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WB相关试剂配制

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2024年5月1日发(作者:孛听枫)

电泳缓冲液(10x):

Tris-Hcl:30.2g

Gly:187.7g

SDS:10g

定容至1L,稀释成1x:100ml电泳缓冲液(10x)+900ml单蒸水

电转缓冲液1x:

Tris-Hcl:3.03g

Gly:14.4

dH2O:900ml

100ml:甲醇,定容至1L

TBS(10x,1L)

Tris-Hcl:12.1g

Nacl:87.7g

调节pH至7.6,用时稀释10倍,加1ml Tween 20,即:TBST=100ml(10x TBS)

+900ml dH2O+1ml Tween 20容量为1L

5x SDS-page蛋白凝胶上样缓冲液(10ml)

1M Tris-Hcl:0.6ml

10% SDS:2ml

甘油:2.5ml

Beta-巯基乙醇:0.5ml

溴酚蓝:0.01g(先溶于4.4ml水中)

ddH2O:4.4ml

Western blot

样品制备以及蛋白质定量

1. 取冰,将4°C离心机提前降温。

2. 将死细胞收集到离心管:孔板内的细胞用PBS洗1-2遍,用适量的胰酶消化,用离

心管内的原培养液将孔板内细胞吹打下来,收集到离心管,室温离心1000rpm,5min。

2024年5月1日发(作者:孛听枫)

电泳缓冲液(10x):

Tris-Hcl:30.2g

Gly:187.7g

SDS:10g

定容至1L,稀释成1x:100ml电泳缓冲液(10x)+900ml单蒸水

电转缓冲液1x:

Tris-Hcl:3.03g

Gly:14.4

dH2O:900ml

100ml:甲醇,定容至1L

TBS(10x,1L)

Tris-Hcl:12.1g

Nacl:87.7g

调节pH至7.6,用时稀释10倍,加1ml Tween 20,即:TBST=100ml(10x TBS)

+900ml dH2O+1ml Tween 20容量为1L

5x SDS-page蛋白凝胶上样缓冲液(10ml)

1M Tris-Hcl:0.6ml

10% SDS:2ml

甘油:2.5ml

Beta-巯基乙醇:0.5ml

溴酚蓝:0.01g(先溶于4.4ml水中)

ddH2O:4.4ml

Western blot

样品制备以及蛋白质定量

1. 取冰,将4°C离心机提前降温。

2. 将死细胞收集到离心管:孔板内的细胞用PBS洗1-2遍,用适量的胰酶消化,用离

心管内的原培养液将孔板内细胞吹打下来,收集到离心管,室温离心1000rpm,5min。

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