2024年6月5日发(作者：尹棠华)

第

47

卷第

5

期

2744

年

5

月

分析测试学报

FENXS

CESHS

XUEBAO

(

Jocoal

of

Ewomeata]

Analysis

)

Vol.

42

No.

I

767-776

doi:

17.

3969/j.

issn.

1704

-4457.

2221.

05.

022

基于低共熔溶剂的分散液液微萃取

/

超高效液相

色谱-串联质谱法测定马肉中非笛体抗炎药

郑书展

*

*

，

任彩霞

，

张春艳

，

王晓敏

，

盛万里

(呼和浩特海关技术中心

，

内蒙古呼和浩特

014020)

摘要

：

采用氯化胆碱和苯酚合成低共熔溶剂

(DES

),

以其为萃取剂建立了分散液液微萃取

(DLLME

)

结合超

高效液相色谱-串联质谱

(UPLC

-

MS/MS

)测定马肉中

4

种非笛体抗炎药的方法

。

优化了提取溶剂

、

萃取

齐

(I

、

分散剂和盐的加入量等条件

，

最佳萃取条件为

：

以氯化胆碱和苯酚(比例为

1

:

2)

合成的低共熔溶剂为

萃取剂

，

马肉样品经

5

mL

含

4

mmoUP

抗坏血酸的

20

mmol/P

醋酸鞍缓冲液(乙酸调至

pH

3.

5

-

提取

，

加入

4

0

g

氯化钠

、

0.

I

mL

萃取剂和

0.

3

mL

分散剂

，

旋涡混合

1

mk

,

离心后取上清液经超高效液相色谱-串联

质谱测定

，

外标法定量

。

结果显示

，

4

种非笛体抗炎药在各自质量浓度范围内呈良好线性关系

，

相关系数

4

5

)

均大于

0.

796,

检岀限为

0.

45

-

2.

4

p

y/kg,

定量下限为

0.

14

-

5.

4

p

y/kg,

平均回收率为

73.

5

%

-

94.

7

%

,

相对标准偏差

(

RSD

)为

(.1

%

-

&1

%

。

该方法操作简单

、

准确高效

、

绿色环保

,

可用于马肉中非％

抗炎

的测定。

关键词

：

低共熔溶剂

；

分散液液微萃取

；

马肉

；

非％体抗炎药

；

超高效液相色谱-串联质谱

中图分类号

：

0657.

7

；

TS2O(.O

文献标识码

：

A

文章编号

：

1004

-4957(202(

)05

-0764

-07

Determination

of

Noc-steoibol

Anti-in/ammatory

Dogs

in

Horse

Meo)

by

Ultra

Higb

Pedormancc

Li

quip

ChomaOyophy

-

Tandem

Mass

SpectromeWy

witb

Deep

Eutectic

Solveal

Based

on

Dispersiva

Liquid

-

Liquid

Micoextroctioc

ZHENG

SPu-zhao

*

,

REN

Caioia

,

ZHANG

C/du-pun

,

WANG

Xiao-mix

,

SHENG

Wan-ti

(

Technical

Center

of

HoCUot

Customs

:

Hodhot

04020,

Chi/o)

Abstrac

：

:

NonomoiPT

anti-inbammatoo

dogs

:

are

one

of

the

most

widWy

used

p/doacwUcaXo

active

compodnds

in

vetednao

medicine.

Dispersive

liquid

一

liquid

micoextractioc

(

DLLME

-

is

a

mini-cxtrachoc

technique

with

merits

of

Uw

cost

,

wOonmwt

fawd/ross

and

high

extraction

eWk

cieacy.

Moreover

,

this

method

is

wsy

to

opeote

and

requires

only

a

shod

operation

time.

In

this

paqer

,

a

deep

eutectic

solveat

(

DES

)

based

on

choline

chUdde

was

used

for

the

Uot

time

as

the

/pt

uid

一

liquid

mic/oxtopOn

solveal

for

eWicienl

and

safe

extraction

of

uoc-steo/al

anti-in/ammatoo

dogs

in

horse

meat.

DES

was

simply

syuthesizW

via

just

mixing

cho/ne

chUdde

and

pheuol

at

oom

temperature.

The

analytes

were

extracted

into

acetate

bu/br

,

and

thea

bach-extracted

to

the

DES

phase

simply

b/

oscilU/oc.

Meanwhile

,

acetocit/U

was

used

as

a

dispersive

solvent

and

the

DES

phase

was

celUcted

b/

ceat/fugaUod.

An

ultra

high

pedo/nadee

liquid

cVromatograqPo

一

tandem

mas

s

spectometo

(

UPLC

一

MS/MS

)

with

liquid

一

liquid

micoextractioc

based

on

the

DES

was

2/pf

/shed

for

the

deOoig/on

of

Ou

non-steroidal

anti

-

in/ammatoo

dogs

in

horse

meat.

A

sedes

of

ant

alytical

factors

such

as

extraction

dgwl,

dispwskg

dgwl

and

bosage

of

sodium

chlodbe

were

optO

mized.

The

optimum

concVtOns

were

as

follows

:

DES

was

popTol

with

cho/ne

chUdde

and

pheuol

at

a

1

：

2

molar

rake

,

while

the

horse

meat

sample

was

extracted

with

5

mL

22

mmoUL

acetate

buffer

(

adjusUng

to

pH

3.

0

with

acetic

acid

)

containing

10

mmoUL

ascorUic

acid

,

and

siibsw/wOy

aPded

4

4

g

sodium

chUdde

,

0.

5

mL

extractant

and

0.

I

mL

dispeoiul,

thea

vadev

extracted

for

1

mix

收稿日期

：

2227

-03

-14

；

修回日期

：

2222

-79

-77

基金项目

：

海关总

署

科研项目

(2219HK141

)

*

通讯作者

：

郑

书展

，

博士

，

高

级

工程师

，

研究方向

：

食品安全检测技术

，

E

-

mail

:

zheagshuzhaq@

105.

com

第

5

期

郑书展等

：

基于低共熔溶剂的分散液液微萃取

/

超高效液相色谱-串联质谱法测定马肉中非笛体抗炎药

761

and

followed

bp

/

coctOfugahoc

,

finallp

detected

bp

UPLC

-

MS/MS.

Results

showed

that

there

/-

isOp

good

/near

relatiopships

for

On

/dDU/iddl

anti-in/ammato/

dma-

in

the

respective

concen

­

tration

rangx-

with

their

cox'elatioc

coeXicients)

S

-

larger

than

0.

996.

The

limits

of

detection

(

LOD)

and

the

/mils

O

qu

—

Uu0o(

LOQ

)

were

in

the

rangx-

O

0.

05

-

2.

0

R

g/kg

and

0.

U

-5.

2

r

—

kg

,

respectUela.

RecoveCes

for

On

noc-stem/al

anti

-

in/ammato/

dma-

at

three

spiPed

levels

ranged

f/m

73.

5%

to

67.

6%

with

relative

standard

deviations

of

1.

1%

-

5.

1%

.

Results

Oidicated

that

the

DES

could

be

used

as

an

altemalx

of

traUitiocal

soWocts

for

dispersive

1/uid

-

/quid

micm/tmction.

The

method

was

simple

,

rapid

,

accurate

and

reXa/lc

,

and

could

be

used for

the

analysis

of

noo-

ste/idal

anti

-

in/ammatory

dmy-

in

dorse

mean

Key

words

:

deep

xOctic

soWoct

；

dispwsDa

liuuid

-

/quid

mioo/tmction

；

dorse

meal

;

noo-

ste/idal

anti

-inCammatory

dma

、

；

ultra

high

peWownanco

/quid

ch/mOocmpUe

-

tandem

mass

spxc-

t/metp

非笛体抗炎药

(NSAIDs)

在抗炎

、

止痛

、

退热和抗凝血等方面疗效显著

，

是目前动物养殖业中使用

最广泛的兽药种类之一⑷

。

常见的非笛体抗炎药有苯基丁氮酮

、

氟尼辛

、

茶丁美酮

、

茶普生

、

托芬那

酸

、

乙酰氨基酚等

。

近年的研究表明这类抗炎药具有明显的毒副作用

，

会引起胃肠道

、

血液

、

肾脏系

统等的不良反应

，

其中较常见的是肠胃溃疡类严重副作用⑵

。

NSAID-

可在动物肌肉

、

牛奶

、

肝脏和脂

肪中积累

，

会通过食物链对消费者健康构成威胁⑶

。

其残留问题已引起各国食品安全监管部门的重视

,

美国

、

欧盟

、

日本等国家均对该类抗炎药的最大残留量进行了限定⑷

。

马肉肉质鲜嫩

,

脂肪较少

，

有独特的鲜香味道

，

是一类营养价值较高的肉类食品⑸

。

22

世纪

60

年代以来中国

马肉

产量逐

渐

提高

，

到

2017

年

，

中国已成为世界马肉最大生产国

。

近年来

，

我国马肉进

口量也呈上升趋势

，

以我国进口蒙古国马肉唯一指定口岸二连浩特为例

，

2217

年进口

2.3

万吨

，

22U

年进口达

)•

2

万吨

5

"

2

。

然而在马的饲养过程中存在非法使用非笛体抗炎药的情况

，

2211

年欧洲

“

马

肉风波

”

中

，

欧盟检测结果显示有

0.6

%

的待测马肉检出含有苯基丁氮酮⑻

。

而苯基丁氮酮会引起人

类再生障碍性贫血

,

国际上已严禁用于食用动物中

。

为有效监控马肉品质

，

有必要建立更为快速

、

高

效的马肉中非笛体抗炎药残留的检测方法

。

目前

，

非笛体抗炎药残留的检测方法有高效液相色谱法

、

液相色谱-串联质谱法

、

气相色谱-串

联质谱法

、

毛细管电泳法

、

薄层色谱法和分光光度法等

5

-6

。

其中

，

液相色谱-串联质谱法因灵敏度

和选择

性高在

NSAID-

残留分析中最为常用

。

非笛体抗炎药的样品前处理方法主要有固相萃取

［

2

-15

］

、

液-液萃取

50

和固相微萃取等

［

21

-

22

,但这些前处理方式存在操作繁冗

、

时间长

、

溶剂用量大

、

不环

保

、

成本高等不足

。

分散液液微萃取

(

DispersUe

/quid

-

/quid

mD/extmctOn

,

DLLME

-是一种集采样

、

富集

、

分离于一体的样品前处理技术

,

具有萃取溶剂用量小

、

成本低

、

富集效果好

、

操作简便和环境

友好等优点

，

已在残留检测中受到广泛关注⑴亠

］

。

各类新型

DLLME

萃取剂不断涌现

［

2

］

,其中低共熔

溶剂

(

Deep

eutectic

soWent

,

DES)

由于其毒性低

、

可降解

、

原料丰富

、

价格低廉

、

制备简单的特点得到

较多应用

［

22

"

3

0

］

,例如

，

DO

等

5

4

开发了基于

DES

的人尿中甲芬那酸含量的测定方法

：

Shxhva

等

卩

2

将

DES

用于牛奶中非笛体抗炎药的测定

。

然而

，

现有文献均聚焦于液态样品的前处理

，

目前尚无基于

DES

的分散液液微萃取技术用于动物肌肉等固态样品中非笛体抗炎药的检测扌赭

。

本研究以廉价易得的氯化胆碱和苯酚为原料经过简单混合合成疏水性

DES

,

并将其作为萃取溶剂

,

建立了分散液液微萃取结合超高效液相色谱

-

串联质谱技术测定马肉中

U

种非笛体抗炎药的方法

。

该

方法操作简单

、

准确高效

、

环保节约

，

为拓展兽药残留检测的样品前处理技术提供了新的思路

。

1

实验部分

1.

1

仪器与试剂

U20

-6470

超高效液相色谱

-

串联质谱仪(美国安捷伦公司-

,

ST17R

冷冻离心机(美国

Theno

公

司

)

，

Vortex

-

Genie

2

涡旋振荡器(美国

Scientific

Industrixs)

o

苯基丁氮酮

、

氟尼辛

、

茶丁美酮

、

茶普

生

、

双氯芬酸

、

舒林酸

、

酮洛芬

、

托芬那酸

、

W

嗥美辛

、

乙酰氨基酚标准品购自德国

DpEh/csmAer

770

分析测试学报

第

47

卷

公司

，

纯度均大于

98%

。

氯化胆碱

（

CUC1,

分析纯

，

麦克林公司

）

，

苯酚

（

分析纯

，

天津风船化学试剂

科技公司）

，

抗坏血酸

（

分析纯

，

阿拉丁公司

）

，

乙

R

（

色谱纯

，

安谱公司

）

，

实验用水为

MO

/

油超纯

水

，

含

U

mmol/L

抗坏血酸的

20

mmol/L

醋酸钱缓冲液

（

乙酸调至

pH

3.

5

）。

1.2

标准溶液的配制

将各标准品用乙

R

稀释成

1.0

R

g/mL

的标准储备液

，

于冰箱

4

七避光保存

。临用前以乙

R

混合逐

级稀释成低浓度混合标准工作溶液

,

使用时以乙

R

稀释成所需浓度的标准工作液

。

1.

3

DES

的制备

按照表

、

中的比例分别称取氯化胆碱和

表

1

低共熔溶剂的合成

Tadic

1

Sy/hesis

of

deeq

ecUcOe

solve/-

Abbreviation

氢键供体

，

置于

50

mL

具塞试管中

，其中

DES

-

1

-

DES

-

5

采用

60

°C

加热搅拌方式

,

HyProoey-hood

accepto

HyProoey-hood

Mone

DES_6~DES

_9

采用室温涡旋振荡混合

,

doocs

ratio

直至得到透明澄清的均一液体

。

DES-S

DES-0

ChCe

ChCe

ChCe

ChCe

ChCe

ChCe

ChCe

ChCe

ChCe

U/a

Lactic

acid

S

S

S

5

0

s

0

0

1.4

样品前处理

取代表性马肉样品约

540

a

,

用组织捣

碎机充分捣碎混匀

，

装入洁净容器作为试

DES-

5

DES

-4

DES

-5

DES

-6

DES

-7

DES

-8

DES

-6

EthyWco

glycol

Glucoe

Sucrose

Phedol

Phedol

4

s

s

0

S

1

1

1

样

，

置于

-4

C

冷冻避光保存

。

称取

2.6

a

搅碎均匀的试样

，

加入

5mL

含抗坏血酸的

Phecol

Phecol

5

4

醋酸钱缓冲液

，

混匀振荡

U

min

,

加入

4

6

y

氯化钠和

0.

8

mL

低共熔溶剂

，

混匀

、

mW

,

再加入

0.8

mL

分散剂乙

R

,

涡旋混匀

1

mW

,

10

000

AmX

离心

5

mXo

取上清液

，

用少量乙

R

定容至

4

6

mL

,

过滤膜后待测定

。

1.5

色谱-质谱条件

色谱条件

：

Acquhy

UPLC

BEH

C

U

(2.

1

mmx54

mm

,

4

6

R

m)

柱

，

流动相

：

A

为含

5

mmoWL

乙酸

钱

+0.1

%

甲酸的水溶液

，

B

为乙

R

。

梯度洗脱程序

：

0.6-3.6mW

,

22

%

-

60

%

B

；

3.0

-2.0

mW

,

60

%~90

%

B

；

7.

0

-7.6

mW

,

96%

-

22

%

B

；

7.

6

-7.

0

mW

,

22%

B

；

流速

：

0.

6

mL/min

；

进样量

：

5

r

L

。

质谱条件

：

三重四极杆质谱

，

电喷雾

（

ESI

）

电离源

，

采用正离子模式

，

多反应监测

（

MRM

）

模式;

干燥气温度为

325

C

;

干燥气流量为

U

LmW

；

雾化气压力为

47.

6

kPa

；

毛细管电压为

7

000

V

。

其

他参数见表

2o

表

2

U

种非笛体抗炎药的质谱参数

Ta/lc

2

MS/MS

parameUrs

of

tew

uoa-sU/idai

antOi/lammaUry

drugi

Compooud

Phecylbmazoo

)

苯基丁

氮酮-

P/cuAO

Do

(m/z)

369

297

229

Product

Dc(

m/z)

Fraymector)

V

)

Collision

ecerey(eV-

U6

*

,

48

224

*

,

U6

U6

U2

96

U

,

U

0

6

,

4

7

Fluuixi/

（

氟尼辛

）

Na/umetoco

)

蔡丁

美酮-

171

*

,

U3

45

*

,

177

U

,

36

U

,

4

22

,

5

Naproxen

(

蔡

普

生-

DicloOcac

)

双氯芬酸-

051

296

357

U6

6

U5

410.

6

*

,

256

035

*

,

347

229

*

,

U5

269

*

,

24

46

*

,

174

Su/ndac

-

舒林酸

-

36

,

17

U

,

22

KetoproOn

(

酮

洛

芬

-

TolWcamic

acid

(托芬那酸

-

255

220

U2

6

EdoietUacW(

W

喙美辛-

26

,

U

358

40

8

77

4

,

5

U

,

36

Pnenoeinmoe

(

*

quantitatWe

ion

)

U6

*

,

65

2

结果与讨论

2.

1

提取溶剂的优化

不同于液态样品的处理方式

,

肌肉等固态样品需先用溶剂提取后再进行分散液液微萃取

。

本实验

考察了不同

pH

值

（

pH3.5

、

5.0

、

7.5

、

6.6

）

的

22

mmol/L

醋酸钱缓冲溶液对马肉样品中

U

种药物的提

第

5

期

郑书展等

：

基于低共熔溶剂的分散液液微萃取/

超高效液相色谱-串联质谱法测定马肉中非笛体抗炎药

745

。

结果显示

，

4

种药物

物中多

N

、

0

、

S

彳

性条

的

、

高

性和碱性条件

，这是

笛体药

可避

,

性条

离

，

有利

高化合物在水

（

I

至

pH

的溶解度

。

文献

2

3

］

报

免分解

，

本文

5.5

）

o

选择

细胞的

会导致苯

为含

KmmoUC

抗

酮氧化分解

，

的

20

mmoUL

j

4

mmol/C

抗

2.

2

DES

萃取

选择

的

分

胆

碱

安全

、

［

06

-

。

本研究

低

，

广泛用作

DES

胆

碱按

、

合

，

DES

-

1

、

成了

9

种

DES,

按照

“

1.4

”

方法对

K

种目标物

萃取

。

结

DES-2

、

DES

-5

的水溶性较好

，

不能形成两相系

统

，

无法萃取

；

DES

-4

、

DES

-5

的

黏

度较大

，不

利于在水相中分散

，

操作难度大

；

以苯酚为

作为

萃

，

可

！

供体合成的

DES

-6

、

DES

-7

、

DES

-8

、

DES

-9

少量分

实现快速

为

、

：

2

制

图

、

不同萃取剂对

NSAUs

萃取效率的影响

Fig.

1

EEWt

of

vedoxs

extraction

agents

on

萃取

，

得的

DES

-7

萃取效率最佳

（

见图

（

）

o

进一步考

extraction

eWiOencies

of NSAUs

察了

DES

-7

用量

（

0.3

、

0.5

、

0.8

、

4

4

mL

）

对目标物萃取效果的影响

，

发现其用量为

0.3

mL

时难以

收集

DES

层

，

测定结果不稳定

；

随着

DES

-7

用量的增加

，

待测物的

萃

04

mL

时可获得较好结果

，

继

续增

量萃

呈

，

用量为

著变化

，

因此选择

DES

-7

萃

量为

0.

8

mL

。

2.3

分散剂的选择

常用分

R

、

丙酮

、

咲喃

、

甲

，

考察结

R

、

丙酮

、

DES

萃

水相中分散成细小

，

增大

萃

与待测物的

面积

。

3

种分

的分

：

咲喃

〉

乙

R

〉

丙酮

，

但对待测物的

萃

咲喃

：

使

形成两相系

：

乙

R

〉

四氢咲喃

〉

丙酮

，

综合考

虑

大值

，

此后则随乙

R

用量

选择乙

R

作为分散剂

。

考察了乙

R

用量

（

0.3

、

0.5

、

0.8

、

4

0

、

（

.5

mL

）

对目标物萃取效果的影响

，

发

萃

随乙

R

的增加而增大

，

乙

R

用量为

0.3

mL

时

萃

达

的增加而减小

。

这是因为乙

R

用量少时分

差

，

萃

分

水相中

，

导致

萃

低;

R

用量过大时

，

会

的

量为

0.

8

mLo

待测物在水相中的溶解度

，

导致

萃

降低

，

因此实验选择分

R

2.

4

盐加入量的影响

可

析作用降低非

％

体药物

的溶解度

，

同时还

萃

水相中的分

散

，

因此盐的加入能够促进待测物在

DES

萃取剂相的分配

。

考察了氯化钠加入量分别为

0.25

、

0.5

、

4

0

、

4

5

、

40

y

时

4

种非％体抗炎药的萃取效率

，

结果表明

，

随着氯化钠加入量的增加

，

待测物的

萃

收

渐提高

，

舒林

WX

量为

45y

时的回

收

率最高

，

其他

8

种待测

物

量为

4

0

y

时回收

高

。

综合考

虑

选择

量为

1.

4

Oo

2.5

基质效

肌

质复杂

，

蛋白质

、

月旨肪

、

磷脂和内源性代谢物等对待测物检测有显著干扰并影响结果

的准确性

［

0

-

o

后

计算

质效应

，

公式为

：

基质效应

（

ME）

=

（

空

质中

待

测物质

应

。

结

的响应值/乙月

青

中待测物质的响应值-

x

40

%

,

ME>

（

为基质增强效应

，

ME

<

1

为基质

抑

,

苯

酮为

为

0.40

〜

0.7

（

。为

强度的基质增强效应

，

ME

=

1.42

；

质效应带来的定量

偏

差

，

本实验

5

种待测物为基质

抑

应

，

ME

质

准工作

定量

。

2.6

方法学考察

2.6.1

标准曲线及检出限

在基质溶液中添加混合标准工作溶液

，

采用本方法进行测定

，

以各组分

774

分析测试学报

第

3

卷

的峰面积为

（

y

）

,

质量浓度为

4

,

ng/mL

）

,

在优化实验条

考察了

U

种非笛体抗炎药

的线性

。

结

，

苯

酮

、

荼普生

、

托芬

那酸

、

的线性

为

5.0

〜

U0

ng/mL

,

其余

2

种药物的线性范围为

5

、

〜

U

ng/mL

,

相关系数

（

厂

2

）

均大于

0.992

。

根据

3

倍信噪比

（

S/N

=

3

）

计算检

（

LOD

）

,

U

倍信噪比

（

S/N

=

10

-计算定量

（

LOQ

）

,

得到

U

种非笛体抗炎药的

LOD

为

0.45

〜

2.0

R

x/kc

,

LOQ

为

0.

10-5.0

R

c/koI

见表

3

）

。

表

5

U

种

NSAID-

的线性范围、

线性方程

、

相关系数

、

方法检出限及定量下限

TaClo

5

Linecs

/ngo-

:

/decs

e/uaCocs

:

cor/Wtioc

coeWiciects

(

S

)

,

the

metUoP

detection

and

quanOotOc

limits

of

tec

aualyto-

Analyte

Linear

range

)

ny/iL

-

Rec/ssioc

e/uatioc

s

LOD

(

Rx/2c)

2.0

0.

05

0.

25

L0

Q

(

Re/

y)

Pdenylbutazoco

Flunixin

5.0-100

y

=78.21%-467.

6

0.

967

6

0.

997

7

0.

997

4

0.

997

1

0.

998

5

0.

997

2

0.

978

4

0.

977

8

0.

997

4

0.

996

1

5.0

0.

1

〜

U

0.

1

〜

U

y=2

07.

5x+82.

98

y

-

99.

96,

-

U0.

2

0.

U

0.

50

5.0

NaCuieOco

Naproxen

Diclofenac

5.0

-120

0.

1

〜

U

0.

1

〜

U

0.

1

〜

U

y

=

U.

88%

-6.

U0

y

=

11.47%

-32.

85

y

=

)99.

6x

-391.9

y=223.4x

-907.6

2.0

0.

25

0.

25

0.

U

0.

50

0.

50

0.

25

5.0

2.0

5.0

Su/ndac

Ketop/fen

ToWe/aiic

acid

5.0

〜

U0

0.

1

〜

U

y

=

347.

6x

-65.48

y

=48.

Ux

-117.7

y

=

345.

lx

-320.

1

2.0

).0

IndoietUacin

Paracetaiol

5.0

-120

2.0

2.6.2

回收率与相对标准偏差

选取阴性马肉样品

，

分别添加

5

个浓度水平的非笛体抗炎药混合标准

合

后按本方

前处理和检测

，

浓度水平平行测定

2

次

，

计算回

收

相

准

偏差

（

RSD

）

。

表

4

结果显示

，

在

5.0

、

U

、

25

R

x/kc

5

个加标水平下

，

U

种

NSAID-

的平均回收率为

73.

5

%

〜

94.

6

%,

RSD

为

）

.1

%

-

8.1

%,

方

够满足马

多种非笛体抗炎药的测定要求

。

图

2

为

阴性马肉低水平

（

5.

4

RC/go

）

加标样品的

MRM

图

。

图

2

阴性马肉样品中添加

U

种

NSAID-

的

MRM

图

(5.

0

R

y/ky

)

Fig. 2

MRM

ch/matograms

of

bland

dorse

meat

sample

spineC

with

U

NSAIDs(5.

0

R

y/ky

)

2.7

实际样品检测

应用本方

蒙古

5

马

贸

市场

销售

2

份

马肉样品进行检测

,

检出

10

种非

，

按照

笛体抗炎药

。

选取

、

个蒙古

马肉样品，

按

5.

0

Rx/kc

水平

NSAID

s

混合标准

第

5

期郑书展等

：

基于低共熔溶剂的分散液液微萃取

/

超高效液相色谱-串联质谱法测定马肉中非留体抗炎药

745

本方法进行提取并测定

，

得到加标回收率为

7.

3%

-93.

4

%

,

符合质控要求

，

方法可用于实际样品

分析

。

表

4

马肉样品中

4

种非笛体抗炎药的平均回收率及相对标准偏差

("

=6

)

Table

4

Average

recevedes

and

RSDs

of

4

NSAUs

in

horse

meat(

n

=6)

Analyte

PUeaylbutazoco

Spked

5.

7

p

y/

p

o

RSD

(%

-

Spked

4

p

y/ho

SpiUea

25

ps/ho

Reccveo(%

-

Reccveo(%

-

37.

3

RSD

(%

-

Reccveo(%

-

3.4

RSD

(%

-

3.4

39.

3

35.

3

34

4

4.

3

4.5

4.5

4.0

341

4.5

4.0

Fluvixin

NaPumotoco

94.

6

35.

7

34.

4

95.

7

3.

7

842

348

4.0

4.5

4.

I

5.4

Naqroxea

DOUfegc

4.

I

5.4

5.0

6.

3

75.5

73.

I

76.9

95.4

4.5

141

3.

I

75.

I

77.

9

37.4

76.

7

3.

7

34.

I

39.

7

Sulindoc

^0

x

0^20

TolUaamic

acid

4.4

6.0

2.5

4.5

2.5

39.

4

4.0

4.4

5.0

Edome/acip

79.0

34

4

74.

3

34.

9

248

343

77.

7

35.

7

Paracetamol

5.4

2,

8

与标准方法的对比

将本方法与现行标准

SN/T

2199

-2008

[5

]

和

GB/P

20754

-2006

[

0

]

方法进行比较

，

见表

5

。

与传统

的液液萃取法和固相萃取法相比

，

本方法的有机溶剂用量明显减少

，

大大降低了实验成本以及对环境

和操作人员的危害

；

操作简单

，

萃取与净化一步完成

，

耗时短

、

效率高

；

检测灵敏度与标准方法相当

或有所提高

。

表

5

本方法与标准方法的对比

Table

5

Compadsoo

between

the

method

in

this

paper

and

the

standaO

methods

Extraction

technique

Extraction

solveal

Extraction

Amonuf

of

LOD

Umo

4

U

4

U

analytes

(

p

y/ko)

4-57

Refeonce

LLE

SPE

DLLME

Acetonitrile

(42

mL)

,

.06X800(22

mL)

Ethyl

acetate

(24

mL

)

,

dicVUomeOade(

3

mL

)

22

2-

1

4

5.0

7.75-4.0

[17

]

This

study

DES

(7.

3

mL)

,

aptocitrilo(7.

3

mL

)

47

mix

3

结论

本文建立了一种基于低共熔溶剂的分散液液微萃取/超高效液相色谱-串联质谱技术测定马肉中

4

种非笛体抗炎药的方法

，

以廉价易得的氯化胆碱和苯酚经过简单混合合成低共熔溶剂

，

减少了溶剂

用量

，

节约

了分析成

本

，

降低了环

境污染

，

且前处理操作简单

快

捷

，

在保证提取效率的同时缩短了萃

取时间

。

方法检出限为

0.45-2.4

p

o/hg

,

平均回收率为

73.0

%

-92.

4

%

,

RSD

小于

4

%

。

该方法稳定

可靠

，

满足动物源性食品质量监测的需求

，

为

DES

在兽药残留检测中的应用提供了新的思路

。

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：

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92.

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C

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YY

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Y

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婵婵

，

胡艳云

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吕亚

宁

，

宋伟

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韩芳

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平

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2212

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:

3(-33.

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D

,

Cai

Z

J

,

Li

Y

,

Ou

J

M.

J.

Liaoning

A

at

I

o

.

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何丹，

蔡智军

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10-14.

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D

,

Suu

Y

J.

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Xumuye

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2219

,

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2019

,

432

：

32

-36.

[-

SN/T

21X0

-

2003.

Determig/oo

of

Reskues

of

Nohoteoidol

AnU-inOammatoo

Dogs

in

Foods/ns

of

Animal

Odyin

for

Import and

Export

-

LC

-

MS/MS

Method.

Pofess/hol

SOndaOs

for

EnWy

-

Exit

InspePioh

and

QuaranUne

of

the

Peopled

Repud/c

of

ChmoI

进岀口动物源性食品中非笛体类抗炎药残留量检测方法液相色谱-质谱/

质谱法.中

华人民共和国岀入境检验检疫行业标准)

.

776

分析测试学报

第

46

卷

[10

]

GB/T

20754

-2006.

Method

Or

the

DeUrmiuaCoa

of

Phe/yl0u0zopo

in

Livestock

and

Poult/

Muscles

LC

-

UV

DetecUoa

Method.

NaCoaal

Standards

of

the

Peopled

Requb/c

of

Chiua(

畜禽肉中保泰松残留量的测定液相色谱-紫外检测

法•中华人民共和国国家标准

-

[

1

]

Hassan

M

,

AWhana

U.

J.

2110,1

：

Ciomed.

,

2019

,

44

:

509-54.

[

2

]

Kamaruzamau

S

,

Sauayi

M

M

,

EnduUa

S

,

Ibra/ima

W

AW

,

Y—

—

a

N.

J.

Chumatogr.

B

,

2113

,

944

：

59

-65.

[

3

]

Hau

X

F

,

Chew

J

,

Li

Z

,

QW

H

D.

Anal.

Ahim.

Acto

,

2219

,

1078

：

73-6.

[

0

]

Wa/ida

S

M

A

,

Ibra/ima

W

AW

,

Sanagf

M

M

,

K

—

ibOa

M

A

,

Keyoaa

A

S.

J

ACumatogr.

A

,

2219

,

1532

:

54

-57.

[5

]

Wang

R

,

Li

W

Q

,

Chew

Z

L.

Anal.

Ahim.

Acto

,

2218

,

U4

:

111

-

118.

[

6

]

GocUa

A

A

,

El

-

Sayed

M

K

,

Amin

A

S

,

El

Sheikh

R.

Araba.

J.

Ahem.

,

2219

,

6

:

45

-

173.

[4

]

FaCbrociuc

S

,

Gallo

P

,

Serge

L

,

FDA

M

,

Perretta

G

,

Dowling

G

,

SOiui

M.

J.

Ahromatogs.

A

,

2013

,

44

:

2832

­

2839.

[

8

]

Zhang

X

Q

,

Liang

Q

L

,

Hau

Q

,

Wan

W

,

Ding

M

Y.

Analyst,

2219

,

4)

：

424

-

4226.

[7

]

Reinholds

I

,

Pugajeva

I

,

Zacs

D

,

Lund

—

es

E

,

Rusho

J

,

Perboas

I

,

Barthevics

V.

Environ.

Moot.

Assest.

,

2017

,

117

:

523.

50]

DuUreil

-

Che/eax

E

,

Pi/Ois

Y

,

BevicX

M

,

RooUa/t

B

,

Verdoa

E.

J.

Ahromatogs.

A

,

2219

,

44

:

6292

-

630).

51]

ShisVve

A

Y

,

Chisloo

M

V

,

Nechaeva

D

V

,

Moskvin

L

N

,

BulaUe

A

V.

J.

MO.

Liq.

,

2219

,

272

：

733

-745.

52

]

AWhana

U

,

Gofer

N

G

,

ErO§

N.

F00O

Ahem.

,

2H9

,

43

:

890

-

877.

[23

]

Zhang

Q

,

Cui

-

,

Gu

H

,

Yu

XF

,

Shan

X

F

,

Zhu

G.

J

Instrum.

Anal.

(张强

，

崔君

，

顾华

，

余肖峰

，

单晓锋

，

朱

鸽.分析测试学报

)

，

2022

,

39(4)

：

32-499.

50]

LiXJ

,

Yu

H

,

Yang

R

,

Gau

P

S

,

Lip

M

,

Li

Z

F.

J

Instrum.

Anab

(

李晓晶

，

于鸿

，

杨蓉

，

甘平胜

，

刘苗

，

黎志

峰.分析测试学报

)

，

219

,

35(10)

：

1755

-U24.

55]

Wang

C

,

Gu

CK

,

Ma

Q

,

Wang

C

H.

J

Instrum.

Anal.

(

王春

，

顾传坤

，

马强

，

王长海

•

分析测试学报

)

，

219

,

38(3

)

:

263

-226.

56]

Zhu

S

Q

,

Suu

S

K

,

Zhou

J

,

Zhang

H

X.

J

Instrum.

Anal.

(朱书强

，

孙世

琨

，

周佳

，

张海霞

.

分析测试学报

)

，

2219

,

33(6)

:

755

-770.

57]

Leo

J

,

Jung

D

,

Parb

K.

TrenUs

Anal.

Ahem.

,

2219

,

Ul

:

853

-

863.

58]

Zhang

Q

H

,

VigDr

KDO

,

Royer

S

,

Jerome

F.

Ahem.

Soc.

Rev.

,

2112

,

4)

:

7108

-7107.

[29

]

Ji

YH

,

Me/y

Z

R

,

Zhao

J

,

Zhao

H

Q

,

Zhao

L

S.

J

.

Ahromatogs.

A

,

202

。

,

447

:

460520.

[30

]

Raja/1

M

,

Gho

v

d

N

,

Hemmall

M

,

Asgharl

A.

J

.

Ahromatogs.

A

,

2219

,

476

：

1

-7.

[31

]

Dil

E

A

,

Ghaedi

M

,

Asfaram

A.

Talado

,

2119

,

202

：

526

-530.

[32

]

ShisVve

A

,

Nechaeva

D

,

BuWtco

A.

Micuchem.

J.

,

2219

,

40

:

104080.

[33

]

Taylor

M

R

,

Westwood

S

A.

J.

Ahromatogs.

A ,

1995

,

667

:

36

-396.

54]

Jiang

B

,

Ding

T

,

Cao

C

J

,

NXy

X

P

,

Wu

B

,

Tang

M

Z

,

Wang

M

H.

J

Iotrum.

Anal.

(姜冰

，

丁涛

，

曹崇江

，

宁

晓盼

，吴斌

,

唐茂芝

，

王茂华.分析测试学报)

，

2221

,

39(4)

：

473

-473.

（

责任编辑

：

丁

岩

）

(上接第

759

页

)

5]

[3]

5]

[5]

5

]

Ziemb/usha

-

Beruart

f

,

Nowad

I

,

Rykowsha

I.

J.

Iran

Ahem.

Soc.

,

2H9

,

10(4)

:

601

-071.

LocateXi

M

,

F

u

C

op

K

G

,

Tartaglio

A

,

Sper

—

die

E

,

Ulusoy

H

A

Ka/ir

A.

J.

Ahromatogs.

B

,

2219

,

1111/I117

:

1

-54.

Ge

D

,

Zhang

Y

,

Dai

Y

,

Yang

S.

J

Sp.

Sh

,

2219

,

4)(7)

:

435

-1243.

Vila

M

,

Llompart

M

,

Ga/io

-

Jaros

C

,

Dayuac

T.

J.

Sep.

Sh.

,

2H9

,

4)(17)

:

3449

-3453.

Piersoa

S

A

,

Trujillo

-

RoOCguez

M

J

,

Andersoa

J

L.

J.

Sep.

Sch

,

2219

,

4)(15)

:

308)-306.

5

]

Abril

C

,

Martin

J

,

MOvcv

J

L

,

S

—

Us

J

L

,

Apa/Dc

I,

Aloaso

E.

Aoil.

Bioaml.

Ahem.

,

2219

,

44(21)

:

5155

-5173.

[8]

Li

X

,

Chew

G

,

Lio

J

J

,

Lip

Y

X

,

Zhao

X

N

,

Cao

Z

P

,

Xia

L

,

Li

GL

,

Sun

Z

W

,

Zhang

S

J

,

Wang

H

,

You

J

M.

Talado

,

2217

,

47

：

242

-252.

5

]

Vela

-

SorU

F

,

Ballesteros

0

,

Zafra

-

Gomer

A

,

BO

W

wero

L

,

Navaloa

A.

Talado

,

2219

,

4)

:

77

-

U4.

[0]

Ase/sie

-

Ramos

M

,

Hernandez

-

Borges

J

,

Rocco

A

,

Fauali

S.

J.

Sep.

Sh.

,

219

,

36(2)

)

:

3774

-

3300.

[1

]

Bergaul

S

,

As

v

di

Y

,

Anbio

M

,

MiUni

H

M

R

,

Aghaeo

E.

J

.

Ahromatogs.

A

,

216

,

143

:

)-7.

[2]

Leoag

M

I

,

Huang

S

D.

J.

Ahromatogr.

A

,

2008

,

171

)(1)

：

8

-

4.

[3

]

Mansour

F

R

,

DanieWoa

N

D.

Talado

,

217

,

44

:

22

-35.

[0]

Xioag

L

,

Wang

J

C.

J

Instrum.

Anal.

(熊力

，

王

金成

.

分析测试学报

)

，

2219

,

33(11)

：

435

-1136.

[5]

Shih

H

K

,

Shu

T

Y

,

Poauusamy

V

K

,

Jew

J

F.

Anal.

Ahim.

Aho

,

2219

,

854

：

70

-77.

[

2

]

Fu

B

,

Zhang

J

P

,

JUng

H

,

Zhou

L.

Ahim.

J

Ahromatogs.

(付

博

，

张吉

苹

，

姜晖

，

周璐

.

色谱

)，

215

,

34(9

)

：

65

-900.

（

责任编辑

：

丁岩

）

2024年6月5日发(作者：尹棠华)

第

47

卷第

5

期

2744

年

5

月

分析测试学报

FENXS

CESHS

XUEBAO

(

Jocoal

of

Ewomeata]

Analysis

)

Vol.

42

No.

I

767-776

doi:

17.

3969/j.

issn.

1704

-4457.

2221.

05.

022

基于低共熔溶剂的分散液液微萃取

/

超高效液相

色谱-串联质谱法测定马肉中非笛体抗炎药

郑书展

*

*

，

任彩霞

，

张春艳

，

王晓敏

，

盛万里

(呼和浩特海关技术中心

，

内蒙古呼和浩特

014020)

摘要

：

采用氯化胆碱和苯酚合成低共熔溶剂

(DES

),

以其为萃取剂建立了分散液液微萃取

(DLLME

)

结合超

高效液相色谱-串联质谱

(UPLC

-

MS/MS

)测定马肉中

4

种非笛体抗炎药的方法

。

优化了提取溶剂

、

萃取

齐

(I

、

分散剂和盐的加入量等条件

，

最佳萃取条件为

：

以氯化胆碱和苯酚(比例为

1

:

2)

合成的低共熔溶剂为

萃取剂

，

马肉样品经

5

mL

含

4

mmoUP

抗坏血酸的

20

mmol/P

醋酸鞍缓冲液(乙酸调至

pH

3.

5

-

提取

，

加入

4

0

g

氯化钠

、

0.

I

mL

萃取剂和

0.

3

mL

分散剂

，

旋涡混合

1

mk

,

离心后取上清液经超高效液相色谱-串联

质谱测定

，

外标法定量

。

结果显示

，

4

种非笛体抗炎药在各自质量浓度范围内呈良好线性关系

，

相关系数

4

5

)

均大于

0.

796,

检岀限为

0.

45

-

2.

4

p

y/kg,

定量下限为

0.

14

-

5.

4

p

y/kg,

平均回收率为

73.

5

%

-

94.

7

%

,

相对标准偏差

(

RSD

)为

(.1

%

-

&1

%

。

该方法操作简单

、

准确高效

、

绿色环保

,

可用于马肉中非％

抗炎

的测定。

关键词

：

低共熔溶剂

；

分散液液微萃取

；

马肉

；

非％体抗炎药

；

超高效液相色谱-串联质谱

中图分类号

：

0657.

7

；

TS2O(.O

文献标识码

：

A

文章编号

：

1004

-4957(202(

)05

-0764

-07

Determination

of

Noc-steoibol

Anti-in/ammatory

Dogs

in

Horse

Meo)

by

Ultra

Higb

Pedormancc

Li

quip

ChomaOyophy

-

Tandem

Mass

SpectromeWy

witb

Deep

Eutectic

Solveal

Based

on

Dispersiva

Liquid

-

Liquid

Micoextroctioc

ZHENG

SPu-zhao

*

,

REN

Caioia

,

ZHANG

C/du-pun

,

WANG

Xiao-mix

,

SHENG

Wan-ti

(

Technical

Center

of

HoCUot

Customs

:

Hodhot

04020,

Chi/o)

Abstrac

：

:

NonomoiPT

anti-inbammatoo

dogs

:

are

one

of

the

most

widWy

used

p/doacwUcaXo

active

compodnds

in

vetednao

medicine.

Dispersive

liquid

一

liquid

micoextractioc

(

DLLME

-

is

a

mini-cxtrachoc

technique

with

merits

of

Uw

cost

,

wOonmwt

fawd/ross

and

high

extraction

eWk

cieacy.

Moreover

,

this

method

is

wsy

to

opeote

and

requires

only

a

shod

operation

time.

In

this

paqer

,

a

deep

eutectic

solveat

(

DES

)

based

on

choline

chUdde

was

used

for

the

Uot

time

as

the

/pt

uid

一

liquid

mic/oxtopOn

solveal

for

eWicienl

and

safe

extraction

of

uoc-steo/al

anti-in/ammatoo

dogs

in

horse

meat.

DES

was

simply

syuthesizW

via

just

mixing

cho/ne

chUdde

and

pheuol

at

oom

temperature.

The

analytes

were

extracted

into

acetate

bu/br

,

and

thea

bach-extracted

to

the

DES

phase

simply

b/

oscilU/oc.

Meanwhile

,

acetocit/U

was

used

as

a

dispersive

solvent

and

the

DES

phase

was

celUcted

b/

ceat/fugaUod.

An

ultra

high

pedo/nadee

liquid

cVromatograqPo

一

tandem

mas

s

spectometo

(

UPLC

一

MS/MS

)

with

liquid

一

liquid

micoextractioc

based

on

the

DES

was

2/pf

/shed

for

the

deOoig/on

of

Ou

non-steroidal

anti

-

in/ammatoo

dogs

in

horse

meat.

A

sedes

of

ant

alytical

factors

such

as

extraction

dgwl,

dispwskg

dgwl

and

bosage

of

sodium

chlodbe

were

optO

mized.

The

optimum

concVtOns

were

as

follows

:

DES

was

popTol

with

cho/ne

chUdde

and

pheuol

at

a

1

：

2

molar

rake

,

while

the

horse

meat

sample

was

extracted

with

5

mL

22

mmoUL

acetate

buffer

(

adjusUng

to

pH

3.

0

with

acetic

acid

)

containing

10

mmoUL

ascorUic

acid

,

and

siibsw/wOy

aPded

4

4

g

sodium

chUdde

,

0.

5

mL

extractant

and

0.

I

mL

dispeoiul,

thea

vadev

extracted

for

1

mix

收稿日期

：

2227

-03

-14

；

修回日期

：

2222

-79

-77

基金项目

：

海关总

署

科研项目

(2219HK141

)

*

通讯作者

：

郑

书展

，

博士

，

高

级

工程师

，

研究方向

：

食品安全检测技术

，

E

-

mail

:

zheagshuzhaq@

105.

com

第

5

期

郑书展等

：

基于低共熔溶剂的分散液液微萃取

/

超高效液相色谱-串联质谱法测定马肉中非笛体抗炎药

761

and

followed

bp

/

coctOfugahoc

,

finallp

detected

bp

UPLC

-

MS/MS.

Results

showed

that

there

/-

isOp

good

/near

relatiopships

for

On

/dDU/iddl

anti-in/ammato/

dma-

in

the

respective

concen

­

tration

rangx-

with

their

cox'elatioc

coeXicients)

S

-

larger

than

0.

996.

The

limits

of

detection

(

LOD)

and

the

/mils

O

qu

—

Uu0o(

LOQ

)

were

in

the

rangx-

O

0.

05

-

2.

0

R

g/kg

and

0.

U

-5.

2

r

—

kg

,

respectUela.

RecoveCes

for

On

noc-stem/al

anti

-

in/ammato/

dma-

at

three

spiPed

levels

ranged

f/m

73.

5%

to

67.

6%

with

relative

standard

deviations

of

1.

1%

-

5.

1%

.

Results

Oidicated

that

the

DES

could

be

used

as

an

altemalx

of

traUitiocal

soWocts

for

dispersive

1/uid

-

/quid

micm/tmction.

The

method

was

simple

,

rapid

,

accurate

and

reXa/lc

,

and

could

be

used for

the

analysis

of

noo-

ste/idal

anti

-

in/ammatory

dmy-

in

dorse

mean

Key

words

:

deep

xOctic

soWoct

；

dispwsDa

liuuid

-

/quid

mioo/tmction

；

dorse

meal

;

noo-

ste/idal

anti

-inCammatory

dma

、

；

ultra

high

peWownanco

/quid

ch/mOocmpUe

-

tandem

mass

spxc-

t/metp

非笛体抗炎药

(NSAIDs)

在抗炎

、

止痛

、

退热和抗凝血等方面疗效显著

，

是目前动物养殖业中使用

最广泛的兽药种类之一⑷

。

常见的非笛体抗炎药有苯基丁氮酮

、

氟尼辛

、

茶丁美酮

、

茶普生

、

托芬那

酸

、

乙酰氨基酚等

。

近年的研究表明这类抗炎药具有明显的毒副作用

，

会引起胃肠道

、

血液

、

肾脏系

统等的不良反应

，