2024年4月8日发(作者：黎飞兰)
货号：MS1407 规格：100管/96样
超氧阴离子(Oxygen free radical, OFR)试剂盒说明书
微量法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
生物体内超氧阴离子等活性氧具有免疫和信号传导的作用，但积累过多时会对细胞膜及生
物大分子产生破坏作用，导致机体细胞和组织代谢异常，从而引起多种疾病。
测定原理：
超氧阴离子与盐酸羟胺反应生成NO
2
－
，NO
2
－
在对氨基苯磺酸和α－萘胺的作用下，生成红
－
色的偶氮化合物，在530nm处有特征吸收峰，根据A
530
值可以计算样品中O
2
含量，反应式为
NH
2
OH + 2O
2
－
＋H
＋
→ NO
2
－
＋ H
2
O
2
＋ H
2
O。
自备实验用品及仪器：
天平、水浴锅、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、氯仿和蒸
馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体110mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体8mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体6mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体6mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂四：氯仿，自备。
超氧阴离子提取：
1. 植物、动物组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g
组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后，10000g，4℃，离心20min，取上清置于冰
上待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（10
4
个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500
万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时
间3min）；然后10000g，4℃，离心20min，取上清置于冰上待测。
3. 血清或培养液：直接测定。
测定操作表：
1、分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至530nm。
2、操作表
空白管
样本（μL）
提取液（μL） 100
试剂一(μL) 80
混匀，37℃水浴20min
试剂二（μL） 60
试剂三（μL） 60
第1页，共3页
测定管
40
60
80
60
60
混匀，37℃水浴20min
试剂四（μL） 100 100
混匀，8000g，25℃，离心5min，小心吸取上层水相200μL于微量石英比色皿
/96孔板中，空白管调零，测定530nm处吸光值，记为A
530
。
超氧阴离子含量计算公式：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y=0.0115x-0.0038，R
2
=0.9986
1. 组织：
（1）按照样本质量计算
超氧阴离子含量（μmol/g 鲜重）= (A
530
+0.0038)÷0.0115×V反总÷(V样÷V样总
×W)×10
-3
×2
= 1.74×(A
530
+0.0038)÷W
超氧阴离子产生速率（μmol/ g·min）=1.74×(A
530
+0.0038)÷W÷T
=0.087×(A
530
+0.0038)÷W
（2）按照蛋白质浓度计算
超氧阴离子含量（μmol/mg prot）= (A
530
+0.0038)÷0.0115×V反总÷(V样×Cpr)×10
-3
×2
=1.74×(A
530
+0.0038)÷Cpr
超氧阴离子产生速率（μmol/ mg prot·min）=1.74×(A
530
+0.0038)÷Cpr÷T
= 0.087×(A
530
+0.0038)÷Cpr
2. 细菌，真菌：
超氧阴离子含量（µmol/10
4
cell）= (A
530
+0.0038)÷0.0115× V反总÷(V样÷V样总×细胞
-3
数量)×10×2
= 1.74×(A
530
+0.0038)÷细胞数量
超氧阴离子产生速率（µmol/mg prot·min）= 1.74×(A
530
+0.0038)÷细胞数量÷T
= 0.087×(A
530
+0.0038)÷细胞数量
3. 血清或培养液
超氧阴离子
含量（μmol/L）= (A
530
+0.0038)÷0.0115 × V反总÷V样×2=
1739.13×(A
530
+0.0038)
超氧阴离子产生速率（μmol/L·min）= 1739.13×(A
530
+0.0038) ÷T= 86.96×(A
530
+0.0038)
V样总：加入提取液体积，1 mL； V反总：反应总体积，0.4mL；V样：反应中样品体积，0.04mL；
Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g；T：反应时间，20min；2: 2分子O
2
－
参与反
应生成1分子NO
2
－
。
b.用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y=0.00575x-0.0038，R
2
=0.9986
1. 组织：
（1）按照样本质量计算
超氧阴离子含量（μmol/g 鲜重）= (A
530
+0.0038)÷0.00575×V反总÷(V样÷V样总
×W)×10
-3
×2
= 3.48×(A
530
+0.0038)÷W
超氧阴离子产生速率（μmol/ g·min）=3.48×(A
530
+0.0038)÷W÷T
第2页，共3页
=0.174×(A
530
+0.0038)÷W
（2）按照蛋白质浓度计算
超氧阴离子含量（μmol/mg prot）= (A
530
+0.0038)÷0.00575×V反总÷(V样×Cpr)×10
-3
×2
= 3.48×(A
530
+0.0038)÷Cpr
超氧阴离子产生速率（μmol/ mg prot·min）= 3.48×(A
530
+0.0038)÷Cpr÷T
=0.174×(A
530
+0.0038)÷Cpr
2. 细菌，真菌：
超氧阴离子含量（µmol/10
4
cell）= (A
530
+0.0038)÷0.00575× V反总÷(V样÷V样总×细
胞数量)×10
-3
×2
= 3.48×(A
530
+0.0038)÷细胞数量
4
超氧阴离子产生速率（µmol/10 cell·min）= 1.74×(A
530
+0.0038)÷细胞数量÷T
=0.174×(A
530
+0.0038)÷细胞数量
3. 血清或培养液
超氧阴离子
含量（μmol/L）= (A
530
+0.0038)÷0.00575 ×V反总÷V样×2=
3478.26×(A
530
+0.0038)
超氧阴离子产生速率（μmol/L·min）= 3478.26×(A
530
+0.0038) ÷T= 173.91×(A
530
+0.0038)
V样总：加入提取液体积，1 mL； V反总：反应总体积，0.4mL；V样：反应中样品体积，0.04mL；
－
Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g；T：反应时间，20min；2：2分子O
2
参与反
应生成1分子NO
2
－
。
注意事项：
1、OD值大于1.5，样品适当稀释再测定，注意计算公式里乘以稀释倍数。
2、样品制备好后，立刻进行测定，请勿将样品进行长时间的低温保存，以免影响测定结果。
3、试剂四有一定的毒性，请操作时做好防护措施。
4、最低检出限为13.3µmol/L。
第3页，共3页
2024年4月8日发(作者：黎飞兰)
货号：MS1407 规格：100管/96样
超氧阴离子(Oxygen free radical, OFR)试剂盒说明书
微量法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
生物体内超氧阴离子等活性氧具有免疫和信号传导的作用，但积累过多时会对细胞膜及生
物大分子产生破坏作用，导致机体细胞和组织代谢异常，从而引起多种疾病。
测定原理：
超氧阴离子与盐酸羟胺反应生成NO
2
－
，NO
2
－
在对氨基苯磺酸和α－萘胺的作用下，生成红
－
色的偶氮化合物，在530nm处有特征吸收峰，根据A
530
值可以计算样品中O
2
含量，反应式为
NH
2
OH + 2O
2
－
＋H
＋
→ NO
2
－
＋ H
2
O
2
＋ H
2
O。
自备实验用品及仪器：
天平、水浴锅、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、氯仿和蒸
馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体110mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体8mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体6mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体6mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂四：氯仿，自备。
超氧阴离子提取：
1. 植物、动物组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g
组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后，10000g，4℃，离心20min，取上清置于冰
上待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（10
4
个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500
万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时
间3min）；然后10000g，4℃，离心20min，取上清置于冰上待测。
3. 血清或培养液：直接测定。
测定操作表：
1、分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至530nm。
2、操作表
空白管
样本（μL）
提取液（μL） 100
试剂一(μL) 80
混匀，37℃水浴20min
试剂二（μL） 60
试剂三（μL） 60
第1页，共3页
测定管
40
60
80
60
60
混匀，37℃水浴20min
试剂四（μL） 100 100
混匀，8000g，25℃，离心5min，小心吸取上层水相200μL于微量石英比色皿
/96孔板中，空白管调零，测定530nm处吸光值，记为A
530
。
超氧阴离子含量计算公式：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y=0.0115x-0.0038，R
2
=0.9986
1. 组织：
（1）按照样本质量计算
超氧阴离子含量（μmol/g 鲜重）= (A
530
+0.0038)÷0.0115×V反总÷(V样÷V样总
×W)×10
-3
×2
= 1.74×(A
530
+0.0038)÷W
超氧阴离子产生速率（μmol/ g·min）=1.74×(A
530
+0.0038)÷W÷T
=0.087×(A
530
+0.0038)÷W
（2）按照蛋白质浓度计算
超氧阴离子含量（μmol/mg prot）= (A
530
+0.0038)÷0.0115×V反总÷(V样×Cpr)×10
-3
×2
=1.74×(A
530
+0.0038)÷Cpr
超氧阴离子产生速率（μmol/ mg prot·min）=1.74×(A
530
+0.0038)÷Cpr÷T
= 0.087×(A
530
+0.0038)÷Cpr
2. 细菌，真菌：
超氧阴离子含量（µmol/10
4
cell）= (A
530
+0.0038)÷0.0115× V反总÷(V样÷V样总×细胞
-3
数量)×10×2
= 1.74×(A
530
+0.0038)÷细胞数量
超氧阴离子产生速率（µmol/mg prot·min）= 1.74×(A
530
+0.0038)÷细胞数量÷T
= 0.087×(A
530
+0.0038)÷细胞数量
3. 血清或培养液
超氧阴离子
含量（μmol/L）= (A
530
+0.0038)÷0.0115 × V反总÷V样×2=
1739.13×(A
530
+0.0038)
超氧阴离子产生速率（μmol/L·min）= 1739.13×(A
530
+0.0038) ÷T= 86.96×(A
530
+0.0038)
V样总：加入提取液体积，1 mL； V反总：反应总体积，0.4mL；V样：反应中样品体积，0.04mL；
Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g；T：反应时间，20min；2: 2分子O
2
－
参与反
应生成1分子NO
2
－
。
b.用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y=0.00575x-0.0038，R
2
=0.9986
1. 组织：
（1）按照样本质量计算
超氧阴离子含量（μmol/g 鲜重）= (A
530
+0.0038)÷0.00575×V反总÷(V样÷V样总
×W)×10
-3
×2
= 3.48×(A
530
+0.0038)÷W
超氧阴离子产生速率（μmol/ g·min）=3.48×(A
530
+0.0038)÷W÷T
第2页，共3页
=0.174×(A
530
+0.0038)÷W
（2）按照蛋白质浓度计算
超氧阴离子含量（μmol/mg prot）= (A
530
+0.0038)÷0.00575×V反总÷(V样×Cpr)×10
-3
×2
= 3.48×(A
530
+0.0038)÷Cpr
超氧阴离子产生速率（μmol/ mg prot·min）= 3.48×(A
530
+0.0038)÷Cpr÷T
=0.174×(A
530
+0.0038)÷Cpr
2. 细菌，真菌：
超氧阴离子含量（µmol/10
4
cell）= (A
530
+0.0038)÷0.00575× V反总÷(V样÷V样总×细
胞数量)×10
-3
×2
= 3.48×(A
530
+0.0038)÷细胞数量
4
超氧阴离子产生速率（µmol/10 cell·min）= 1.74×(A
530
+0.0038)÷细胞数量÷T
=0.174×(A
530
+0.0038)÷细胞数量
3. 血清或培养液
超氧阴离子
含量（μmol/L）= (A
530
+0.0038)÷0.00575 ×V反总÷V样×2=
3478.26×(A
530
+0.0038)
超氧阴离子产生速率（μmol/L·min）= 3478.26×(A
530
+0.0038) ÷T= 173.91×(A
530
+0.0038)
V样总：加入提取液体积，1 mL； V反总：反应总体积，0.4mL；V样：反应中样品体积，0.04mL；
－
Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g；T：反应时间，20min；2：2分子O
2
参与反
应生成1分子NO
2
－
。
注意事项：
1、OD值大于1.5，样品适当稀释再测定，注意计算公式里乘以稀释倍数。
2、样品制备好后，立刻进行测定，请勿将样品进行长时间的低温保存，以免影响测定结果。
3、试剂四有一定的毒性，请操作时做好防护措施。
4、最低检出限为13.3µmol/L。
第3页，共3页