2024年4月8日发(作者：京初珍)
分离培养及鉴定骨髓间充质干细胞的方法
探析
ﻭﻭﻭ
目前,骨髓间充质干细胞在动物实验和临床应用上取得了巨
大的成果，下面是搜集整理的一篇探究分离培养及鉴定骨髓间
充质干细胞方法的，供大家阅读参考。ﻭﻭﻭ 骨髓间充质干细胞
(ＢMSCs)也被称为间质祖细胞，由于其巨大的增殖和多向分化
潜能,被认为是再生医学、基因治疗和细胞治疗的理想种子来
源，已被广泛进行研究．目前，ＢMＳCs在动物实验和临床应
用上取得了巨大的成果，在骨、软骨、肌腱、神经胶质修复、
心脏疾病、心肌梗塞、肝脏损伤等方面取得了重大突破,并且可
避免胚胎干细胞和异基因干细胞治疗所涉及的道德和免疫排斥
问题，有利于细胞移植。但是骨髓中的BＭＳＣｓ含量极少，
约占骨髓全细胞的０。001％～０.０1０%;因此，需要在体外分
离纯化、培养扩增来满足临床应用和实验研究.研究表明，不同
分离方法和首次换液方式对ＢMSCs的增殖培养有很大的影
响。本试验通过观察2种不同分离方法和不同首次换液时间对
兔BMSＣs生物活性的影响，旨在建立一种有效的分离培养及
鉴定ＢMSCs的方法,以便获得大量、、高活性、培养周期短的
ＢMSＣs，为下一步研究和临床实验提供基础。ﻭﻭ
１材料与方法
ﻭ
1。１实验动物1月龄雄性新西兰大耳白兔１只,由河南
省实验动物中心提供。
ﻭ １.２主要试剂和仪器胎牛血清（四季青)；DMEM-F12(Gi
ｂco);胰蛋白酶(拜尔迪生物）;DＭＳＯ(Gibco）;红细胞裂解液
（赛驰生物技术有限);生物素标记山羊抗兔ＩgG、HＲＰ标记链
霉亲和素、ＤAＢ显色试剂盒、改良型苏木素（华肽先锋）;兔
抗兔CD34、CＤ44、CD99抗体（博奥森）；封闭山羊血清(博
奥森）。ﻭﻭ
HＦ151ＵV型CO2培养箱(HｅaｌＦｏｒcｅ)；倒置显微
镜（Ｌeica）；80０型离心机、8５－2恒温磁力搅拌器：金坛
市大地自动化仪器厂；数码相机：佳能ＩXUS980IＳ；电子天
平：METＴLERTOLEDOＡL104;超净工作台：AIRTECH；
FX101-2型电热鼓风干燥箱:树立仪器仪表有限；pH计:雷磁仪
器厂.ﻭﻭ
1.3BMSCs的提取用陆眠宁（846)将1月龄新西兰大耳白
兔，腿部去毛消毒,无菌条件下分离股骨、胫骨,剔除脂肪和肌
肉，PBS液反复冲洗，剪断两侧干骺端，尽量多保留干骺端,Ｄ
MＥM—F12培养液反复冲洗骨髓腔于A、B两个10ｍL的离心
管内，直至骨髓腔发白，100０r／mｉn离心５min，弃上清.
1。4全骨髓贴壁法A管用PBS重悬细胞,10０0ｒ/min离
心5min洗涤2次，弃上清.吸取3mL含10%FBＳ的DMEM－
F12(1∶100双抗）培养液重悬细胞,接种至3个25cm２培养
瓶，补足培养液至5mL，轻柔吹打均匀。置于３７℃、５％
CO2条件下培养。以后每3ｄ换液１次，待细胞生长融合至
80％时传代培养。先弃去旧培养液,ＰBＳ液浸洗。0。２5％胰
2024年4月8日发(作者：京初珍)
分离培养及鉴定骨髓间充质干细胞的方法
探析
ﻭﻭﻭ
目前,骨髓间充质干细胞在动物实验和临床应用上取得了巨
大的成果，下面是搜集整理的一篇探究分离培养及鉴定骨髓间
充质干细胞方法的，供大家阅读参考。ﻭﻭﻭ 骨髓间充质干细胞
(ＢMSCs)也被称为间质祖细胞，由于其巨大的增殖和多向分化
潜能,被认为是再生医学、基因治疗和细胞治疗的理想种子来
源，已被广泛进行研究．目前，ＢMＳCs在动物实验和临床应
用上取得了巨大的成果，在骨、软骨、肌腱、神经胶质修复、
心脏疾病、心肌梗塞、肝脏损伤等方面取得了重大突破,并且可
避免胚胎干细胞和异基因干细胞治疗所涉及的道德和免疫排斥
问题，有利于细胞移植。但是骨髓中的BＭＳＣｓ含量极少，
约占骨髓全细胞的０。001％～０.０1０%;因此，需要在体外分
离纯化、培养扩增来满足临床应用和实验研究.研究表明，不同
分离方法和首次换液方式对ＢMSCs的增殖培养有很大的影
响。本试验通过观察2种不同分离方法和不同首次换液时间对
兔BMSＣs生物活性的影响，旨在建立一种有效的分离培养及
鉴定ＢMSCs的方法,以便获得大量、、高活性、培养周期短的
ＢMSＣs，为下一步研究和临床实验提供基础。ﻭﻭ
１材料与方法
ﻭ
1。１实验动物1月龄雄性新西兰大耳白兔１只,由河南
省实验动物中心提供。
ﻭ １.２主要试剂和仪器胎牛血清（四季青)；DMEM-F12(Gi
ｂco);胰蛋白酶(拜尔迪生物）;DＭＳＯ(Gibco）;红细胞裂解液
（赛驰生物技术有限);生物素标记山羊抗兔ＩgG、HＲＰ标记链
霉亲和素、ＤAＢ显色试剂盒、改良型苏木素（华肽先锋）;兔
抗兔CD34、CＤ44、CD99抗体（博奥森）；封闭山羊血清(博
奥森）。ﻭﻭ
HＦ151ＵV型CO2培养箱(HｅaｌＦｏｒcｅ)；倒置显微
镜（Ｌeica）；80０型离心机、8５－2恒温磁力搅拌器：金坛
市大地自动化仪器厂；数码相机：佳能ＩXUS980IＳ；电子天
平：METＴLERTOLEDOＡL104;超净工作台：AIRTECH；
FX101-2型电热鼓风干燥箱:树立仪器仪表有限；pH计:雷磁仪
器厂.ﻭﻭ
1.3BMSCs的提取用陆眠宁（846)将1月龄新西兰大耳白
兔，腿部去毛消毒,无菌条件下分离股骨、胫骨,剔除脂肪和肌
肉，PBS液反复冲洗，剪断两侧干骺端，尽量多保留干骺端,Ｄ
MＥM—F12培养液反复冲洗骨髓腔于A、B两个10ｍL的离心
管内，直至骨髓腔发白，100０r／mｉn离心５min，弃上清.
1。4全骨髓贴壁法A管用PBS重悬细胞,10０0ｒ/min离
心5min洗涤2次，弃上清.吸取3mL含10%FBＳ的DMEM－
F12(1∶100双抗）培养液重悬细胞,接种至3个25cm２培养
瓶，补足培养液至5mL，轻柔吹打均匀。置于３７℃、５％
CO2条件下培养。以后每3ｄ换液１次，待细胞生长融合至
80％时传代培养。先弃去旧培养液,ＰBＳ液浸洗。0。２5％胰