2024年4月6日发(作者：本华)
puromycin 使用
使用步骤：（哺乳动物细胞筛选）
?嘌呤霉素杀灭曲线的确定（shRNA稳定转染细胞株，仅作参考）
为了筛选到稳定表达待研究shRNA的细胞株，确定杀死未转染/转导细胞的最低浓
度嘌呤霉素至关重要。所以初次做实验的客户一定要建立适合自己体系的杀死曲线（kill
curve） 。
（1）24孔板内以5~8 x 104 cells/孔的密度铺板，铺足够量的孔以进行后续的梯度
实验。细胞孵育过夜； （2）准备筛选培养基-含不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基（如0-
15μg/mL，至少5个梯度）； （3）细胞孵育过夜后加入筛选培养基，孵育细胞； （4）
约2-3天更换新鲜的筛选培养基；
（5）每日监测细胞观察存活细胞比例。嘌呤霉素的最佳作用时间一般在1-4天之间。
（6）最小的抗生素使用浓度就是指从抗生素筛选开始1-4天内杀死所用细胞的最低筛选
浓度。 ?嘌呤霉素筛选稳定转染细胞
（1）day 0：24孔板内以5~8 x 104 cells/孔的密度铺板，孵育过夜；
（2）制备筛选培养基：含有最佳筛选浓度嘌呤霉素（由杀灭曲线确定）的新鲜培养
基；
（3）day 1：筛选第一天，去除旧的培养基，加入一定量MOI的病毒颗粒；（加入
无血清培养基的总量必须充分覆盖住细胞。）
（4）病毒转导后约6-8h，再添加1ml完全培养基（血清和双抗，如果已经使用双
抗。）到细胞内，然后孵育过夜；
（5）病毒转导后48h，使用嘌呤霉素筛选培养基替换旧的完全培养基。孵育。 （6）
约每2-3天替换新鲜配制的筛选培养基；
（7）每天检测细胞并观察活细胞生长比例，以及turboGFP表达的水平及所占比例。
在某一个时间点几乎所用存活细胞都可以表达TurboGFP。嘌呤霉素最佳的作用时间在3-
10天之间。
注：病毒的MOI越高，每个细胞含有的shRNA拷贝和嘌呤霉素耐性基因越多。在
做嘌呤霉素筛选时，需记住越高MOI,含越多pac拷贝的细胞能耐受更高的嘌呤霉素浓度。
调整嘌呤霉素的浓度去筛选预定量的转导细胞，但是嘌呤霉素的量不能低于杀死曲线建立
的最低浓度。 储存方法和稳定性：
嘌呤霉素稳定性高，可以常温运输，收到产品后4℃存放；
嘌呤霉素在室温条件下可存放3个月，4℃条件下保质期一年。为了达到最理想的稳
定状态和最长的保质期，最好存放于-20°C，保质期为2年。
Puromycin（嘌呤霉素）――pac基因筛选抗生素
2021-11-26 17:21 来源： 深圳欣博盛生物科技有限公司 点击次数：170 关键词：
Puromycin invivogen
Puromycin是由Streptomyces alboniger（白黑链霉菌）产生的一种肽基核苷抗生
素，可抑制原核细胞和真核细胞的肽基转移。Puromycin可抑制革兰氏阳性菌和多种动
物细胞和昆虫细胞的增殖，但是真菌和革兰氏阴性菌对Puromycin具有抗性，在一些特
殊的情况下，Puromycin也可用于大肠杆菌。目前，Puromycin最重要的应用是用于选
择携带pac抗性基因的转染细胞。
Blasticidin化学特性 CAS号：58-58-2
分子式：C22H29N7O5, 2HCl 分子量：471.51 pKa值：6.8 和7.2 分子结构：
推荐使用浓度 大肠杆菌
大肠杆菌对Puromycin不敏感。 哺乳动物细胞
细胞系 种属 组织 培养基 Puromycin(ug/ml) Hela human uterus DMEM 3
293 human kidney DMEM 3
B16 mouse melanoma RPMI 1-3
PC1.0 hamster adenocarcinoma RPMI 10
质量控制： 纯度>95%(HPLC)
经细菌和哺乳动物细胞系鉴定活性
保存
4°C或-20°C保存2年，避免反复冻融。 产品信息: 产品名称 Puromycin
Puromycin
产品编号 规格 品牌 ant-pr-1 100 mg (10 x 1 ml) ant-pr-5 500 mg (50 x 1 ml)
报价 折扣
invivogen ￥1,582 请询 invivogen ￥5,292 请询
文献引用
?2021 - Mol. Endocrinol., 25: 1416 - 1430
The extreme C-terminal region of Gαs differentially couples to theluteinizing
hormone and beta2-adrenergic receptors. DeMars G, Fanelli F, Puett D
?2021 - J. Cell Sci., 124: 2349 - 2356
Real-time monitoring of redox changes in the mammalian endoplasmic
reticulum. van Lith M, Tiwari S, Pediani J, Milligan G, Bulleid NJ
?2021 - J. Cell Biol., 193: 307 - 318
Defective nucleotide excision repair with normal centrosome structuresand
functions in the absence of all vertebrate centrins.
Dantas TJ, Wang Y, Lalor P, Dockery P, Morrison CG
感谢您的阅读，祝您生活愉快。
2024年4月6日发(作者：本华)
puromycin 使用
使用步骤：（哺乳动物细胞筛选）
?嘌呤霉素杀灭曲线的确定（shRNA稳定转染细胞株，仅作参考）
为了筛选到稳定表达待研究shRNA的细胞株，确定杀死未转染/转导细胞的最低浓
度嘌呤霉素至关重要。所以初次做实验的客户一定要建立适合自己体系的杀死曲线（kill
curve） 。
（1）24孔板内以5~8 x 104 cells/孔的密度铺板，铺足够量的孔以进行后续的梯度
实验。细胞孵育过夜； （2）准备筛选培养基-含不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基（如0-
15μg/mL，至少5个梯度）； （3）细胞孵育过夜后加入筛选培养基，孵育细胞； （4）
约2-3天更换新鲜的筛选培养基；
（5）每日监测细胞观察存活细胞比例。嘌呤霉素的最佳作用时间一般在1-4天之间。
（6）最小的抗生素使用浓度就是指从抗生素筛选开始1-4天内杀死所用细胞的最低筛选
浓度。 ?嘌呤霉素筛选稳定转染细胞
（1）day 0：24孔板内以5~8 x 104 cells/孔的密度铺板，孵育过夜；
（2）制备筛选培养基：含有最佳筛选浓度嘌呤霉素（由杀灭曲线确定）的新鲜培养
基；
（3）day 1：筛选第一天，去除旧的培养基，加入一定量MOI的病毒颗粒；（加入
无血清培养基的总量必须充分覆盖住细胞。）
（4）病毒转导后约6-8h，再添加1ml完全培养基（血清和双抗，如果已经使用双
抗。）到细胞内，然后孵育过夜；
（5）病毒转导后48h，使用嘌呤霉素筛选培养基替换旧的完全培养基。孵育。 （6）
约每2-3天替换新鲜配制的筛选培养基；
（7）每天检测细胞并观察活细胞生长比例，以及turboGFP表达的水平及所占比例。
在某一个时间点几乎所用存活细胞都可以表达TurboGFP。嘌呤霉素最佳的作用时间在3-
10天之间。
注：病毒的MOI越高，每个细胞含有的shRNA拷贝和嘌呤霉素耐性基因越多。在
做嘌呤霉素筛选时，需记住越高MOI,含越多pac拷贝的细胞能耐受更高的嘌呤霉素浓度。
调整嘌呤霉素的浓度去筛选预定量的转导细胞，但是嘌呤霉素的量不能低于杀死曲线建立
的最低浓度。 储存方法和稳定性：
嘌呤霉素稳定性高，可以常温运输，收到产品后4℃存放；
嘌呤霉素在室温条件下可存放3个月，4℃条件下保质期一年。为了达到最理想的稳
定状态和最长的保质期，最好存放于-20°C，保质期为2年。
Puromycin（嘌呤霉素）――pac基因筛选抗生素
2021-11-26 17:21 来源： 深圳欣博盛生物科技有限公司 点击次数：170 关键词：
Puromycin invivogen
Puromycin是由Streptomyces alboniger（白黑链霉菌）产生的一种肽基核苷抗生
素，可抑制原核细胞和真核细胞的肽基转移。Puromycin可抑制革兰氏阳性菌和多种动
物细胞和昆虫细胞的增殖，但是真菌和革兰氏阴性菌对Puromycin具有抗性，在一些特
殊的情况下，Puromycin也可用于大肠杆菌。目前，Puromycin最重要的应用是用于选
择携带pac抗性基因的转染细胞。
Blasticidin化学特性 CAS号：58-58-2
分子式：C22H29N7O5, 2HCl 分子量：471.51 pKa值：6.8 和7.2 分子结构：
推荐使用浓度 大肠杆菌
大肠杆菌对Puromycin不敏感。 哺乳动物细胞
细胞系 种属 组织 培养基 Puromycin(ug/ml) Hela human uterus DMEM 3
293 human kidney DMEM 3
B16 mouse melanoma RPMI 1-3
PC1.0 hamster adenocarcinoma RPMI 10
质量控制： 纯度>95%(HPLC)
经细菌和哺乳动物细胞系鉴定活性
保存
4°C或-20°C保存2年，避免反复冻融。 产品信息: 产品名称 Puromycin
Puromycin
产品编号 规格 品牌 ant-pr-1 100 mg (10 x 1 ml) ant-pr-5 500 mg (50 x 1 ml)
报价 折扣
invivogen ￥1,582 请询 invivogen ￥5,292 请询
文献引用
?2021 - Mol. Endocrinol., 25: 1416 - 1430
The extreme C-terminal region of Gαs differentially couples to theluteinizing
hormone and beta2-adrenergic receptors. DeMars G, Fanelli F, Puett D
?2021 - J. Cell Sci., 124: 2349 - 2356
Real-time monitoring of redox changes in the mammalian endoplasmic
reticulum. van Lith M, Tiwari S, Pediani J, Milligan G, Bulleid NJ
?2021 - J. Cell Biol., 193: 307 - 318
Defective nucleotide excision repair with normal centrosome structuresand
functions in the absence of all vertebrate centrins.
Dantas TJ, Wang Y, Lalor P, Dockery P, Morrison CG
感谢您的阅读，祝您生活愉快。