2024年6月1日发(作者：向飞兰)
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重组蛋白表达技术现已经广泛应用于生物学各个具体领域。特别是体内功能研究和蛋
白质的大规模生产都需要应用重组蛋白表达载体。
美国GeneCopoeia的蛋白表达载体按照表达宿主的不同新推出3类，分别为表达宿
主为大肠杆菌，哺乳动物细胞的，以及慢病毒载体，宿主可以为哺乳动物细胞和原代细胞。
除了必要的复制和筛选的元件，协助表达和翻译的元件外，本文将各类载体分别按照
功能标签的不同确定种类并将个标签的功能初步介绍如下：
His6：
His6是指六个组氨酸残基组成的融合标签，可插入在目的蛋白的C末端或N末端。
当某一个标签的使用，一是能构成表位利于纯化和检测；二是构成独特的结构特征（结合
配体）利于纯化。组氨酸残基侧链与固态的镍有强烈的吸引力，可用于固定化金属螯合层
析(IMAC)，对重组蛋白进行分离纯化。
使用His-tag有下面优点：
1.标签的分子量小，只有~0.84KD，而GST和蛋白A分别为~26KD和~30KD，一般
不影响目标蛋白的功能；
标签融合蛋白可以在非离子型表面活性剂存在的条件下或变性条件下纯化，前者
在纯化疏水性强的蛋白得到应用，后者在纯化包涵体蛋白时特别有用，用高浓度的变性剂
溶解后通过金属螯和亲和层析去除杂蛋白，使复性不受其它蛋白的干扰，或进行金属螯和
亲和层析复性；
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标签融合蛋白也被用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA相互作用研究；
标签免疫原性相对较低，可将纯化的蛋白直接注射动物进行免疫制备抗体；
5.可应用于多种表达系统，纯化的条件温和；
6.可以和其它的亲和标签一起构建双亲和标签。
Flag:
Flag标签蛋白为编码8个氨基酸的亲水性多肽（DYKDDDDK），同时载体中构建的
Kozak序列使得带有FLAG的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。
FLAG作为标签蛋白，其融合表达目的蛋白后具有以下优点：
作为融合表达标签，其通常不会与目的蛋白相互作用并且通常不会影响目的蛋
白的功能、性质，这样就有利用研究人员对融合蛋白进行下游研究。
2.融合FLAG的目的蛋白，可以直接通过FLAG进行亲和层析，此层析为非变性纯化，
可以纯化有活性的融合蛋白，并且纯化效率高。
作为标签蛋白，其可以被抗FLAG的抗体识别，这样就方便通过Western Blot、
ELISA等方法对含有FLAG的融合蛋白进行检测、鉴定。
4.融合在N端的FLAG，其可以被肠激酶切除（DDDK），从而得到特异的目的蛋白。
因此现FLAG标签已广泛的应用于蛋白表达、纯化、鉴定、功能研究及其蛋白相互作用等
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2024年6月1日发(作者：向飞兰)
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重组蛋白表达技术现已经广泛应用于生物学各个具体领域。特别是体内功能研究和蛋
白质的大规模生产都需要应用重组蛋白表达载体。
美国GeneCopoeia的蛋白表达载体按照表达宿主的不同新推出3类，分别为表达宿
主为大肠杆菌，哺乳动物细胞的，以及慢病毒载体，宿主可以为哺乳动物细胞和原代细胞。
除了必要的复制和筛选的元件，协助表达和翻译的元件外，本文将各类载体分别按照
功能标签的不同确定种类并将个标签的功能初步介绍如下：
His6：
His6是指六个组氨酸残基组成的融合标签，可插入在目的蛋白的C末端或N末端。
当某一个标签的使用，一是能构成表位利于纯化和检测；二是构成独特的结构特征（结合
配体）利于纯化。组氨酸残基侧链与固态的镍有强烈的吸引力，可用于固定化金属螯合层
析(IMAC)，对重组蛋白进行分离纯化。
使用His-tag有下面优点：
1.标签的分子量小，只有~0.84KD，而GST和蛋白A分别为~26KD和~30KD，一般
不影响目标蛋白的功能；
标签融合蛋白可以在非离子型表面活性剂存在的条件下或变性条件下纯化，前者
在纯化疏水性强的蛋白得到应用，后者在纯化包涵体蛋白时特别有用，用高浓度的变性剂
溶解后通过金属螯和亲和层析去除杂蛋白，使复性不受其它蛋白的干扰，或进行金属螯和
亲和层析复性；
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标签融合蛋白也被用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA相互作用研究；
标签免疫原性相对较低，可将纯化的蛋白直接注射动物进行免疫制备抗体；
5.可应用于多种表达系统，纯化的条件温和；
6.可以和其它的亲和标签一起构建双亲和标签。
Flag:
Flag标签蛋白为编码8个氨基酸的亲水性多肽（DYKDDDDK），同时载体中构建的
Kozak序列使得带有FLAG的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。
FLAG作为标签蛋白，其融合表达目的蛋白后具有以下优点：
作为融合表达标签，其通常不会与目的蛋白相互作用并且通常不会影响目的蛋
白的功能、性质，这样就有利用研究人员对融合蛋白进行下游研究。
2.融合FLAG的目的蛋白，可以直接通过FLAG进行亲和层析，此层析为非变性纯化，
可以纯化有活性的融合蛋白，并且纯化效率高。
作为标签蛋白，其可以被抗FLAG的抗体识别，这样就方便通过Western Blot、
ELISA等方法对含有FLAG的融合蛋白进行检测、鉴定。
4.融合在N端的FLAG，其可以被肠激酶切除（DDDK），从而得到特异的目的蛋白。
因此现FLAG标签已广泛的应用于蛋白表达、纯化、鉴定、功能研究及其蛋白相互作用等
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