2024年5月22日发(作者：刁霜)

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广曲Ｉ夏学　２００８年２月第３０卷第２期　

ｌ６３　

ＤＣ联合ＳＥＡ激活ＴＩＬ体外杀伤小鼠肝癌细胞活性研究▲　

庞志东　李文锋　刘剑勇　周　任　

（１广西医科大学第六附属医院、广西玉林市第二人民医院肝胆外科，玉林市５３７５００；２广西医科大学附属肿瘤医院，南宁市５３００２１）　

【摘要】　目的探讨Ｈ２２细胞全细胞性抗原致敏的ＤＣ联合ＳＥＡ激活的，ｌ１Ｌ体外抗小鼠肝癌活性作用。方法从荷瘤小　

鼠四肢长骨骨髓中获取ＤＣ，应用　巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ—ＣＳＦ）、白介素４（ＩＬ４）和Ｈ２２细胞全细胞性抗原致敏ＤＣ，然后　

用已致敏的ＤＣ联合ＳＥＡ激活从荷瘤小鼠中提取的，ｌ１Ｌ和脾淋巴细胞，观察受激活后的，ｌ１Ｌ和脾淋巴细胞作为效应细胞在体外　

对Ｈ２２细胞的杀伤活性，并与对照组进行比较。结果，ｌ１Ｌ对Ｈ２２细胞的杀伤活性［杀伤率为（５０，６３±２．５２）％］高于脾淋巴细　

胞对Ｈ２２细胞的杀伤活性［杀伤率为（１２．２６±１．２８）％］，用不同方式激活的，ｌ１Ｌ对Ｈ２２细胞的杀伤活性均高于各自对应方式激　

活的脾淋巴细胞对Ｈ２２细胞的杀伤活性；ＳＥＡ激活的，ｌ１Ｌ对Ｈ２２细胞的杀伤活性［杀伤率为（６４．３５±２．８２）％］高于，ｌ１Ｌ对Ｈ２２　

细胞的杀伤活性［杀伤率为（５０．６３±２．５２）％］，已致敏ＤＣ激活的，ｌ１Ｌ对Ｈ２２细胞的杀伤活性更高［杀伤率为（７５．２３±　

３．２１）％］，而已致敏ＤＣ联合ＳＥＡ激活的，ｌ１Ｌ对Ｈ２２细胞的杀伤活性最高［杀伤率为（８６．２９±３．８３）％］。结论用Ｈ２２细胞全　

细胞性抗原致敏的ＤＣ联合ＳＥＡ能显著激活，ｌ１Ｌ产生高效的对Ｈ２２细胞的杀伤活性。　

【关键词】　树突状细胞；葡萄球菌肠毒素Ａ；肿瘤浸润淋巴细胞；Ｈ２２肝癌细胞；杀伤活性　

【中图分类号】　Ｒ　７３５．７　【文献标识码】　Ａ　【文章编号】０２５３－４３０４（２００８）０２－０１６３－０４　

Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ａｎｔｉ－ｍ０ｕｓｅ　ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｏｆ　ＴＩＬ　ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ　ｂｙ　ＤＣ　ａｎｄ　ＳＥＡ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　

ＰＡＮＧ　Ｚｈｉ—ｄｏｎｇ，ＬＩ　Ｗｅｎ－ｆｅｎｇ，ＬＩＵ　Ｊｉａｎ—ｙｏｎｇ，ＺＨＯＵ　Ｒｅｎ　

（１　Ｔｈｅ　Ｓｉｘｔｈ　铷　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，ＧⅡ口　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙｔｄｔｈ　５３７５００，Ｃｈ／ｎａ；２　Ｔｕｍｏｔｅｒ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，ＧⅡ口　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｔｅｒｓ　，Ｎａ，ｍ／ｎｇ　５３００２１，　）　

【Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｋｉｌｌｉｎｇ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ＴＩＬ　ｔｈａｔ　Ｗｉｌｔｓ　ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ　ｂｙ　Ｓ－ＤＣ（ＤＣ　ｈａｄ　ｂｅｅｎ　ｓｅｎｓｉｉｔｚｅｄ　ｂｙ　Ｈ２２　ｃｅｌｌ　

ａｎｔｉｇｅｎ）ａｎｄ　ＳＥＡ　ｏｎ　ｍｏｕｓｅ　ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｌｕａｒ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ，Ｍｅｔｈｏｄｓ　ＤＣ　ｗｅｒｅ　ｉｓｏｌａｔｄｅ　ｆｒｏｍ　ｎｌＯｔｌＳｅ　ｂｏｎｅ　ＩｎａＩＴｏｗ　ａｎｄ　ｓｅｎｓｉｉｔｚｅｄ　ｂｙ　

ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ／ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ　ｃｏｌｏｎｙ　ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒ（ＧＭ—ＣＳＦ），ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－４（ＩＩ　）ａｎｄ　Ｈ２２　ｃｅｌｌ　ａｎｔｉｇｅｎ．Ｔｈｅｎ　ＴＩＬ　ａｎｄ　ｍｏｕｓｅ　ｓｐｌｅｅｎ　

ｌｙｍｐｈｏｅｙｔｅｓ（ｔｈｅ　ｃｅｌｌｓ　ｗｅｒｅ　ｆｒｏｍ　ｎｌＯｔｌＳｅ　ｂｅａｒｉｇｎ　ｔｕｍｏｒ）ｗｅｅｒ　ｓｉｔｍｕｌａｔｄｅ　ｂｙ　Ｓ－ＤＣ　ｎａｄ　ＳＥＡ，ａｎｄ　ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｔｈｅｉｒ　ｋｉｌｌｉｇｎ　ａｃｔｉｖｉｙｔ　ｗｉｈｔ　ｔｈｅ　ｏｃｎｔｒｏｌｓ　

ｏｎ　Ｈ２２　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｋｉｌｌｉｎｇ　ａｃｔｉｉｖｔｙ　ｆｏＴＩＬ　ｏｎ　Ｈ２２　ｅｃｌｌｓ［ｋｉｌｌｉｎｇ　ｒａｔｅ：（５０．６３±２．５２）％］ｗａｓ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｆｏ　ｓｐｌｅｎ　ｌｙｍｐｈｏｅｙｔｅｓ　

ｏｎ　Ｈ２２　ｅｃｌｓ［ｋｉｌｉｎｇ　ｒａｔｅ：（７．２６±Ｉ．２８）％］．Ｔｈｅ　ｋｉｌｌｉｇｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ＴＩＬ　ｓｔｉｍｕｌａｔｄｅ　ｂｙ　ｄｉｆｅｅｒｎｃｅ　ｍａｎｎｅｒｓ　ｏｎ　Ｈ２２　ｃｅｌｌｓ　ｗａｓ　ｈｉｈｇｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｆｏ　

ｓｐｌｅｅｎ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ　ｓｔｉｍｕｌａｔｄｅ　ｂｙ　ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　Ｉｎａｎｎｅｌ￣ｏｎ　Ｈ２２　ｃｅｌｌｓ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖ由．，ｌ１Ｌ　ｓｉｔｍｕｌａｔｄｅ　ｂｙ　ＳＥＡ　ｈａｄ　ｉｈｇｈｅｒ　ｋｉｌｌｉｇｎ　ａｃｔｉｉｖｙｔ　

［ｋｉｌｌｉｎｇ　ａｒｔｅ：（６４．３５±２．８２）％］ｔｈｎａ　ｆｏ　ＴＩＬ　ｏｎ　Ｈ２２　ｃｅｌｌｓ［ｋｉｌｉｎｇ　ｒａｔｅ：（５０．６３±２．５２）％］，，ｌ１Ｌ　ｓｔｉｍｕｌａｔｄｅ　ｂｙ　Ｓ－ＤＣ　ｈａｄ　ｍｕｃｈ　ｉｈｇｈｅｒ　ｋｉｌｉｇｎ　

ｃａｔｉｉｖｙｔ　ｏｎ　Ｈ２２　ｃｅｌｌｓ［ｋｉｌｌｉｇｎ　ｒａｔｅ：（７５．２３±３．２１）％］，，ｌ１Ｌ　ｓｉｔｍｕｌａｔｄｅ　ｂｙ　Ｓ－ＤＣ　ｎａｄ　ＳＥＡ　ａｈｄ　ｔｈｅ　ｉｈｇｈｅｓｔ　ｋｉｌｌｉｇｎ　ｃａｔｉｉｖｙｔ［ｋｉｌｌｉｎｇ　ｒａｔｅ：（８６．２９±　

３．８３）％］ｉｎ　ａｌｌ　ｇｒｏｕｐｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｓ－ＤＣ　ｎａｄ　ＳＥＡ　Ｃａｎ　ｉｎｄｕｃｅ　ｔｈｅ　ｍｏｓｔ　ｅ￣ｃｉｅｎｔ　ｋｉｌｉｎｇ　ａｃｔｉｉｖｙｔ　ｆｏ　ＴＩＬ　ｏｎ　Ｈ２２　ｅｃｌｓ　ｉｎ　ｉｖｔｒｏ．　

【Ｋｅｙ　Ｗｏｒｄｓ】Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ　ｃｅｌｌｓ；Ｓｕｐｅｒａｎｔｉｇｅｎ；Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌｅｎ　ｔｅｒｏｔｏｘｉｎ　Ａ；Ｔｕｍｏｒ　ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ；Ｈ２２　ｅｃｌｓ；Ｋｉｌｌｉｎｇ　ａｃｔｉｉｖｔｙ　

树突状细胞（ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ　ｃｅｌ，ＤＣ）是到目前为止发现的机　

１材料和方法　

体内功能最强的抗原提呈细胞（ａｎｔｉｇｅｎ—ｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇ　ｃｅｌ，ＡＰＣ），　

它在诱导针对肿瘤抗原的较高效而特异的Ｔ细胞免疫应答中　

１．１　细胞株、动物及主要试齐ｊ　Ｈ２２细胞株均购自中科院上　

起关键作用…。肿瘤浸润淋巴细胞（ｔｕｍｏｒ．ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ　ｌｙｍｐｈｏ－　海药物研究所；ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，４—６周龄，体重（２０±２）ｇ，由广　

ｃｙｔｅ，，ｌ１Ｌ）的抗肿瘤特异性强，其杀伤癌细胞的能力是淋巴因　西医科大学实验动物中心提供。ＲＰＭＩ　１　６４Ｏ培养基干粉购自　

子激活的杀伤细胞（ＩＪＡＫ）的５０—１００倍　Ｊ。超抗原（ｓｕｐｅｒ　ａｎ．　

ＧＩＢＣＯ公司；重组小鼠白细胞介素．２（ｒｍｌＬ－２）购自Ｐｅｐｒｏｔｅｅｈ　

ｔｉｇｅｎ，ＳＡｇ）是一种由细菌外毒素或逆转录蛋白构成的抗原性　

公司；小鼠淋巴细胞分离液为天津ＴＢＤ公司产品；大鼠抗小鼠　

物质，葡萄球菌肠毒素Ａ（ｓｔａｐｈ￣ｒｌｏｃｏｃｃａｌ　ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎ　Ａ，ＳＥＡ）作　

ＣＩＭ单抗、ＣＤ８ａ单抗和ＣＩＭ５Ｒ单抗购自ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ公司；大　

为ＳＡｇ家族中的一员，它能够直接激活Ｔ细胞，而其激活Ｔ细　

胞的能力是普通抗原的数十至数千倍，可以在抗肿瘤方面起　

鼠抗小鼠ＣＤ２０５、大鼠抗小鼠树突状细胞单抗购自Ｓｅｒｏｔｅｃ公　

重要作用。本实验采用小鼠Ｈ２２肝癌细胞（Ｈ２２细胞）全细胞　

司；ＦＩＴＣ标记羊抗大鼠ＩｓＣ购自ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ公司；鼠源　

性抗原致敏ＤＣ再联合ＳＥＡ体外激活从Ｈ２２细胞瘤体中分离　

ＧＭ．ＣＳＦ、ＩＬ４购自Ｓｉｇｍａ公司；ＳＥＡ购自军事医学科学院；　

出的，ｌ１Ｌ，观察激活后的，ｌ１Ｌ对Ｈ２２细胞的杀伤活性，并对其　

ＭＴＩ＂购自Ｓｉｍｇａ公司。　

作用机制进行探讨。　

１．２建立荷瘤小鼠模型　于ＢＡＬＢ／ｃ小鼠腹股沟皮下接种　

▲广西科学研究与技术开发计划课题（桂科攻０７１９００６２５）　

作者简介：庞志东，男，广西玉林人，主治医师，研究方向：肝癌的诊断与治疗研究。　

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ｌ６４　

Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ，Ｆｅｂ．２００８，Ｖｏ１．３０，Ｎｏ．２　

Ｈ２２细胞０．１　ＴＩｌｌ（含６×１０　Ｈ２２细胞）。２周后肿瘤长到直径　

约０．６　ｃｍ即成荷瘤小鼠。　

２结　果　

２．１，Ｉ１Ｌ和脾淋巴细胞对Ｈ２２细胞杀伤率比较，Ｉ１Ｌ对Ｈ２２　

１．３　ＴＩＬ及Ｈ２２细胞分离培养扩增参照文献［３］进行，从　

荷瘤小鼠中无菌取出瘤体，应用不连续密度梯度分离法分离　

出ＴＩＬ及Ｈ２２细胞。在所获得的ＴＩＬ中加入ｒｍＩＬ－２进行体外　

培养扩增。将Ｈ２２细胞分成两部分，一部分用于Ｈ２２细胞全　

细胞性抗原的制备，另一部分冻存，为细胞杀伤活性检测用。　

１．４小鼠脾淋巴细胞的制备按参照文献［４］进行，从荷瘤　

小鼠中取出脾脏通过机械法和低渗法获得小鼠脾淋巴细胞，　

细胞的杀伤活性［杀伤率为（５０．６３±２．５２）％］高于脾淋巴细　

胞对Ｈ２２细胞的杀伤活性［杀伤率为（１２．２６±１．２８）％］，差　

异有统计学意义（Ｐ＜０．０１），见表ｌ。　

２．２相同方式激活的ＴＩＬ和脾淋巴细胞对Ｈ２２细胞的杀伤　

率比较各种方式激活的ＴＩＬ对Ｈ２２细胞的杀伤活性均高于　

各自对应相同方式激活脾淋巴细胞对Ｈ２２细胞的杀伤活性，　

差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）。比如已致敏ＤＣ联合ＳＥＡ激　

然后加入ｒｍｌＬ－２进行体外培养扩增。　

１．５　Ｈ２２细胞全细胞性抗原的制备用ＲＰＭＩ１６４０培养液稀　

释从荷瘤小鼠瘤体中分离获得的Ｈ２２细胞，调细胞密度为ｌ×　

１０‘／ｍｌ

，

置于液氮中快速冷冻，室温慢融，经过３个冻融周期即　

获得Ｈ２２细胞全细胞性抗原。　

１．６小鼠骨髓ＤＣ的体外培养及鉴定小鼠骨髓ＤＣ的制备　

参照文献　进行。在ＤＣ培养过程中每ｌ×１０‘Ｄｃ加入含　

１００　Ｕ／ｍｌ　ＧＭ．ＣＳＦ、１００　Ｕ／ｍｌ　ＩＬ４进行体外培养扩增。ＤＣ的　

鉴定应用大鼠抗小鼠ＣＤ２０５单抗、大鼠抗小鼠Ｉ）Ｃ单抗和　

ＦＩＴＣ标记羊抗大鼠ＩｇＧ来特异显示。ＤＣ细胞含量占所分离　

扩增细胞７０％以上。　

１．７用肿瘤抗原致敏ＤＣ在ＤＣ培养第５天加入Ｈ２２细胞　

全细胞性抗原（每ｌ×１０‘个ＤＣ加入源于２×１０　个Ｈ２２细胞　

全细胞性抗原），培养４８　ｈ致敏ＤＣ，并洗涤去除其上清中残余　

Ｈ２２细胞全细胞性抗原后，成为已致敏ＤＣ。　

１．８　已致敏ＤＣ激活ＴＩＬ在ＴＩＬ培养第９天，加入已致敏　

ＤＣ（ＴＩＬ：ＤＣ＝５０：１），共培养４８　ｈ，获得已致敏ＤＣ激活的　

，Ｉ１Ｌ。　

１．９　ＳＥＡ激活ＴＩＬ在ＴＩＬ培养第９天加入ＳＥＡ（１００　ｎｇ／ｍ１），　

培养４８　ｈ获得ＳＥＡ激活的ＴＩＬ。　

１．１０已致敏ＤＣ联合ＳＥＡ激活ＴＩＬ在ＴＩＬ培养第９天，同　

时加入已致敏ＤＣ（ＴＩＬ：ＤＣ＝５０：１）和ＳＥＡ（１００　ｎｓ／ｍ１），共培　

养４８　ｈ，获得已致敏ＤＣ联合ＳＥＡ激活的ＴＩＬ。　

１．１１　激活脾淋巴细胞按步骤１．８一１．１０方法在小鼠脾淋　

巴细胞培养过程中加入已致敏ＤＣ或（和）ＳＥＡ激活脾淋巴细　

胞。　

１．１２细胞毒性实验按不同方式激活或未激活的ＴＩＬ或脾　

淋巴细胞分别作为效应细胞分为８组：已致敏ＤＣ联合ＳＥＡ激　

活ＴＩＬ组、已致敏ＤＣ激活ＴＩＬ组、ＳＥＡ激活ＴＩＬ组、ＴＩＬ组、已　

致敏ＤＣ联合ＳＥＡ激活脾淋巴细胞组、已致敏ＤＣ激活脾淋巴　

细胞组、ＳＥＡ激活脾淋巴细胞组和脾淋巴细胞组。靶细胞为　

Ｈ２２细胞，效靶比为１０：ｌ，用Ｍ１Ｔｒ法进行杀伤活性测定。按　

下列公式计算杀伤率：　

杀伤率（％）＝［１一　丝　靶细胞孔　值　紫　ＯＤ　）］×１００％

１．１３统计学处理所有变量均以　±ｓ表示，应用ＳＰＳＳ　１２．０　

对多个样本均数方差分析，两两比较，采用ＳＮＫ－ｑ检验，以　

Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。　

活ＴＩＬ对Ｈ２２细胞的杀伤活性［杀伤率为（８６．２９±３．８３）％］　

高于已致敏ＤＣ联合ＳＥＡ激活脾淋巴细胞对Ｈ２２细胞的杀伤　

活性［杀伤率为（５８．２６±２．６３）％］，见表ｌ。　

表ｌ各组效应细胞对Ｈ２２细胞杀伤率比较Ｉｘ±ｓ，％）　

Ｔａｂｌｅ　ｌ　Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｋｉｌｌｉｎｇ　ｒａｔｅ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｅｆｆｅｃｔｏｒ　

ｃｅｌｌｓ　Ｏｉｌ　Ｉ－Ｉ２２　ｅＵ￣（±ｓ。％）　

注：・・与对应的相同激活方式的・比较Ｐ＜０．０１　

２．３，Ｉ１Ｌ及不同方式激活的，Ｉ１Ｌ对Ｈ２２细胞杀伤率比较ＳＥＡ　

激活的ＴＩＬ对Ｈ２２细胞的杀伤活性［杀伤率为（６４．３５±　

２．８２）％］高于ＴＩＬ对Ｈ２２细胞的杀伤活性［杀伤率为（５ｏ．６３±　

２．５２）％］，两者之间比较差异有统计学意义（ｑ：１９．５８，　

Ｐ＜０．０１）；已致敏ＤＣ激活的ＴＩＬ对Ｈ２２细胞的杀伤活性更高　

［杀伤率为（７５．２３±３．２１）％］，两者之间比较（ｑ＝１５．５，　

Ｐ＜０．０１）；而已致敏ＤＣ联合ＳＥＡ激活的ＴＩＬ对Ｈ２２细胞的杀　

伤活性最高［杀伤率为（８６．２９±３．８３）％］，两者之间比较差异　

有统计学意义（ｑ＝１５、７８，Ｐ＜０．０１）；它们之间相互比较差异均　

有统计学意义（Ｆ＝４７３．０９，Ｐ＜０．０１），见表２。　

表２不同方式激活的ＴＩＬ对Ｉ－Ｉ２２细胞杀伤率比较ｆｘ±Ｊ。％）　

Ｔａｂｌｅ　２　Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｋｉｌｌｉｎｇ　ｒａｔｅ　ｂｅｔｗｅｎ　ＴＩＬ　ｗｈｉｃｈ　ｗｅｒｅ　

ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ　ｂｙ　ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ　ｍａｎｉｌｅｌ￣ｄ　ｏｉｌ　Ｈ２２　ｃｅｌｌｓＩ　±ｓ。％）　

注：各组分别比较均为Ｐ＜０．０１　

３讨论　

ＤＣ被认为是体内唯一能激活初始Ｔ细胞的高度专职化　

ＡＰＣ，它可以调节机体的细胞免疫和体液免疫。数目很少的　

Ｄｃ和低水平的抗原就能诱导强烈的Ｔ细胞免疫应答　“。我　

们在实验中运用Ｈ２２细胞全细胞性抗原致敏ＤＣ，原因是目前　

尚未能全面明确鉴定和获取肿瘤特异性抗原（ｔｕｍｏｒ　ｓｐｅｃｉ￣ｃ　

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广西医学　２００８年２月第３０卷第２期　

１６５　

ａｎｔｉｇｅｎ，ＴＳＡ）或肿瘤相关性抗原（ｔｕｍｏｒ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ａｎｔｉｇｅｎ，　种具有抗原提呈能力的ｅｘｏｓｏｍｅ小体来诱导免疫反应也增强　

了ＴＩＬ的抗肿瘤能力　Ｊ，结果导致已致敏Ｄｃ介导较高效的特　

异性杀伤肿瘤细胞活性。而已致敏ＤＣ联合ＳＥＡ激活的ＴＩＬ　

对ｔｔ２２细胞的杀伤活性最高，其原因可能除了在前面分析的　

内容外还有以下原因：大部分的ＳＥＡ不需要ＡＰＣ处理，它直　

接与ＤＣ胞膜上的ＭＨＣ　ＩＩ类分子抗原槽外侧呈非限制性结合　

后，以更大的亲和力与ＴＣＲ相结合，形成比双合体更稳定的　

ＴＡＡ），而已知的单一的肿瘤抗原尚不能诱导最佳抗肿瘤效　

应，免疫细胞必须针对多个抗原决定簇共同作用才可能发挥　

最佳抗肿瘤效应　；而Ｈ２２细胞全细胞性抗原包含了大量的　

ＴＳＡ和ＴＡＡ，ＤＣ又能够高效地对ＴＡＡ和ＴＳＡ进行提呈处理，　

因此由ＤＣ去摄取、识别Ｈ２２细胞全细胞性抗原并提呈给淋巴　

细胞发挥抗肿瘤作用是一个较好的选择。负载肿瘤抗原的　

ＤＣ疫苗可以诱导出较高效特异的抗肿瘤效应，这在许多动物　

及部分临床实验中已经得到证明　７　２。ＴＩＬ是主要存在于肿瘤　

间质内的多型细胞群，包括Ｔ、Ｂ细胞，又以ＣＤ３　ＣＤ８　Ｔ细胞　

ＭＨＣ—ＳＥ—ＴＣＲ三合体，这样不仅能明显诱导ＤＣ表达ＭＨＣ—ＩＩ　

类分子，使ＤＣ的ＨＬＡ—ＤＲ分子表达和ＴＮＦ—ｄ释放强烈上　

调¨　，并且表面共刺激分子增加。ＳＥＡ通过活化Ｔ细胞产生　

为主　Ｊ，ＴＩＬ具有较强的特异杀伤肿瘤细胞作用，研究表明肿　

瘤组织中的淋巴细胞浸润程度越高患者预后越好。超抗原能　

与Ｔ细胞结合并提供Ｔ细胞活化信号，可以在抗肿瘤方面起　

重要作用，和普通抗原相比，它有以下特点　：超抗原不需先　

经ＡＰＣ胞内处理即可激活Ｔ、Ｂ细胞；普通抗原和Ｔ细胞受体　

（ＴＣＲ）的５个可变区结合，而超抗原仅与ＴＣＲ的１个可变区　

结合；普通抗原受ＭＨＣ限制，超抗原不受ＭＨＣ限制；普通抗　

原主要激活ＣＩＭ　Ｔ细胞，超抗原同等激活ＣＩＭ　Ｔ和ＣＤ８　Ｔ　

细胞。细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）属Ｔ细胞的一个亚群，能　

特异性杀伤肿瘤细胞，它的激活通常受ＭＨＣ限制。　

本实验结果表明，ＴＩＬ对ｔｔ２２细胞的杀伤活性高于脾淋巴　

细胞对ｔｔ２２细胞的杀伤活性，其原因可能是ＴＩＬ原来处于肿　

瘤微环境中，已获得ｔｔ２２细胞抗原刺激，当其被提取到体外后　

脱离了肿瘤中的免疫抑制环境并且经使用ｒｍＩＬ－２培养扩增　

后，使其具有了较强的针对ｔｔ２２细胞的特异性杀伤活性。应　

用不同方式激活的ＴＩＬ对ｔｔ２２细胞的杀伤活性均高于各自对　

应方式激活脾淋巴细胞对Ｈ２２细胞杀伤活性，差异有统计学　

意义（Ｐ＜０．０１），原因可能是在ＴＩＬ杀伤活性强于脾淋巴细胞　

基础上，各自增加了已致敏ＤＣ和（或）ＳＥＡ激活后，受激活的　

ＴＩＬ和脾淋巴细胞的杀伤活性均得到了一定程度增强所致。　

本实验结果更表明，ＳＥＡ激活的ＴＩＬ对ｔｔ２２细胞的杀伤　

活性高于ＴＩＬ对ｔｔ２２细胞的杀伤活性，其原因可能除了前面　

对ＴＩＬ的分析内容外，还有以下两点原因　：（１）超抗原依赖　

细胞介导的细胞毒作用（ｓｕｐｅｒａｎｔｉｇｅｎ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｃｅｌ１．ｍｅｄｉａｔｅｄ　

ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ，ＳＤＣＣ），其作用迅速，在６　ｈ内即可非特异激活　

ＣＩＭ　Ｔ和ＣＤ８　ＣＴＬ细胞，然后杀伤肿瘤细胞。（２）细胞因子　

作用，ＳＥＡ激活的ＣＩＭ　Ｔ细胞能分泌如ＴＮＦ—ｄ、ＩＦＮ．＾ｙ、ＩＬ一１２　

等杀伤肿瘤细胞，所分泌的细胞因子不但上调肿瘤细胞表面　

ＭＨＣ表达、而且反馈刺激ＴＩＬ细胞产生更多细胞因子。在本　

实验中，已致敏ＤＣ激活的ＴＩＬ对Ｈ２２细胞的杀伤活性高于　

ＳＥＡ激活的ＴＩＬ对ｔｔ２２细胞的杀伤活性．主要原因可能是ＤＣ　

通过高效特异的细胞毒起作用而ＳＥＡ通过非特异性细胞毒起　

作用所致。另外，还可能与ＤＣ具有以下重要功能有关：（１）　

未成熟ＤＣ摄取抗原经内处理后结合成肽．ＭＨＣ分子复合物，　

提呈到ＤＣ表面，为激活Ｔ淋巴细胞提供必需的第一信号；ＤＣ　

高水平表达刺激分子如Ｂ７１／ＣＤ８０以及黏附分子如ＩＣＡＭ１／　

ＣＤ５４等，为激活Ｔ细胞提供第二信号，与ＴＣＲ接受的第一信　

号共同作用下，强烈刺激ＣＩＭ　Ｔ细胞活化，增强ＣＴＬ功　

能…　；（２）合成细胞因子如ＩＬ－１２、ＴＮＦ．ｄ、ＩＬ．１等，并可分泌一　

ＩＬ．１、ＴＮＦ一＾ｙ等细胞因子刺激ＤＣ成熟而间接活化ＤＣ。ＳＥＡ不　

但刺激ＣＤ８　Ｔ细胞亚群，而且刺激其他带有ＭＨＣ．ＩＩ的效应　

细胞如ＣＩＭ　Ｔ细胞，此时ＤＣ在ＳＥＡ所致Ｔ细胞活化、克隆扩　

增中起重要作用。在ＳＥＡ介导下Ｔ细胞与ＤＣ可相互激活，　

并且在ＳＥＡ和ＤＣ共同作用下可逆转肿瘤状态下的Ｔｈｌ向　

Ｔｈ２漂移的免疫抑制状态　，从而导致ＣＩＭ　Ｔ细胞（尤其　

Ｔｈｌ细胞）既加强ＡＰＣ的抗原提呈能力，又能改变某些肿瘤细　

胞存在的能够激活ＣＤ８　Ｔ细胞的高免疫源性多肽的无能状　

态，从而高效地产生ＣＴＬ反应。总之，已致敏的ＤＣ联合ＳＥＡ　

能起到协同作用，并能产生最有效的激活ＴＩＬ对Ｈ２２细胞的　

杀伤活性。　

综上所述，用Ｈ２２细胞全细胞性抗原致敏的ＤＣ联合ＳＥＡ　

能显著激活ＴＩＬ产生高效的对ｔｔ２２细胞的杀伤活性，均高于　

各对照组的效应细胞对ｔｔ２２细胞的杀伤活性。该结果有望为　

肝癌过继免疫研究提供强有力的理论依据，并有望为寻找一　

种新的有效的治疗肝癌的方法打下坚实基础。　

参考文献　

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［２］　Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ　ＳＡ，Ｓｐｌｅｓｓ　Ｐ，Ｉａｆｒｅｎｉｅｒｅ　Ｒ．Ａ　ｎｅｗ　ａｐｐｒｏａｃｈ　ｔｏ　ｔｈｅａｄｏｐｔｉｖｅ　

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ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｌｕｎｇ　Ｃａｎｃｅｒ，２００２，３６（１）：１７—２５．　

［４］Ｍｏｓｓｍａｎ　ＳＰ，Ｅｖａｎｓ　ＬＳ，Ｆａｎｇ　Ｈ，ｅｔ　１ａ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆａ　ＣＴＬ　ｖａｃｃｉｎｅ　

ｆｏｒ　Ｈｅｒ－２／ｎｅｕ　ｕｓｉｎｇ　ｐｅｐｔｉｄｅｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ　ａｎｄ　ａｄｊｕｖａｎｔｓ［Ｊ］．Ｖａｃ—　

ｃｉｎｅ，２００５，２３（２７）：３　５４５—３　５５４．　

［５］Ｉｎａｂａ　Ｋ，ＩｎＣａ　Ｍ，Ｒｏｍａｎｉ　Ｎ，ｅｔ　ａ１．Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌａｒｇｅ　ｎｕｍｂｅｒｓ　ｏｆ　

ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ　ｃｅｌｌｓ　ｆｒｏｍ　ｍｏｕｓｅ　ｂｏｎｅ　ｍａｒｒｏｗ　ｃｕｌｔｕｒｅｓ　ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄ　ｗｉｔｈ　

ｇｒｎａｕｌｃｏｙｔｅ　ｍａｅｒｏｐｈａｇｅ　ｃｏｌｏｎｙ　ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒ［Ｊ］、Ｊ　Ｅｘｐ　Ｍｅｄ，　

１９９２，１７６（６）：１　６９３—１　７０２．　

［６］Ｍａｈｄｉｎａ　Ｒ，Ｋｏｋｈａｅｉ　Ｐ，Ｎａｊａｒ　ＨＭ，ｅｔ　ａ１．Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ　ｃｅｌｌｓ，ｐｕｌｓｅｄ　ｗｉｔｈ　

ｌｙｓａｔｅ　ｏｆ　ｌａｌｏｇｅｎｅｉｃ　ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌｌｓ．ａｒｅ　ｃａｐａｂｌｅ　ｏｆ　ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ　ＭＨＣ・ｒｅ・　

ｓｔｒｉｅｔｅｄ　ａｎｔｉｇｅｎ—ｓｐｅｃｉｉｆｃ　ａｎｔｉｔｕｍｏｒ　Ｔ　ｃｅｌｌｓ［Ｊ］、Ｍｅｄ　Ｏｎｃｏｌ，２００６，２３　

（２）：２７３—２８２．　、　

［７］　刘剑勇，张力图，赵荫农，等．树突状细胞激活的肿瘤浸润性淋巴　

细胞抗肝癌免疫活性的研究［Ｊ］．实用癌症杂志，２００２，１７（４）：　

３４４—３４６．　

维普资讯

ｌ６６　

Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ，Ｆｅｂ．２００８，Ｖｏ１．３０，Ｎｏ．２　

ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｎ—ｏｒｅｌａｔｄ　ｆｅｕｎｃｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｍｏｎｏｃｙｔｅ－＆　ｉｒｖｅｄ　ｄｅｎｄｒｉｉｔｃ　

ｅｔ　ａ１．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　

【８］Ｍｉｃｈａｅｌ—Ｒｏｂｉｎｓｏｎ　ＪＭ，Ｐａｎｄｅｙａ　Ｎ，Ｗａｌｓｈ　ＭＤ，

．

ｏｆ　ｔｕｍｏｕｒ・ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ　ａｎｄ　ａｐｏｐｔ￣ｉｓ　ｉｎ　ｃｏｌｉｔｉｓ－・ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　

ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ　Ｃｈｅｍｏｔｈｃｒ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，２００５，５５（５）：４７９—４８７．　

［１２］Ｃｏｕｔｎｔａ　ＫＤ，ＦｒａｉｓｓｉｎｃＵｃ　ＡＢ，Ｃｏｒｄｉｃｒ　Ａ，ｅｔ　ａ１．Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ａｃ—　

ｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｍｏｎｏｃｙｔｃ－ｄｃｒｉｖｅｄ　ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ　ｃｅｌｌｓ　ｂｙ　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｈａｐ－　

ｎｅｏｐｌａｓｉａ：ｃｏｍｐａｒｉｏｎ　ｗｉｓｔｈ　ｓｐｏｒａｄｉｃ　ｃｏｌｏｒｅｃｔｌａ　ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｊ　Ｐａｔｈｏｌ，　

２００６，２０８（３）：３８１—３８７．　

［９］Ｈｏｌｆｒｅｔｃｒ　Ｓ，Ｂｒｏｋｅｒ　ＢＭ．Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ　ｓｕｐｅｒａｎｔｉｇｅｎｓ：ｄｏ　ｔｈｅｙ　ｐｌａｙ　ａ　

ｒｏｌｅ　ｉｎ　ｓｅｐｓｉｓ？［Ｊ］．Ａｒｃｈ　Ｉｍｍｕｎｏｌ　Ｔｈｃｒ　Ｅｘｐ（Ｗａｒｓｚ），２００５，５３　

（１）：１３—２７．　

ｔｅｎｓ，ａ　ｍｅｔａｌ　ａｌｌｅｒｇｅｎ，ａｎｄ　ａ　ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ　ｓｕｐｏｒａｎｔｉｇｏｎ［Ｊ］．Ｔｏｘｉｅｏｌ　

Ｓｃｉ，１９９９，５２（２）：１８９—１９８．　

［１３］Ｓｃｈｍｉｄｔ　Ｗｅｂｅｒ　ＣＢ，Ｂｌａｓｅｒ　Ｋ．１ｍｍｕｎｏｌ０　ｇｉｃａｌ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ　ｉｎ　ｓｐｅｃｉｉｆｃ　

ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ［Ｊ］．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ　Ｓｃｍｉｎ　Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ。２００４，２５（４）：　

３７７—３９０．　

［１０］Ｄｏｈｌｓｔｃｎ　Ｍ，Ｓｕｎｄｓｔｄｔｅ　Ａ，Ｂｊｏｒｋｌｕｎｄ　Ｍ．ｅｔ　ａ１．Ｓｕｐｅｒａｎｔｉｇｏｎ—ｉｎｄｕｃｅｄ　

ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ　ｓｕｐｐｒｅｓｓ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｃｏｌｏｎ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｃｅｕｓ［Ｊ］．１ｎＩＪ　

Ｃａｎｃｅｒ，１９９３。５４（３）：４８２—４８８．　

（收稿日期：２００７—１０—３１惨回日期．２００７—１２—２４）　

［１１］Ｎａｋａｓｈｌｍａ　Ｈ，Ｔａｓａｋｉ　Ａ，Ｋｕｂｏ　Ｍ，ｅｔａ１．Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆｄｏｃｃｔａｘｄ　ｏｎａｎｔｉｇｅｎ　

便携式睡眠初筛监测仪的临床应用评价▲　

吴燕葵刘建红　韦彩周　雷志坚　梁碧芳　

（广西壮族自治区人民医院、广西睡眠呼吸疾病中心，南宁市５３００２１）　

【摘要】　目的评价Ｅｍｂｌｅｔｔａ睡眠初筛监测仪对阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（ＯＳＡＨＳ）的诊断价值，为临床寻找方　

便、简易、准确、成本低的诊断方法提供参考。方法ｌ６例打鼾患者，用Ｅｍｂｌａ．Ｍｏｎｅｔ　１９多导仪行整夜多导睡眠图（ＰＳＧ）检查及　

用Ｅｍｂｌｅｔｔａ初筛仪行整夜初筛监测，比较两法的监测数据，包括睡眠呼吸紊乱指数（ＡＨＩ）、最低血氧饱和度、平均血氧饱和度。　

并以ＰＳＧ—ＡＨＩ为诊断ＯＳＡＨＳ的金标准，取同一患者Ｅｍｂｌｅｔｔａ．ＡＨ１绘制受试者工作特征曲线（ＲＯＣ曲线），获得Ｅｍｂｌｅｔｔａ—ＡＨＩ的　

最佳诊断点。结果Ｅｍｂｌｅｔｔａ—ＡＨＩ与金标准ＰＳＧ—ＡＨＩ的结果有较好的直线相关关系（ｒ＝０．９６１，尸＝０．０００）。Ｅｍｂｌｅｔｔａ一平均血氧　

饱和度与金标准ＰＳＧ平均血氧饱和度的结果有较好的直线相关关系（ｒ＝２０．８５３，Ｐ＝０．０００）。以ＰＳＧ　ＡＨＩ＞－－５作为诊断ＯＳＡＨＳ　

的金标准，绘制ＲＯＣ曲线，得出的Ｅｍｂｌｅｔｔａ—ＡＨＩ对ＯＳＡＨＳ的最佳诊断值为Ｅｍｂｌｅｔｔａ—ＡＨＩｔ＞５．７５。对该诊断点作）（　检验，其灵敏　

度为１００％，特异度为１００％。结论Ｅｍｂｌｅｔｔａ监测仪对ＯＳＡＨＳ的诊断准确性较高，临床应用价值较大。　

【关键词】　阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征；睡眠初筛仪；诊断试验；ＲＯＣ曲线　

【中图分类号】　Ｒ　５６　【文献标识码】　Ａ　【文章编号】０２５３－４３０４（２００８）０２－０１６６－０３　

Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｏｒｔａｂｌｅ　ｓｌｅｅｐ　ｍｏｎｉｔｏｒ　ｉｎ　ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　ｏｆ　ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ　ｓｌｅｅｐ　ａｐｎｅａ－ｈｙｐｏｐｎｅａ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ　

Ｉｖｕ　Ｙａｈ—ｋｕｉ，ＬＩＵ　Ｊｉａｎ一／ｔＯｎｇ，ＷＥＩ　Ｃａｉ一：＾ｏ“，ＬＥＩ　Ｚｈｉ－ｊｉａｎ，ＨＡＮＧ　Ｂｉ扣ｎｇ　

（Ｓｌｅｅｐ　Ｄｉｓｏｒｄｅｒｅｄ　ａｎｄ　Ｂｒｅａｔｈｉｎｇ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｏｆＧｕａｎｇｘｉ。Ｐｅｏｐｌｅ＂ｓ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆＧｕａｎｇｘｉ　Ｚｈｕａｎｇ　Ａｕｔｏｎｏｍｏｕｓ　Ｒｅｇｉｏｎ，Ｎａｎｎｉｎｇ　５３００２１，Ｃｈｉｎａ）　

【Ａｂｓｔｒａｃｔ】　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｅｖａｌｕａｔｅ　ｔｈｅ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｖａｌｕｅ　ｏｆ　Ｅｍｂｌｅｔｔａ　ｐｏｒｔａｂｌｅ　ｓｌｅｅｐ　ｍｏｎｉｔｏｒ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　ｏｆ　ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ　ｓｌｅｐ　

ａｐｎｅａ—ｈｙｐｏｐｎｅａ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ（ＯＳＡＨＳ）ａｎｄ　ｄｅｖｅｌｏｐ　ａ　ｖａｌｉｄ，ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔ　ａｎｄ　ｒｅｌｉｂａｌｅ　ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｎ　ＯＳＡＨＳ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ　ａｐｎｅａ　ａｎｄ　

ｈｙｐｏｐｎｅａ　ｉｎｄｅｘ（ＡＨＩ），ｔｈｅ　ｌｏｗｅｓｔ　ａｒｔｅｉｒｌａ　ｏｘｙｇｅｎ　ｓａｔｕｒａｔｉｏｎ（ＳａＯ２）ａｎｄ　ｔｈｅ　ｎｌｅａｎ　ＳａＯ２　ｏｆ　１６　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｈｔ　ｓｎｏｒｉｎｇ　ｗｅｒｅ　ｍｅａｓｕｒｅｄ　ｗｉｔｌｌ　

Ｅｍｂｌａ—ｍｏｎｅｔ　ｐｏｌｙｓｏｍｎｏｇｒａｐｈ（ＰＳＧ）ａｎｄ　Ｅｍｂｌｅｔｔａ　ｏｐｒｔｂａｌｅ　ｓｌｅｐ　ｍｏｎｉｔｏｒ　ｒｅｓｐｅｃｉｔｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ｉｄａｇｎｏｓｔｉｃｓ　ｃｉｒｔｅｒｉｏｎ　ｆｏｒ　ＯＳＡＨＳ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ａｓ　

ＡＨＩｔ＞５　ｍｅａｓｕｒｅｄ　ｂｙ　Ｅｍｂｌａ—ｏｍｎｅｔ　ｏｐｌｙｓｏｍｎｏｇｒａｐｈ．Ｔｈｅ　ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｏｐｅｒａｔｉｇｎ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ　ｃｕｒｖｅ（ＲＯＣ）Ｗａｓ　ｒｄａｗｏｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ＡＨＩ　ｍｅａｓｕｒｅｄ　

ｉｗｔｈ　ＰＳＧ　ａｎｄ　Ｅｍｂｌｅｔｔａ　ｐｏｒｔｂａｌｅ　ｓｌｅｐ　ｏｍｎｉｔｏｒ　ｗａｓ　ｇｏｏｄ—ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ．Ｓｏ　ｄｉｄ　ｔｈｅ　ｎｌｅａｎ　ＳａＯ２．Ｔｈｅ　ｉｄａｇｎｏｓｔｉｃ　ｓｅｎｓｉｉｔｖｉｔｙ，ｓｐｅｃｉｉｆｃｉｙｔ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｉｄａｇｎｏｓｔｉｃ　

ｖａｌｕｅ　ｏｆ　ＡＨ１　ｗｅｒｅ　１００％，１００％ａｎｄ　５．７５，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｅｍｂｌｅｔｔａ　ｐｏｒｔｂａｌｅ　ｓｌｅｐ　ｍｏｎｉｔｏｒ　ｓｈｏｕｌｄ　ｂｅ　ａ　ｖａｌｉｄ，ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔ　ａｎｄ　ｒｅｌｉａｂｌｅ　

ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ　ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ　ｆｏｒ　ＯＳＡＨＳ．　

【Ｋｅｙ　Ｗｏｒｄｓ】　Ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ　ｓｌｅｅｐ　ａｐｎｅａ—ｈｙｐｏｐｎｅａ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ；Ｐｏｒｔａｂｌｅ　ｓｌｅｅｐ　ｍｏｎｉｔｏｒ；Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ　ｔｅｓｔ；ＲＯＣ　Ｇｕｌ￣ｅ　

阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ　ｓｌｅｐ　

生活质量，甚至危及患者生命。多导睡眠图（ｐｏｌｙｓｏｍｎｏｇｒａｍ，　

ａｐｎｅａ—ｈｙｐｏｐｎｅａ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＯＳＡＨＳ）是近５０年逐步认识的一种　

ＰＳＧ）是目前诊断ＯＳＡＨＳ的标准方法，但由于其程序较繁杂、　

常见睡眠疾病，据文献报告３０～６０岁成年人发病率为２％～　

传感电极多、检查价格昂贵，难以在基层普及。便携式或无电　

６％　。近年研究显示，至少有８２％的男性和９３％的女性患　

极睡眠呼吸监测仪将是今后发展的方向，现探讨便携式　

者未被正确诊断，实际患病率可能高达７％～１３％Ｌ２］。随着对　

Ｅｍｂｌｅｔｔａ睡眠初筛监测仪对ＯＳＡＨＳ的诊断价值及意义。　

ＯＳＡＨＳ研究的深入。发现其并发症越来越多。严重影响患者的　

▲广西自然科学基金资助课题（桂科基０２３６０４４）　

2024年5月22日发(作者：刁霜)

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广曲Ｉ夏学　２００８年２月第３０卷第２期　

ｌ６３　

ＤＣ联合ＳＥＡ激活ＴＩＬ体外杀伤小鼠肝癌细胞活性研究▲　

庞志东　李文锋　刘剑勇　周　任　

（１广西医科大学第六附属医院、广西玉林市第二人民医院肝胆外科，玉林市５３７５００；２广西医科大学附属肿瘤医院，南宁市５３００２１）　

【摘要】　目的探讨Ｈ２２细胞全细胞性抗原致敏的ＤＣ联合ＳＥＡ激活的，ｌ１Ｌ体外抗小鼠肝癌活性作用。方法从荷瘤小　

鼠四肢长骨骨髓中获取ＤＣ，应用　巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ—ＣＳＦ）、白介素４（ＩＬ４）和Ｈ２２细胞全细胞性抗原致敏ＤＣ，然后　

用已致敏的ＤＣ联合ＳＥＡ激活从荷瘤小鼠中提取的，ｌ１Ｌ和脾淋巴细胞，观察受激活后的，ｌ１Ｌ和脾淋巴细胞作为效应细胞在体外　

对Ｈ２２细胞的杀伤活性，并与对照组进行比较。结果，ｌ１Ｌ对Ｈ２２细胞的杀伤活性［杀伤率为（５０，６３±２．５２）％］高于脾淋巴细　

胞对Ｈ２２细胞的杀伤活性［杀伤率为（１２．２６±１．２８）％］，用不同方式激活的，ｌ１Ｌ对Ｈ２２细胞的杀伤活性均高于各自对应方式激　

活的脾淋巴细胞对Ｈ２２细胞的杀伤活性；ＳＥＡ激活的，ｌ１Ｌ对Ｈ２２细胞的杀伤活性［杀伤率为（６４．３５±２．８２）％］高于，ｌ１Ｌ对Ｈ２２　

细胞的杀伤活性［杀伤率为（５０．６３±２．５２）％］，已致敏ＤＣ激活的，ｌ１Ｌ对Ｈ２２细胞的杀伤活性更高［杀伤率为（７５．２３±　

３．２１）％］，而已致敏ＤＣ联合ＳＥＡ激活的，ｌ１Ｌ对Ｈ２２细胞的杀伤活性最高［杀伤率为（８６．２９±３．８３）％］。结论用Ｈ２２细胞全　

细胞性抗原致敏的ＤＣ联合ＳＥＡ能显著激活，ｌ１Ｌ产生高效的对Ｈ２２细胞的杀伤活性。　

【关键词】　树突状细胞；葡萄球菌肠毒素Ａ；肿瘤浸润淋巴细胞；Ｈ２２肝癌细胞；杀伤活性　

【中图分类号】　Ｒ　７３５．７　【文献标识码】　Ａ　【文章编号】０２５３－４３０４（２００８）０２－０１６３－０４　

Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ａｎｔｉ－ｍ０ｕｓｅ　ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｏｆ　ＴＩＬ　ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ　ｂｙ　ＤＣ　ａｎｄ　ＳＥＡ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　

ＰＡＮＧ　Ｚｈｉ—ｄｏｎｇ，ＬＩ　Ｗｅｎ－ｆｅｎｇ，ＬＩＵ　Ｊｉａｎ—ｙｏｎｇ，ＺＨＯＵ　Ｒｅｎ　

（１　Ｔｈｅ　Ｓｉｘｔｈ　铷　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，ＧⅡ口　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙｔｄｔｈ　５３７５００，Ｃｈ／ｎａ；２　Ｔｕｍｏｔｅｒ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，ＧⅡ口　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｔｅｒｓ　，Ｎａ，ｍ／ｎｇ　５３００２１，　）　

【Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｋｉｌｌｉｎｇ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ＴＩＬ　ｔｈａｔ　Ｗｉｌｔｓ　ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ　ｂｙ　Ｓ－ＤＣ（ＤＣ　ｈａｄ　ｂｅｅｎ　ｓｅｎｓｉｉｔｚｅｄ　ｂｙ　Ｈ２２　ｃｅｌｌ　

ａｎｔｉｇｅｎ）ａｎｄ　ＳＥＡ　ｏｎ　ｍｏｕｓｅ　ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｌｕａｒ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ，Ｍｅｔｈｏｄｓ　ＤＣ　ｗｅｒｅ　ｉｓｏｌａｔｄｅ　ｆｒｏｍ　ｎｌＯｔｌＳｅ　ｂｏｎｅ　ＩｎａＩＴｏｗ　ａｎｄ　ｓｅｎｓｉｉｔｚｅｄ　ｂｙ　

ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ／ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ　ｃｏｌｏｎｙ　ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒ（ＧＭ—ＣＳＦ），ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－４（ＩＩ　）ａｎｄ　Ｈ２２　ｃｅｌｌ　ａｎｔｉｇｅｎ．Ｔｈｅｎ　ＴＩＬ　ａｎｄ　ｍｏｕｓｅ　ｓｐｌｅｅｎ　

ｌｙｍｐｈｏｅｙｔｅｓ（ｔｈｅ　ｃｅｌｌｓ　ｗｅｒｅ　ｆｒｏｍ　ｎｌＯｔｌＳｅ　ｂｅａｒｉｇｎ　ｔｕｍｏｒ）ｗｅｅｒ　ｓｉｔｍｕｌａｔｄｅ　ｂｙ　Ｓ－ＤＣ　ｎａｄ　ＳＥＡ，ａｎｄ　ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｔｈｅｉｒ　ｋｉｌｌｉｇｎ　ａｃｔｉｖｉｙｔ　ｗｉｈｔ　ｔｈｅ　ｏｃｎｔｒｏｌｓ　

ｏｎ　Ｈ２２　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｋｉｌｌｉｎｇ　ａｃｔｉｉｖｔｙ　ｆｏＴＩＬ　ｏｎ　Ｈ２２　ｅｃｌｌｓ［ｋｉｌｌｉｎｇ　ｒａｔｅ：（５０．６３±２．５２）％］ｗａｓ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｆｏ　ｓｐｌｅｎ　ｌｙｍｐｈｏｅｙｔｅｓ　

ｏｎ　Ｈ２２　ｅｃｌｓ［ｋｉｌｉｎｇ　ｒａｔｅ：（７．２６±Ｉ．２８）％］．Ｔｈｅ　ｋｉｌｌｉｇｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ＴＩＬ　ｓｔｉｍｕｌａｔｄｅ　ｂｙ　ｄｉｆｅｅｒｎｃｅ　ｍａｎｎｅｒｓ　ｏｎ　Ｈ２２　ｃｅｌｌｓ　ｗａｓ　ｈｉｈｇｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｆｏ　

ｓｐｌｅｅｎ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ　ｓｔｉｍｕｌａｔｄｅ　ｂｙ　ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　Ｉｎａｎｎｅｌ￣ｏｎ　Ｈ２２　ｃｅｌｌｓ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖ由．，ｌ１Ｌ　ｓｉｔｍｕｌａｔｄｅ　ｂｙ　ＳＥＡ　ｈａｄ　ｉｈｇｈｅｒ　ｋｉｌｌｉｇｎ　ａｃｔｉｉｖｙｔ　

［ｋｉｌｌｉｎｇ　ａｒｔｅ：（６４．３５±２．８２）％］ｔｈｎａ　ｆｏ　ＴＩＬ　ｏｎ　Ｈ２２　ｃｅｌｌｓ［ｋｉｌｉｎｇ　ｒａｔｅ：（５０．６３±２．５２）％］，，ｌ１Ｌ　ｓｔｉｍｕｌａｔｄｅ　ｂｙ　Ｓ－ＤＣ　ｈａｄ　ｍｕｃｈ　ｉｈｇｈｅｒ　ｋｉｌｉｇｎ　

ｃａｔｉｉｖｙｔ　ｏｎ　Ｈ２２　ｃｅｌｌｓ［ｋｉｌｌｉｇｎ　ｒａｔｅ：（７５．２３±３．２１）％］，，ｌ１Ｌ　ｓｉｔｍｕｌａｔｄｅ　ｂｙ　Ｓ－ＤＣ　ｎａｄ　ＳＥＡ　ａｈｄ　ｔｈｅ　ｉｈｇｈｅｓｔ　ｋｉｌｌｉｇｎ　ｃａｔｉｉｖｙｔ［ｋｉｌｌｉｎｇ　ｒａｔｅ：（８６．２９±　

３．８３）％］ｉｎ　ａｌｌ　ｇｒｏｕｐｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｓ－ＤＣ　ｎａｄ　ＳＥＡ　Ｃａｎ　ｉｎｄｕｃｅ　ｔｈｅ　ｍｏｓｔ　ｅ￣ｃｉｅｎｔ　ｋｉｌｉｎｇ　ａｃｔｉｉｖｙｔ　ｆｏ　ＴＩＬ　ｏｎ　Ｈ２２　ｅｃｌｓ　ｉｎ　ｉｖｔｒｏ．　

【Ｋｅｙ　Ｗｏｒｄｓ】Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ　ｃｅｌｌｓ；Ｓｕｐｅｒａｎｔｉｇｅｎ；Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌｅｎ　ｔｅｒｏｔｏｘｉｎ　Ａ；Ｔｕｍｏｒ　ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ；Ｈ２２　ｅｃｌｓ；Ｋｉｌｌｉｎｇ　ａｃｔｉｉｖｔｙ　

树突状细胞（ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ　ｃｅｌ，ＤＣ）是到目前为止发现的机　

１材料和方法　

体内功能最强的抗原提呈细胞（ａｎｔｉｇｅｎ—ｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇ　ｃｅｌ，ＡＰＣ），　

它在诱导针对肿瘤抗原的较高效而特异的Ｔ细胞免疫应答中　

１．１　细胞株、动物及主要试齐ｊ　Ｈ２２细胞株均购自中科院上　

起关键作用…。肿瘤浸润淋巴细胞（ｔｕｍｏｒ．ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ　ｌｙｍｐｈｏ－　海药物研究所；ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，４—６周龄，体重（２０±２）ｇ，由广　

ｃｙｔｅ，，ｌ１Ｌ）的抗肿瘤特异性强，其杀伤癌细胞的能力是淋巴因　西医科大学实验动物中心提供。ＲＰＭＩ　１　６４Ｏ培养基干粉购自　

子激活的杀伤细胞（ＩＪＡＫ）的５０—１００倍　Ｊ。超抗原（ｓｕｐｅｒ　ａｎ．　

ＧＩＢＣＯ公司；重组小鼠白细胞介素．２（ｒｍｌＬ－２）购自Ｐｅｐｒｏｔｅｅｈ　

ｔｉｇｅｎ，ＳＡｇ）是一种由细菌外毒素或逆转录蛋白构成的抗原性　

公司；小鼠淋巴细胞分离液为天津ＴＢＤ公司产品；大鼠抗小鼠　

物质，葡萄球菌肠毒素Ａ（ｓｔａｐｈ￣ｒｌｏｃｏｃｃａｌ　ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎ　Ａ，ＳＥＡ）作　

ＣＩＭ单抗、ＣＤ８ａ单抗和ＣＩＭ５Ｒ单抗购自ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ公司；大　

为ＳＡｇ家族中的一员，它能够直接激活Ｔ细胞，而其激活Ｔ细　

胞的能力是普通抗原的数十至数千倍，可以在抗肿瘤方面起　

鼠抗小鼠ＣＤ２０５、大鼠抗小鼠树突状细胞单抗购自Ｓｅｒｏｔｅｃ公　

重要作用。本实验采用小鼠Ｈ２２肝癌细胞（Ｈ２２细胞）全细胞　

司；ＦＩＴＣ标记羊抗大鼠ＩｓＣ购自ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ公司；鼠源　

性抗原致敏ＤＣ再联合ＳＥＡ体外激活从Ｈ２２细胞瘤体中分离　

ＧＭ．ＣＳＦ、ＩＬ４购自Ｓｉｇｍａ公司；ＳＥＡ购自军事医学科学院；　

出的，ｌ１Ｌ，观察激活后的，ｌ１Ｌ对Ｈ２２细胞的杀伤活性，并对其　

ＭＴＩ＂购自Ｓｉｍｇａ公司。　

作用机制进行探讨。　

１．２建立荷瘤小鼠模型　于ＢＡＬＢ／ｃ小鼠腹股沟皮下接种　

▲广西科学研究与技术开发计划课题（桂科攻０７１９００６２５）　

作者简介：庞志东，男，广西玉林人，主治医师，研究方向：肝癌的诊断与治疗研究。　

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ｌ６４　

Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ，Ｆｅｂ．２００８，Ｖｏ１．３０，Ｎｏ．２　

Ｈ２２细胞０．１　ＴＩｌｌ（含６×１０　Ｈ２２细胞）。２周后肿瘤长到直径　

约０．６　ｃｍ即成荷瘤小鼠。　

２结　果　

２．１，Ｉ１Ｌ和脾淋巴细胞对Ｈ２２细胞杀伤率比较，Ｉ１Ｌ对Ｈ２２　

１．３　ＴＩＬ及Ｈ２２细胞分离培养扩增参照文献［３］进行，从　

荷瘤小鼠中无菌取出瘤体，应用不连续密度梯度分离法分离　

出ＴＩＬ及Ｈ２２细胞。在所获得的ＴＩＬ中加入ｒｍＩＬ－２进行体外　

培养扩增。将Ｈ２２细胞分成两部分，一部分用于Ｈ２２细胞全　

细胞性抗原的制备，另一部分冻存，为细胞杀伤活性检测用。　

１．４小鼠脾淋巴细胞的制备按参照文献［４］进行，从荷瘤　

小鼠中取出脾脏通过机械法和低渗法获得小鼠脾淋巴细胞，　

细胞的杀伤活性［杀伤率为（５０．６３±２．５２）％］高于脾淋巴细　

胞对Ｈ２２细胞的杀伤活性［杀伤率为（１２．２６±１．２８）％］，差　

异有统计学意义（Ｐ＜０．０１），见表ｌ。　

２．２相同方式激活的ＴＩＬ和脾淋巴细胞对Ｈ２２细胞的杀伤　

率比较各种方式激活的ＴＩＬ对Ｈ２２细胞的杀伤活性均高于　

各自对应相同方式激活脾淋巴细胞对Ｈ２２细胞的杀伤活性，　

差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）。比如已致敏ＤＣ联合ＳＥＡ激　

然后加入ｒｍｌＬ－２进行体外培养扩增。　

１．５　Ｈ２２细胞全细胞性抗原的制备用ＲＰＭＩ１６４０培养液稀　

释从荷瘤小鼠瘤体中分离获得的Ｈ２２细胞，调细胞密度为ｌ×　

１０‘／ｍｌ

，

置于液氮中快速冷冻，室温慢融，经过３个冻融周期即　

获得Ｈ２２细胞全细胞性抗原。　

１．６小鼠骨髓ＤＣ的体外培养及鉴定小鼠骨髓ＤＣ的制备　

参照文献　进行。在ＤＣ培养过程中每ｌ×１０‘Ｄｃ加入含　

１００　Ｕ／ｍｌ　ＧＭ．ＣＳＦ、１００　Ｕ／ｍｌ　ＩＬ４进行体外培养扩增。ＤＣ的　

鉴定应用大鼠抗小鼠ＣＤ２０５单抗、大鼠抗小鼠Ｉ）Ｃ单抗和　

ＦＩＴＣ标记羊抗大鼠ＩｇＧ来特异显示。ＤＣ细胞含量占所分离　

扩增细胞７０％以上。　

１．７用肿瘤抗原致敏ＤＣ在ＤＣ培养第５天加入Ｈ２２细胞　

全细胞性抗原（每ｌ×１０‘个ＤＣ加入源于２×１０　个Ｈ２２细胞　

全细胞性抗原），培养４８　ｈ致敏ＤＣ，并洗涤去除其上清中残余　

Ｈ２２细胞全细胞性抗原后，成为已致敏ＤＣ。　

１．８　已致敏ＤＣ激活ＴＩＬ在ＴＩＬ培养第９天，加入已致敏　

ＤＣ（ＴＩＬ：ＤＣ＝５０：１），共培养４８　ｈ，获得已致敏ＤＣ激活的　

，Ｉ１Ｌ。　

１．９　ＳＥＡ激活ＴＩＬ在ＴＩＬ培养第９天加入ＳＥＡ（１００　ｎｇ／ｍ１），　

培养４８　ｈ获得ＳＥＡ激活的ＴＩＬ。　

１．１０已致敏ＤＣ联合ＳＥＡ激活ＴＩＬ在ＴＩＬ培养第９天，同　

时加入已致敏ＤＣ（ＴＩＬ：ＤＣ＝５０：１）和ＳＥＡ（１００　ｎｓ／ｍ１），共培　

养４８　ｈ，获得已致敏ＤＣ联合ＳＥＡ激活的ＴＩＬ。　

１．１１　激活脾淋巴细胞按步骤１．８一１．１０方法在小鼠脾淋　

巴细胞培养过程中加入已致敏ＤＣ或（和）ＳＥＡ激活脾淋巴细　

胞。　

１．１２细胞毒性实验按不同方式激活或未激活的ＴＩＬ或脾　

淋巴细胞分别作为效应细胞分为８组：已致敏ＤＣ联合ＳＥＡ激　

活ＴＩＬ组、已致敏ＤＣ激活ＴＩＬ组、ＳＥＡ激活ＴＩＬ组、ＴＩＬ组、已　

致敏ＤＣ联合ＳＥＡ激活脾淋巴细胞组、已致敏ＤＣ激活脾淋巴　

细胞组、ＳＥＡ激活脾淋巴细胞组和脾淋巴细胞组。靶细胞为　

Ｈ２２细胞，效靶比为１０：ｌ，用Ｍ１Ｔｒ法进行杀伤活性测定。按　

下列公式计算杀伤率：　

杀伤率（％）＝［１一　丝　靶细胞孔　值　紫　ＯＤ　）］×１００％

１．１３统计学处理所有变量均以　±ｓ表示，应用ＳＰＳＳ　１２．０　

对多个样本均数方差分析，两两比较，采用ＳＮＫ－ｑ检验，以　

Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。　

活ＴＩＬ对Ｈ２２细胞的杀伤活性［杀伤率为（８６．２９±３．８３）％］　

高于已致敏ＤＣ联合ＳＥＡ激活脾淋巴细胞对Ｈ２２细胞的杀伤　

活性［杀伤率为（５８．２６±２．６３）％］，见表ｌ。　

表ｌ各组效应细胞对Ｈ２２细胞杀伤率比较Ｉｘ±ｓ，％）　

Ｔａｂｌｅ　ｌ　Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｋｉｌｌｉｎｇ　ｒａｔｅ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｅｆｆｅｃｔｏｒ　

ｃｅｌｌｓ　Ｏｉｌ　Ｉ－Ｉ２２　ｅＵ￣（±ｓ。％）　

注：・・与对应的相同激活方式的・比较Ｐ＜０．０１　

２．３，Ｉ１Ｌ及不同方式激活的，Ｉ１Ｌ对Ｈ２２细胞杀伤率比较ＳＥＡ　

激活的ＴＩＬ对Ｈ２２细胞的杀伤活性［杀伤率为（６４．３５±　

２．８２）％］高于ＴＩＬ对Ｈ２２细胞的杀伤活性［杀伤率为（５ｏ．６３±　

２．５２）％］，两者之间比较差异有统计学意义（ｑ：１９．５８，　

Ｐ＜０．０１）；已致敏ＤＣ激活的ＴＩＬ对Ｈ２２细胞的杀伤活性更高　

［杀伤率为（７５．２３±３．２１）％］，两者之间比较（ｑ＝１５．５，　

Ｐ＜０．０１）；而已致敏ＤＣ联合ＳＥＡ激活的ＴＩＬ对Ｈ２２细胞的杀　

伤活性最高［杀伤率为（８６．２９±３．８３）％］，两者之间比较差异　

有统计学意义（ｑ＝１５、７８，Ｐ＜０．０１）；它们之间相互比较差异均　

有统计学意义（Ｆ＝４７３．０９，Ｐ＜０．０１），见表２。　

表２不同方式激活的ＴＩＬ对Ｉ－Ｉ２２细胞杀伤率比较ｆｘ±Ｊ。％）　

Ｔａｂｌｅ　２　Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｋｉｌｌｉｎｇ　ｒａｔｅ　ｂｅｔｗｅｎ　ＴＩＬ　ｗｈｉｃｈ　ｗｅｒｅ　

ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ　ｂｙ　ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ　ｍａｎｉｌｅｌ￣ｄ　ｏｉｌ　Ｈ２２　ｃｅｌｌｓＩ　±ｓ。％）　

注：各组分别比较均为Ｐ＜０．０１　

３讨论　

ＤＣ被认为是体内唯一能激活初始Ｔ细胞的高度专职化　

ＡＰＣ，它可以调节机体的细胞免疫和体液免疫。数目很少的　

Ｄｃ和低水平的抗原就能诱导强烈的Ｔ细胞免疫应答　“。我　

们在实验中运用Ｈ２２细胞全细胞性抗原致敏ＤＣ，原因是目前　

尚未能全面明确鉴定和获取肿瘤特异性抗原（ｔｕｍｏｒ　ｓｐｅｃｉ￣ｃ　

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广西医学　２００８年２月第３０卷第２期　

１６５　

ａｎｔｉｇｅｎ，ＴＳＡ）或肿瘤相关性抗原（ｔｕｍｏｒ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ａｎｔｉｇｅｎ，　种具有抗原提呈能力的ｅｘｏｓｏｍｅ小体来诱导免疫反应也增强　

了ＴＩＬ的抗肿瘤能力　Ｊ，结果导致已致敏Ｄｃ介导较高效的特　

异性杀伤肿瘤细胞活性。而已致敏ＤＣ联合ＳＥＡ激活的ＴＩＬ　

对ｔｔ２２细胞的杀伤活性最高，其原因可能除了在前面分析的　

内容外还有以下原因：大部分的ＳＥＡ不需要ＡＰＣ处理，它直　

接与ＤＣ胞膜上的ＭＨＣ　ＩＩ类分子抗原槽外侧呈非限制性结合　

后，以更大的亲和力与ＴＣＲ相结合，形成比双合体更稳定的　

ＴＡＡ），而已知的单一的肿瘤抗原尚不能诱导最佳抗肿瘤效　

应，免疫细胞必须针对多个抗原决定簇共同作用才可能发挥　

最佳抗肿瘤效应　；而Ｈ２２细胞全细胞性抗原包含了大量的　

ＴＳＡ和ＴＡＡ，ＤＣ又能够高效地对ＴＡＡ和ＴＳＡ进行提呈处理，　

因此由ＤＣ去摄取、识别Ｈ２２细胞全细胞性抗原并提呈给淋巴　

细胞发挥抗肿瘤作用是一个较好的选择。负载肿瘤抗原的　

ＤＣ疫苗可以诱导出较高效特异的抗肿瘤效应，这在许多动物　

及部分临床实验中已经得到证明　７　２。ＴＩＬ是主要存在于肿瘤　

间质内的多型细胞群，包括Ｔ、Ｂ细胞，又以ＣＤ３　ＣＤ８　Ｔ细胞　

ＭＨＣ—ＳＥ—ＴＣＲ三合体，这样不仅能明显诱导ＤＣ表达ＭＨＣ—ＩＩ　

类分子，使ＤＣ的ＨＬＡ—ＤＲ分子表达和ＴＮＦ—ｄ释放强烈上　

调¨　，并且表面共刺激分子增加。ＳＥＡ通过活化Ｔ细胞产生　

为主　Ｊ，ＴＩＬ具有较强的特异杀伤肿瘤细胞作用，研究表明肿　

瘤组织中的淋巴细胞浸润程度越高患者预后越好。超抗原能　

与Ｔ细胞结合并提供Ｔ细胞活化信号，可以在抗肿瘤方面起　

重要作用，和普通抗原相比，它有以下特点　：超抗原不需先　

经ＡＰＣ胞内处理即可激活Ｔ、Ｂ细胞；普通抗原和Ｔ细胞受体　

（ＴＣＲ）的５个可变区结合，而超抗原仅与ＴＣＲ的１个可变区　

结合；普通抗原受ＭＨＣ限制，超抗原不受ＭＨＣ限制；普通抗　

原主要激活ＣＩＭ　Ｔ细胞，超抗原同等激活ＣＩＭ　Ｔ和ＣＤ８　Ｔ　

细胞。细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）属Ｔ细胞的一个亚群，能　

特异性杀伤肿瘤细胞，它的激活通常受ＭＨＣ限制。　

本实验结果表明，ＴＩＬ对ｔｔ２２细胞的杀伤活性高于脾淋巴　

细胞对ｔｔ２２细胞的杀伤活性，其原因可能是ＴＩＬ原来处于肿　

瘤微环境中，已获得ｔｔ２２细胞抗原刺激，当其被提取到体外后　

脱离了肿瘤中的免疫抑制环境并且经使用ｒｍＩＬ－２培养扩增　

后，使其具有了较强的针对ｔｔ２２细胞的特异性杀伤活性。应　

用不同方式激活的ＴＩＬ对ｔｔ２２细胞的杀伤活性均高于各自对　

应方式激活脾淋巴细胞对Ｈ２２细胞杀伤活性，差异有统计学　

意义（Ｐ＜０．０１），原因可能是在ＴＩＬ杀伤活性强于脾淋巴细胞　

基础上，各自增加了已致敏ＤＣ和（或）ＳＥＡ激活后，受激活的　

ＴＩＬ和脾淋巴细胞的杀伤活性均得到了一定程度增强所致。　

本实验结果更表明，ＳＥＡ激活的ＴＩＬ对ｔｔ２２细胞的杀伤　

活性高于ＴＩＬ对ｔｔ２２细胞的杀伤活性，其原因可能除了前面　

对ＴＩＬ的分析内容外，还有以下两点原因　：（１）超抗原依赖　

细胞介导的细胞毒作用（ｓｕｐｅｒａｎｔｉｇｅｎ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｃｅｌ１．ｍｅｄｉａｔｅｄ　

ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ，ＳＤＣＣ），其作用迅速，在６　ｈ内即可非特异激活　

ＣＩＭ　Ｔ和ＣＤ８　ＣＴＬ细胞，然后杀伤肿瘤细胞。（２）细胞因子　

作用，ＳＥＡ激活的ＣＩＭ　Ｔ细胞能分泌如ＴＮＦ—ｄ、ＩＦＮ．＾ｙ、ＩＬ一１２　

等杀伤肿瘤细胞，所分泌的细胞因子不但上调肿瘤细胞表面　

ＭＨＣ表达、而且反馈刺激ＴＩＬ细胞产生更多细胞因子。在本　

实验中，已致敏ＤＣ激活的ＴＩＬ对Ｈ２２细胞的杀伤活性高于　

ＳＥＡ激活的ＴＩＬ对ｔｔ２２细胞的杀伤活性．主要原因可能是ＤＣ　

通过高效特异的细胞毒起作用而ＳＥＡ通过非特异性细胞毒起　

作用所致。另外，还可能与ＤＣ具有以下重要功能有关：（１）　

未成熟ＤＣ摄取抗原经内处理后结合成肽．ＭＨＣ分子复合物，　

提呈到ＤＣ表面，为激活Ｔ淋巴细胞提供必需的第一信号；ＤＣ　

高水平表达刺激分子如Ｂ７１／ＣＤ８０以及黏附分子如ＩＣＡＭ１／　

ＣＤ５４等，为激活Ｔ细胞提供第二信号，与ＴＣＲ接受的第一信　

号共同作用下，强烈刺激ＣＩＭ　Ｔ细胞活化，增强ＣＴＬ功　

能…　；（２）合成细胞因子如ＩＬ－１２、ＴＮＦ．ｄ、ＩＬ．１等，并可分泌一　

ＩＬ．１、ＴＮＦ一＾ｙ等细胞因子刺激ＤＣ成熟而间接活化ＤＣ。ＳＥＡ不　

但刺激ＣＤ８　Ｔ细胞亚群，而且刺激其他带有ＭＨＣ．ＩＩ的效应　

细胞如ＣＩＭ　Ｔ细胞，此时ＤＣ在ＳＥＡ所致Ｔ细胞活化、克隆扩　

增中起重要作用。在ＳＥＡ介导下Ｔ细胞与ＤＣ可相互激活，　

并且在ＳＥＡ和ＤＣ共同作用下可逆转肿瘤状态下的Ｔｈｌ向　

Ｔｈ２漂移的免疫抑制状态　，从而导致ＣＩＭ　Ｔ细胞（尤其　

Ｔｈｌ细胞）既加强ＡＰＣ的抗原提呈能力，又能改变某些肿瘤细　

胞存在的能够激活ＣＤ８　Ｔ细胞的高免疫源性多肽的无能状　

态，从而高效地产生ＣＴＬ反应。总之，已致敏的ＤＣ联合ＳＥＡ　

能起到协同作用，并能产生最有效的激活ＴＩＬ对Ｈ２２细胞的　

杀伤活性。　

综上所述，用Ｈ２２细胞全细胞性抗原致敏的ＤＣ联合ＳＥＡ　

能显著激活ＴＩＬ产生高效的对ｔｔ２２细胞的杀伤活性，均高于　

各对照组的效应细胞对ｔｔ２２细胞的杀伤活性。该结果有望为　

肝癌过继免疫研究提供强有力的理论依据，并有望为寻找一　

种新的有效的治疗肝癌的方法打下坚实基础。　

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ｎｅｏｐｌａｓｉａ：ｃｏｍｐａｒｉｏｎ　ｗｉｓｔｈ　ｓｐｏｒａｄｉｃ　ｃｏｌｏｒｅｃｔｌａ　ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｊ　Ｐａｔｈｏｌ，　

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（收稿日期：２００７—１０—３１惨回日期．２００７—１２—２４）　

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便携式睡眠初筛监测仪的临床应用评价▲　

吴燕葵刘建红　韦彩周　雷志坚　梁碧芳　

（广西壮族自治区人民医院、广西睡眠呼吸疾病中心，南宁市５３００２１）　

【摘要】　目的评价Ｅｍｂｌｅｔｔａ睡眠初筛监测仪对阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（ＯＳＡＨＳ）的诊断价值，为临床寻找方　

便、简易、准确、成本低的诊断方法提供参考。方法ｌ６例打鼾患者，用Ｅｍｂｌａ．Ｍｏｎｅｔ　１９多导仪行整夜多导睡眠图（ＰＳＧ）检查及　

用Ｅｍｂｌｅｔｔａ初筛仪行整夜初筛监测，比较两法的监测数据，包括睡眠呼吸紊乱指数（ＡＨＩ）、最低血氧饱和度、平均血氧饱和度。　

并以ＰＳＧ—ＡＨＩ为诊断ＯＳＡＨＳ的金标准，取同一患者Ｅｍｂｌｅｔｔａ．ＡＨ１绘制受试者工作特征曲线（ＲＯＣ曲线），获得Ｅｍｂｌｅｔｔａ—ＡＨＩ的　

最佳诊断点。结果Ｅｍｂｌｅｔｔａ—ＡＨＩ与金标准ＰＳＧ—ＡＨＩ的结果有较好的直线相关关系（ｒ＝０．９６１，尸＝０．０００）。Ｅｍｂｌｅｔｔａ一平均血氧　

饱和度与金标准ＰＳＧ平均血氧饱和度的结果有较好的直线相关关系（ｒ＝２０．８５３，Ｐ＝０．０００）。以ＰＳＧ　ＡＨＩ＞－－５作为诊断ＯＳＡＨＳ　

的金标准，绘制ＲＯＣ曲线，得出的Ｅｍｂｌｅｔｔａ—ＡＨＩ对ＯＳＡＨＳ的最佳诊断值为Ｅｍｂｌｅｔｔａ—ＡＨＩｔ＞５．７５。对该诊断点作）（　检验，其灵敏　

度为１００％，特异度为１００％。结论Ｅｍｂｌｅｔｔａ监测仪对ＯＳＡＨＳ的诊断准确性较高，临床应用价值较大。　

【关键词】　阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征；睡眠初筛仪；诊断试验；ＲＯＣ曲线　

【中图分类号】　Ｒ　５６　【文献标识码】　Ａ　【文章编号】０２５３－４３０４（２００８）０２－０１６６－０３　

Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｏｒｔａｂｌｅ　ｓｌｅｅｐ　ｍｏｎｉｔｏｒ　ｉｎ　ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　ｏｆ　ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ　ｓｌｅｅｐ　ａｐｎｅａ－ｈｙｐｏｐｎｅａ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ　

Ｉｖｕ　Ｙａｈ—ｋｕｉ，ＬＩＵ　Ｊｉａｎ一／ｔＯｎｇ，ＷＥＩ　Ｃａｉ一：＾ｏ“，ＬＥＩ　Ｚｈｉ－ｊｉａｎ，ＨＡＮＧ　Ｂｉ扣ｎｇ　

（Ｓｌｅｅｐ　Ｄｉｓｏｒｄｅｒｅｄ　ａｎｄ　Ｂｒｅａｔｈｉｎｇ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｏｆＧｕａｎｇｘｉ。Ｐｅｏｐｌｅ＂ｓ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆＧｕａｎｇｘｉ　Ｚｈｕａｎｇ　Ａｕｔｏｎｏｍｏｕｓ　Ｒｅｇｉｏｎ，Ｎａｎｎｉｎｇ　５３００２１，Ｃｈｉｎａ）　

【Ａｂｓｔｒａｃｔ】　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｅｖａｌｕａｔｅ　ｔｈｅ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｖａｌｕｅ　ｏｆ　Ｅｍｂｌｅｔｔａ　ｐｏｒｔａｂｌｅ　ｓｌｅｅｐ　ｍｏｎｉｔｏｒ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　ｏｆ　ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ　ｓｌｅｐ　

ａｐｎｅａ—ｈｙｐｏｐｎｅａ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ（ＯＳＡＨＳ）ａｎｄ　ｄｅｖｅｌｏｐ　ａ　ｖａｌｉｄ，ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔ　ａｎｄ　ｒｅｌｉｂａｌｅ　ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｎ　ＯＳＡＨＳ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ　ａｐｎｅａ　ａｎｄ　

ｈｙｐｏｐｎｅａ　ｉｎｄｅｘ（ＡＨＩ），ｔｈｅ　ｌｏｗｅｓｔ　ａｒｔｅｉｒｌａ　ｏｘｙｇｅｎ　ｓａｔｕｒａｔｉｏｎ（ＳａＯ２）ａｎｄ　ｔｈｅ　ｎｌｅａｎ　ＳａＯ２　ｏｆ　１６　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｈｔ　ｓｎｏｒｉｎｇ　ｗｅｒｅ　ｍｅａｓｕｒｅｄ　ｗｉｔｌｌ　

Ｅｍｂｌａ—ｍｏｎｅｔ　ｐｏｌｙｓｏｍｎｏｇｒａｐｈ（ＰＳＧ）ａｎｄ　Ｅｍｂｌｅｔｔａ　ｏｐｒｔｂａｌｅ　ｓｌｅｐ　ｍｏｎｉｔｏｒ　ｒｅｓｐｅｃｉｔｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ｉｄａｇｎｏｓｔｉｃｓ　ｃｉｒｔｅｒｉｏｎ　ｆｏｒ　ＯＳＡＨＳ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ａｓ　

ＡＨＩｔ＞５　ｍｅａｓｕｒｅｄ　ｂｙ　Ｅｍｂｌａ—ｏｍｎｅｔ　ｏｐｌｙｓｏｍｎｏｇｒａｐｈ．Ｔｈｅ　ｒｅｃｅｉｖｅｒ　ｏｐｅｒａｔｉｇｎ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ　ｃｕｒｖｅ（ＲＯＣ）Ｗａｓ　ｒｄａｗｏｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ＡＨＩ　ｍｅａｓｕｒｅｄ　

ｉｗｔｈ　ＰＳＧ　ａｎｄ　Ｅｍｂｌｅｔｔａ　ｐｏｒｔｂａｌｅ　ｓｌｅｐ　ｏｍｎｉｔｏｒ　ｗａｓ　ｇｏｏｄ—ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ．Ｓｏ　ｄｉｄ　ｔｈｅ　ｎｌｅａｎ　ＳａＯ２．Ｔｈｅ　ｉｄａｇｎｏｓｔｉｃ　ｓｅｎｓｉｉｔｖｉｔｙ，ｓｐｅｃｉｉｆｃｉｙｔ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｉｄａｇｎｏｓｔｉｃ　

ｖａｌｕｅ　ｏｆ　ＡＨ１　ｗｅｒｅ　１００％，１００％ａｎｄ　５．７５，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｅｍｂｌｅｔｔａ　ｐｏｒｔｂａｌｅ　ｓｌｅｐ　ｍｏｎｉｔｏｒ　ｓｈｏｕｌｄ　ｂｅ　ａ　ｖａｌｉｄ，ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔ　ａｎｄ　ｒｅｌｉａｂｌｅ　

ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ　ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ　ｆｏｒ　ＯＳＡＨＳ．　

【Ｋｅｙ　Ｗｏｒｄｓ】　Ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ　ｓｌｅｅｐ　ａｐｎｅａ—ｈｙｐｏｐｎｅａ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ；Ｐｏｒｔａｂｌｅ　ｓｌｅｅｐ　ｍｏｎｉｔｏｒ；Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ　ｔｅｓｔ；ＲＯＣ　Ｇｕｌ￣ｅ　

阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ　ｓｌｅｐ　

生活质量，甚至危及患者生命。多导睡眠图（ｐｏｌｙｓｏｍｎｏｇｒａｍ，　

ａｐｎｅａ—ｈｙｐｏｐｎｅａ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＯＳＡＨＳ）是近５０年逐步认识的一种　

ＰＳＧ）是目前诊断ＯＳＡＨＳ的标准方法，但由于其程序较繁杂、　

常见睡眠疾病，据文献报告３０～６０岁成年人发病率为２％～　

传感电极多、检查价格昂贵，难以在基层普及。便携式或无电　

６％　。近年研究显示，至少有８２％的男性和９３％的女性患　

极睡眠呼吸监测仪将是今后发展的方向，现探讨便携式　

者未被正确诊断，实际患病率可能高达７％～１３％Ｌ２］。随着对　

Ｅｍｂｌｅｔｔａ睡眠初筛监测仪对ＯＳＡＨＳ的诊断价值及意义。　

ＯＳＡＨＳ研究的深入。发现其并发症越来越多。严重影响患者的　

▲广西自然科学基金资助课题（桂科基０２３６０４４）