密度脂蛋白（ＯＸ—ＬＤＬ）处理Ｔ 一１巨噬细胞，应用明胶酶谱法测定细胞培养上清液中
ＭＭＰ－２、ＭＭＰ一９、ＭＭＰ一１的活性。结果ＴＨＰ一１巨噬细胞在基础状态下分泌ＭＭＰ一２、ＭＭＰ一９、ＭＭＰ－１，ＣＲＰ抑制
其分泌，以ＭＭＰ一２为例，ＣＲＰ抑制ＭＭＰ一２的酶原（０．８２±０．０５１，与空白对照组比较Ｐ＜０．０１）和其活性形式（０．６１
±０．０３０，与空白对照组比较Ｐ＜０．０１）。ＯＸ—Ｌ【）Ｌ诱导ＭＭＰｓ的分泌，但这种作用被同时存在的ＣＲＰ所抑制（０．５６
±０．０９８，与０ｘ—ＬＤＬ组比较Ｐ＜０．０１）。结论
诱导作用。
ＣＲＰ抑制活化的巨噬细胞分泌ＭＭＰｓ，并抑制ｏｘ—ＬＤＬ对ＭＭＰｓ的
关键词： Ｇ反应蛋白； 氧化的低密度脂蛋白； 巨噬细胞； 基质金属蛋白酶
中国分类号：３２０．２４１０ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００７—５４１０（２００６）０５—０３２４—０４
ＣｌＩＰ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｔｈｅ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｏｆ ＭＭＰＳ ｂｙ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ ＣＨＥ ｉｎｇ－ｒｉｆｎ。ＨＵＡＮＧ —ｇａｎｇ。 ｛（）Ｕ Ｌｉ－ｊｕａｎ．
Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＣａｒｄｉｏｌｏｇｙ，Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｓｅｃｏｎｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，１ ｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔ ｉｎ ３００２１１，Ｃｈｉｎａ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：０ｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｃｌｒｉａｆｙ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ（、ＲＰ ｏｎ ｔｈｅ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｏｆ Ｍ ， ｓ（ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ）ｂｙ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ．
Ｍｅｔｈｏｄｓ ＴＨＰ一１ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ ｗｅｒｅ ｔｒｅａｔｅｄ ｂｙ ＣＲＰ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ａｎｄ／ｏｒ ＯＸ—ＬＤＬ（ｏｘｉｄｉｚｅｄ ｌｏｗ－ｄｅｎｓｉｔｙ
ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｊ ｏｆ ５０￣ｇ／ｍｌ。＾ 一２，＾ 一９ ａｎｄ＾ 一１ ｉｎ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｄｉｕｍ ｗｅｒｅ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｂｙ ｇｅｌａｔｉｎ ＳＤＳ－ＰＡＧＥ ｚｙｍｏｇ—
ｒａｐｈｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ＭＭＰ一２。ＭＭＰ＿９，ＭＭＰ一１ ｗｅｒｅ ｓｅｃｒｅｔｅｄ ｂｙ ＴＨＰ一１ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ ｉｎ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ，ａｎｄ ｗｅｒｅ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｂｙ
ＣＲＰ．Ｆｏｒ ｅｘａｍｐｌｅ。Ｐｒｏ－Ｍ＾ 一２（０．８２±０．０５１ ＶＳ ｏｎｔｃｒｏｌ ｒｏｕｐ，Ｐ＜０．０１）ａｇｎｄ＾ 一２（０．６１±０．０３０ ＶＳ ｏｎｔｃｒｏｌ
一１ ｂｙ
ｇｒｏｕｐ。Ｐ＜０．０１ Ｊ ｗｅｒｅ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃｎｔａｌｙ ｂｙ ＣＲＰ．Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅ ＣＲＰ ｉｎｈｉｂｉｔｄ ｔｅｈｅ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ＭＭＰｓ ｂｙ ＯＸ—Ｕ）Ｌ
（０．５６±０．０９８ ＶＳ ＯＸ—Ｕ）Ｌ ｇｒｏｕｐ，Ｐ＜０．０１）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ＣＲＰ ｉｎｈｉｂｉｔｄ ｅｔｈｅ ｅｃｒｓｅｔｉｏｎ ｏｆ ＭＭＰ一２，＾，Ｉ＾ 一９，＾
ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ．ａｎｄ ａｌｓｏ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｔｈｅ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ＭＭＰｓ ｂｙ ＯＸ—ＬＤ Ｌ＿
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｃ－ｒｅａｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ； Ｏｘｉｄｅｄ ｌｏｗ－ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ； Ｍａｃｍｐｈａｇｅ； Ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｍｔｅｉｎａｓｅｓ
通常认为动脉血栓形成是急性心脑血管事件的
主要病理基础，而大多数的动脉血栓发生在以大脂
核、薄纤维帽为特征的易损斑块发生破裂的部
位Ｌ１ Ｊ。斑块破裂的具体机制尚未完全阐明，但较为
明确的是在这一过程中存在着细胞外基质降解过
多。研究显示基质金属蛋白酶（ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏ—
ｔｅｉｎａｓｅ，ｃ、 ，ＩＰｓ）可能是斑块不稳定和发生破裂的“罪
犯”Ｌ２ Ｊ。Ｇ反应蛋白（Ｃ－ｒｅａｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ，ＣＲＰ）因可
巨噬细胞为材料，以氧化的低密度脂蛋白（ｏｘｉｄｉｚｅｄ
ｌｏｗ—ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ，ＯＸ—ｕ）Ｌ）对ＭＭＰｓ的影响作
为阳性对照，研究ＣＲＰ对活化的巨噬细胞分泌
ＭＭＰ－２、ＭＭＰ一９和ＭＭＰ一１的作用。
１材料与方法
１．１主要试剂、仪器及其来源
ｏｘ－ＬＤＬ购自中国协和医科大学脂蛋白研究室，
以ｌＯｔＬｍｏｌ／Ｌ的ＣｕＳ０４氧化１８ｈ，Ｌｏｗｒｙ法测定蛋
与肺炎球菌细胞壁上的Ｃ多糖结合而得名，长期以
来被认为是急性期蛋白的一种，是炎症标志物。近
来的研究显示，ＣＲＰ与动脉粥样硬化，特别是动脉
粥样硬化的进展具有密切的联系Ｌ４．５ Ｊ。目前对于
ＣＲＰ是否影响与动脉粥样硬化相关的细胞成分分
泌ＭＭＰｓ的研究尚少ｌ６ Ｊ。本实验以ｎ 一１衍生的
白含量，测定脂质过氧化产物丙二醛反映低密度脂
蛋白（１ｏｗ—ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ，ＬＤＬ）的氧化程度，用
硫代巴比妥酸反应物（ＴＢＡＲＳ）值表示，范围在３５～
５０ｎｍｏｌ／ｍｇｐｒｏ；乙酸肉豆蔻佛波醇（ＰＭＡ）：Ｇｉｂｉｃｏ
公司；人重组ＣＲＰ：Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ公司；丙烯酰胺：Ｓｉｇ—
ｍａ公司；Ｎ，Ｎ一亚甲双丙烯酰胺：Ｐｒｏｍｅｇａ公司；Ｂｒｉｊ一
３５，甘氨酸：Ｒｏｃｈｅ公司；ＴＥＭＥＤ：Ｓｉｇｍａ公司；明胶：
作者单位：天津医科大学第二医院心脏科，天津３００２１１
作者简介：车京津（１９７１一），女，天津市人，２００４年毕业于天津医科大
学，博士，主治医师，现从事心血管临床工作。
天象人生物试剂公司。
１．２方法
１．２．１ 细胞培养及处理
・
ＴＨＰ一１细胞经含终浓度
３２４・
维普资讯
中国心血管杂志２００６年１０月第１１卷第５期
为２００ｎｍｏｌ／ｇ ＰＭＡ的ＲＰＭＩ一１６４０处理１２ｈ后将培
养液换为含０．１％ＢＳＡ的ＲＰＭＩ一１６４０培养液（含双
量资料以均数±标准差（ ±Ｓ）表示，多组问比较采
用单因素方差分析，实验组与对照组比较采用Ｄｕｎ～
抗），１２ｈ后更换新的上述培养液并给予１／ｚｇ／ｍｌ、
１０／ｚｇ／ｍｌ ＣＲＰ和俄５０／，ｇ／ｍｌ ＯＸ—ＬＤＬ处理２４ｈ，留
取细胞培养上清液待测。
ｎｅｔｔ ｔ检验，实验组之间比较采』１ｊ ｑ检验，以Ｐ＜
０．０５为统计学上有显著性差片。
２结果
１．２．２明胶酶谱法测定ＭＭＰｓ活性首先将被检
细胞培养液１：１稀释，取９０／ｚｌ稀释液加入３Ｉ） ｌ加样
２．１ ＣＲＰ对激活的巨噬细胞分泌ＭＭｔ ～２的影响
如图１和表１所示，通过明胶酶｛｝牛法分忻 示，
基础条件下由ＴＨＰ一１巨噬细胞合成分 ：艟为
７２ＫＤａ的酶原形式的ＭＭＰ一２，许有少最 肜式
缓冲液（４％ＳＤＳ，０．２５Ｍ Ｔｒｉｓ—ＨＣ１，４０％甘油，０．１％
溴酚蓝）混匀，取３０／ｚｌ上样。在４℃条件下进行
ＳＤＳ－ＰＡＧＥ不连续电泳，电泳开始时，电压为８ｖ／
ｃｍ，溴酚蓝进入分离胶后电压增至１５ｖ／ｃｍ，持续电
泳直到溴酚蓝跑到胶外。而后在室温下将凝胶置于
洗脱液（２．５％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ一１００，５０ｍｍｏｌ／Ｌ Ｔｒｉｓ—ＨＣＬ，
５ｍｍｏｌ／ｇ Ｃａｃｌ２．Ｈ２Ｏ，１／ｚｍｏｌ／ｇ Ｚｎｃｌ２，ｐＨ７．６）中缓慢
的ＭＭＰ一２。ＣＲＰ以剂量依赖 ，』‘式抑制 此炎
噬细胞分泌ＭＭＰ一２，其中包括嗍 及其 形式。
５０／，ｇ／ｍｌ的ＯＸ—ＬＤＬ增加ＭＭＰ－２的分泌（ｆ，＜
０．０５），但这种作用被同时存在的（＂ＲＩ， 抑
ＯＸ．ＬＤＬ组比较，Ｐ＜０．０１）。
震荡４５ｍｉｎ×２，以去除凝胶中的ＳＤＳ；再置于漂洗
液（５０ｍｍｏｌ／Ｌ Ｔｒｉｓ—ＨＣＬ，５ｍｍｏｌ／ｇ Ｃａｃｌ２．Ｈ２Ｏ，ｌｔｘｍｏｌ／
Ｌ Ｚｎｃｌ２，ｐＨ７．６）中漂洗２次，每次２０ｍｉｎ；最后置于孵
育液（５０ｍａｍｌ／ｇ Ｔｒｉｓ—ＣＬ ｐＨ ７．６，５ｒｅｔｏｏｌ／ｑ＿ ＣａＣｌ２，
ｌｔｍａｏｌ／ｇＺｎｃｌ２，０．０２％Ｂ 一３５，０．０２％叠氮钠）中３７℃
２．２ ＣＲＰ对激活的巨噬细胞分泌ＭＭ！ 一９的影响
如图１和表１所示，基础条件下… Ｉ＇ＨＰ一１臣噬
细胞合成分子量为９２ＫＤａ的ＭＭＰ一９，ＣＲＰ以剂镶
依赖性方式抑制此类巨噬细胞分泌ＭＭＰ一９，ＯＸ—
ＬＤＬ增加ＭＭＰ一９的分泌（Ｐ＜０．０５），ｆ『Ｉ这种作用
被同时存在的ＣＲＰ所抑制（ ＯＸ—Ｉ ＤＩ
０．０１）。
条件下孵育过夜。凝胶在染色液（０．５％考马斯亮兰
Ｒ一２５０，１０％醋酸，２０％甲醇）中缓慢震荡染色３～
４ｈ，并在脱色液（１０％乙酸，３０％甲醇；１０％乙酸，
２０％甲醇；５％乙酸，１０％甲醇）中震荡脱色１－２ｈ。
ＭＭＰｓ是位于蓝色背景上的透亮带。凝胶经凝
胶成像系统和Ｌａｂｗｏｒｋ ４．５分析软件进行处理，条
匕较，Ｐ＜
２．３ ＣＲＰ对激活的巨噬细胞分泌ＭＭＩ 一１的影响
如图１和表１所示，基础条件’ …－ｒＩｌ｛Ｐ一１巨噬
细胞合成分子量为５２ＫＤａ的ＭＭＰ一１，ＣＲＰ同样以
剂量依赖性方式抑制此类臣噬细胞分泌ＭＭＰ一１，
ＯＸ—ＬＤＬ增加ＭＭＰ一１的分泌（Ｐ＜０．０１），但这种作
用被同时存在的ＣＲＰ所抑制（与ＯＸ—ＬＩ）Ｉ 组比较，Ｐ
＜０．０１）。
带酶解量＝（条带平均灰度一底色平均灰度）×条带
面积。各组数值以与空白对照组的条带酶解量之比
表示。
１．３统计学方法
所有资料均采用ＳＰＳＳ １０．０软件进行分析。计
表１ ＣＲＰ对ｎ ．１巨噬细胞分泌ＭＭＰｓ的影响
注：各组数值以与空白对照组的条带酶解量之比表示。与空白对照组比较， Ｐ＜０．０５；与空白对照组比较， Ｐ＜０．０１；与
ＯＸ—ＬＤＬ５０￣ｇ／ｍｌ组比较， Ｐ＜０．０１
・
３２５・
维普资讯
维普资讯
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｏｃｔｏｂｅｒ ２００６，Ｖｏｌ １ １．Ｎｏ ５
１１４１—１１４６．
ＭＣ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ
［８］
Ｙａｍａｄａ Ｋ，Ｉｙｅｒ ＳＮ，Ｃｈａｐｐｅｌｌ
［２］
Ｆｅｔｅｒｉｋ Ｋ，Ｓｍｉｔｈ Ｌ，Ｋａｔｕｓｉｃ ＺＳ．Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ－（１－７）
ｃａｕｓｅｓ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｒｅｌａｘａｔｉｏｎ ｉｎ ｃａｎｉｎｅ ｍｉｄｄｌｅ
ｅｎｚｙｍｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｓ ｐｌａｓｍａ ｃｌａｒａｎｃｅｅ ｏｆ ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ一（１－７）
［Ｊ］．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，１９９８，３２：４９６—５０２．
［９］
Ｈｅｉｔｓｃｈ Ｈ，Ｂｒｏｖｋｏｖｙｃｈ Ｓ，Ｍａｌｉｎｓｋｉ Ｔ，ｅｔ ａ１．Ａｎ—
ｃｅｒｅｂｒａｌ ａｒｔｅｒｙ［Ｊ］．Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ，２０００，８７３：７５—８２．
ｏ ＣＭ，Ｍｏｒｒｉｓ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ａｎｔｉｈｙｐｅｒ—
［３］
Ｂｅｎｔｅｒ ＩＦ，Ｆｅｒｒａｒｉ
ｇｉｏｔｅｎｓｉｎ－（１－７）一ｓｔｉｍｕｌａｔｄ ｎｉｅｔｉｒｃ ｏｘｉｄｅ ａｎｄ ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ
ｔｅｎｓｉｖｅ ａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ－（１ ７）ｉｎ ｓｐｏｎｔｎｅｏｕｓｌａｙ
ｒｅｌａｓｅｅ ｆｒｏｍ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，２００１，
３７：７２—７６．
ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅ ｒａｔｓ［Ｊ］．Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ，１９９５，２６９：Ｈ３１３一
Ｈ３１９．
ｋ ＴＪ，Ｗｅｓｔ ＮＥＪ，Ｐｉｌｌａｉ Ｒ，ｅｔ ａ１．Ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ ｍｏ－
［１０］
Ｇｕｚｉ
ｄｕｌａｔｅｓ ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ｒｅｌｅａｓｅ ａｎｄ ｐｅｒｏｘｙｎｉｔｒｉｔｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｉｎ
［４］
Ｉｙｅｒ ＳＮ，Ｃｈａｐｐｅｌｌ ＭＣ，Ａｖｅｒｉｌｌ ＤＢ，ｅｔ ａ１．Ｖａｓｏｄｅｐｒｅｓ—
ｓｏｒ ａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ一（１－７）ｕｎｍａｓｋｅｄ ｄｕｒｉｎｇ ｅｏｍ— ｈｕｍａｎ ｂｌｏｏｄ ｖｅｓｓｅｌｓ［Ｊ］．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，２００２，３９：
１０８８—１０９４．
ｂｉｎｅｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｗｉｔｈ ｌｉｓｉｎｏｐｒｉｌ ａｎｄ ｌｏｓａｒｔａｎ［Ｊ］．Ｈｙｐｅｒ—
ｔｅｎｓｉｏｎ，１９９８，３１：６９９—７０５．
［１１］
Ｂｒａｎｄｅｓ ＰＲ．ＫｒｅＬｌｇｅｒ Ｊ．Ｖａｓｃｕｌａｒ ＮＡＤＰＨ ｏｘｉｄａｓｅ：
ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌｒ ａ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００５，６５：１６—２７．
［５］
Ｈａｕｌｉｃａ Ｉ，Ｂｉｌｄ Ｗ，Ｍｉｈａｉｌａ ＣＮ，ｅｔ ａ１．Ｂｉｐｈａｓｉｃ ｅｆｆｅｃｔｓ
ｏｆ ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ一（１－７）ａｎｄ ｉｔｓ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｗｉｔｈ ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ
Ⅱｉｎ ｒａｔ ａｏｒｔａ［Ｊ］．Ｊ Ｒｅｎｉｎ Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ Ａｌｄｏｓｔｅｒｏｎｅ
Ｓｙｓｔ，２００３，４：１２４—１２８．
［１２］
Ｍｕｔｈａｌｉｆ ＭＭ，Ｂｅｎｔｅｒ ＩＦ，Ｕｄｄｉｎ ＭＲ，ｅｔ ａ１．Ｓｉｇｎａｌ
ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ一（１－７）一
ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ ａｃｉｄ ｒｅｌｅａｓｅ ａｎｄ ｐｒｏｓｔｎｏｉａｄ ｓｙｎ—
ｌａｃｅ ＥａＨ．Ｔｈｅ ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ ｒｅｎ—
［６］
Ｍｏｒｔｏｎ ＪＪ．Ｗａｌ
ｎｉｎ－－ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｍａｉｎｔｅ－－
Ｄａｎｃｅ ｏｆ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｔｗｏ－ｋｉｄｎｅｙ ｏｎｅ－ｃｌｉｐ ｈｙｐｅｒ—
ｔｈｅｓｉｓ ｉｎ ｒａｂｂｉｔ ａｏｒｔｉｃ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｊ Ｐｈａｒｍａ—
ｃｏｌ Ｅｘｐ Ｔｈｅｒ，１９９８，２８４：３８８—３９８．
ｔｅｎｓｉｖｅ ｒａｔ［Ｊ］．Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９８３，６４：３５９ ３７０．
ｏｓ ＲＡＳ，Ｓｉｍｏｅ８ ｅ Ｓｉｌｖａ ＡＣ，Ｍａｒｉｅ Ｃ，ｅｔ ａ１．Ａｎ—
［７］
Ｓａｎｔ
［１３］
Ｌｉｎｚ Ｗ，Ｗｉｅｍｅｒ Ｇ。Ｇｏｈｌｋｅ Ｐ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ
ｋｉｎｉｎｓ ｔｏ ｔｈｅ ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌｒ ａｃｔｉａｏｎｓ ｏｆ ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ．．ｏｎ．ｃ．
ｇｉｏｔｅｎｓｉｎ－（１－７）ｉｓ ａｎ ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ ｌｉｇａｎｄ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｇ ｐｒｏ—
ｖｅｔｔｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ［Ｊ］．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｒｅｖ，１９９５，
４７：２５—４９．
ｔｅｉｎ－ｏｕｐｌｃｄ ｅｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｍａｓ［Ｊ］．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，
２００３，１００：８２５８—８２６３．
（收稿日期：２００６—０３—１６；修回日期：２００６—０４—２８）
（上接第３２６页）
［６］Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＴＮ，Ｚｈａｎｇ ＣＸ，Ｇａｍｅ ＢＡ，ｅｔ ａ１．Ｃ￣ｒａｃｅｔｉｖｅ
ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ ＭＭＰ—．１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ Ｕ９３７ ｈｉｓｔｉｏ—．
ｉｃ ｐｌａｑｕｅ ｂｕｔ ｅｎｈａｎｃｅｄ ａｎｅｕｒｙｓｍ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｉｎ ｍｉｃｅ ｗｉｔｈ
ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｔｉｓｓｕｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ－１
（ＴＩＭＰ一１）ｇｅｎｅ［Ｊ］．Ｃｉｒｃ Ｒｅｓ，２００２，９０：８９７—９０３．
Ｖ，Ｗｉｌｌｅｒｓｏｎ ＪＴ，Ｙｅｈ ＥＴ．Ｄｉｒｅｃｔ ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａ—
［１１］
Ｐａｓｃｅｒｉ
ｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｃ－ｒｅａｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｎ ｈｕｍａｎ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｌ ａ
ｃｙｔｓ ｅｔｈｒｏｕｇｈ Ｆｃ［ｇａｍｍａ］ＲＩＩ ａｎｄ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｓｉｎａｇｌ—
ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｋｉｎａｓｅ ｐａｔｈｗａｙ：ａｎ ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＣＲＰ ｉｎ—
ｖｏｌｖｅｍｅｎｔ ｉｎ ｐｌａｑｕｅ ｄｅｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ
Ｆｈｒｏｍｂ Ｖａｓｅ Ｂｉｏｌ，２００４，２４：６１—６６．
ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，２０００，１０２：２１６５ ２１６８．
Ｖ，Ｃｈｅｎｇ ＪＳ，Ｗｉｌｌｅｒｓｏｎ ＪＴ，ｅｔ ａ１．Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ
［１２］
Ｐａｓｅｅｒｉ
ｏｆ Ｃ￣ｒｅａｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ—ｍｅｄｉａｔｅｄ ｍｏｎｏｃｙｔｅ ｃｈｅｍｏａｔｔｒａｃ—
ｔａｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ一１ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｌ ｃｅｌａｌｓ ｂｙ
［７］ｕ Ｄ，Ｌｉｕ Ｌ，Ｃｈｅｎ Ｈ，ｅｔ ａ１．ＬＯＸ一１ ｍｅｄｉａｔｓ ｅｏｘｉｄｉｚｅｄ
ｌｏｗ—ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｏｐｒｏｔｅｉｐｎ．．ｉｎｄｕｃｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｍａｔｒｉｘ
ｍｅｔｌｌａｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃｏｒｏｎａｒｙ ａｒｔｅｒｙ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｌ ａ
ａｎｔｉ－ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ ｄｒｕｇｓ［Ｊ］．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，２００１，１０３：
２５３１－２５３４．
ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｃｉｒｃｌａｔｕｉｏｎ，２００３，１０７：６１２—６１７．
［８］Ｕｚｕｉ Ｈ，Ｈａｒｐｆ Ａ，Ｌｉｕ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｃｒｅａｓｄ ｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ
ｍｅｍｂｒａｎｅ ｔｙｐｅ ３－ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ ｉｎ ｈｕｍａｎ
ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃ ｐｌａｑｕｅ：ｒｏｌｅ ｏｆ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ ａｎｄ
ｌａｉ ＡＩ，Ｎａｔａｌ Ｓ，Ｈｕ ＸＺ，ｅｔ ａ１．Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｌｌｅｒｇｉｃ
［１３］
Ｓｚａ
ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ ｉｓ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｉｎ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｉｃｅ ｅｘｐｒｅｓｓ—
ｉｎｇ ｈｕｍａｎ Ｃ－ｒｅａｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ［Ｊ］．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００２，
１６８：５７９２—５７９７．
ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ［Ｊ］．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，２００２，１０６：
３０２４—３０３０．
［１４］
Ｍｏｌｄ Ｃ，Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ Ｗ，Ｒｏｄｉｃ—Ｐｏｌｉｃ Ｂ，ｅｔ ａ１．Ｃ－ｒｅａｃｔｉｖｅ
ｐｒｏｔｅｉｎ ｍｅｄｉａｔｅｓ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｌｉｏｐｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ
［９］ＬｅｍａｉｔｒｅＶ，Ｏ’Ｂｙｒｎｅ ＴＫ，Ｂｏｒｃｚｕｋ ＡＣ，ｅｔ ａｔ．ＡＰＯＥ
ｋｎｏｃｋｏｕｔ ｍｉｃｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｇ ｈｕｍａｎｎ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏ—
ｔｅｉｎａｓｅ－１ ｉｎ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ ｈａｖｅ ｌｅｓｓ ａｄｖａｎｃｅｄ ａｔｈｅｒｏｓｄｅ—
ｔｒｏｕｇｈ ｈｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｗｉｔｈ Ｆｃ Ｒ［Ｊ］．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００２，
１６９：７０１９—７０２５．
ｏｓｒｉｓ￣Ｊ］ Ｊ ａｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ，２００１，１０７：１２２７—１２３４
［１０］Ｓｉｌｅｎｃｅ Ｊ，Ｃｏｌｌｅｎ Ｄ，Ｌ￣ｎｅｎ ＨＲ．Ｒｅｄｕｃｄ ｅａｔｈｅｍｓｃｌｅｒｏｔ一
（收稿日期：２００５—０９—２９；修回日期：２００６一Ｏ１—１７）
・
３３０・