2024年5月11日发(作者：虎长霞)
过氧化氢含量测定
原理：
在pH=9.6～11.0的甘氨酸-NaOH缓冲溶液中,以辣根过氧化物酶作催化剂, H
2
O
2
与钙试
剂羧酸钠发生催化反应，钙试剂羧酸钠偶氮键遭到破坏，导致溶液颜色变浅，630nm处吸光
度减小，H
2
O
2
量越大，吸光度减小的越多，通过测定的A
630
的变化值可测得H
2
O
2
的含量。
试剂：
H
2
O
2
标准溶液:由30% H
2
O
2
稀释配制,贮备液用高锰酸钾法标定,4℃保存,操作液临用时
稀释.
0.02g/mL
钙试剂羧酸钠溶液:15 g/L水溶液.
甘氨酸-NaOH缓冲溶液:0.25 mol/L甘氨酸与0.25 mol/L NaOH溶液按体积比为3∶2混
合,用酸度计调节pH值至10.2.所用试剂均为分析纯,水为二次去离子水.
草酸钠标定KMnO
4
：0.15g Na
2
C
2
O
4
基准物3份，分别置于250ml的锥形瓶中，加入50ml
水使之溶解，加入10ml 3mol/L H
2
SO
4
，在水浴加热到75-85℃，趁热滴定。开始滴定时反应
速度慢，待生成Mn
2+
后，滴定速度可加快。
2MnO
4
-
+5C
2
O
4
2-
+16H
+
→2Mn
2+
+10CO
2
+ 8H
2
O
m2
1345
1000
C
KMnO
V(ml)
0.02mol/L
4
方法
：
标准曲线的绘制：
按顺序依次加入下列试剂，50℃恒温水浴中保温30min,取出后经流水冷却3min，在630nm
处以ddH
2
O为参比测定吸光度A
630
。以A
630
为纵坐标，过氧化氢量（µmol）为横坐标绘制H
2
O
2
标准曲线。
H
2
O
2
标准曲线的制作
编号
甘氨酸-NaOH缓冲溶液(mL)
钙试剂羧酸钠溶液(mL)
辣根过氧化物酶(mL)
H
2
O
2
标准溶液（mL）
ddH
2
O(mL)
0.5
0.45
0.4
0.35
0.3
0.25
0.2
01234
1
5
1
0.2
0
3.8
2
5
1
0.2
0.5
3.3
3
5
1
0.2
1
2.8
4
5
1
0.2
1.5
2.3
5
5
1
0.2
2
1.8
6
5
1
0.2
2.5
1.3
7
5
1
0.2
3
0.8
菌液中H
2
O
2
含量的测定：根据表8中确定的条件，依次加入各溶液，其中菌液为原待测液
稀释5倍，50℃恒温水浴中保温17min,取出后经流水冷却3min，在630nm处以ddH
2
O为参
比测定吸光度A
630
.根据标准方程，计算待测液中H
2
O
2
的含量。重复3次。
2024年5月11日发(作者：虎长霞)
过氧化氢含量测定
原理：
在pH=9.6～11.0的甘氨酸-NaOH缓冲溶液中,以辣根过氧化物酶作催化剂, H
2
O
2
与钙试
剂羧酸钠发生催化反应，钙试剂羧酸钠偶氮键遭到破坏，导致溶液颜色变浅，630nm处吸光
度减小，H
2
O
2
量越大，吸光度减小的越多，通过测定的A
630
的变化值可测得H
2
O
2
的含量。
试剂：
H
2
O
2
标准溶液:由30% H
2
O
2
稀释配制,贮备液用高锰酸钾法标定,4℃保存,操作液临用时
稀释.
0.02g/mL
钙试剂羧酸钠溶液:15 g/L水溶液.
甘氨酸-NaOH缓冲溶液:0.25 mol/L甘氨酸与0.25 mol/L NaOH溶液按体积比为3∶2混
合,用酸度计调节pH值至10.2.所用试剂均为分析纯,水为二次去离子水.
草酸钠标定KMnO
4
：0.15g Na
2
C
2
O
4
基准物3份，分别置于250ml的锥形瓶中，加入50ml
水使之溶解，加入10ml 3mol/L H
2
SO
4
，在水浴加热到75-85℃，趁热滴定。开始滴定时反应
速度慢，待生成Mn
2+
后，滴定速度可加快。
2MnO
4
-
+5C
2
O
4
2-
+16H
+
→2Mn
2+
+10CO
2
+ 8H
2
O
m2
1345
1000
C
KMnO
V(ml)
0.02mol/L
4
方法
：
标准曲线的绘制：
按顺序依次加入下列试剂，50℃恒温水浴中保温30min,取出后经流水冷却3min，在630nm
处以ddH
2
O为参比测定吸光度A
630
。以A
630
为纵坐标，过氧化氢量（µmol）为横坐标绘制H
2
O
2
标准曲线。
H
2
O
2
标准曲线的制作
编号
甘氨酸-NaOH缓冲溶液(mL)
钙试剂羧酸钠溶液(mL)
辣根过氧化物酶(mL)
H
2
O
2
标准溶液（mL）
ddH
2
O(mL)
0.5
0.45
0.4
0.35
0.3
0.25
0.2
01234
1
5
1
0.2
0
3.8
2
5
1
0.2
0.5
3.3
3
5
1
0.2
1
2.8
4
5
1
0.2
1.5
2.3
5
5
1
0.2
2
1.8
6
5
1
0.2
2.5
1.3
7
5
1
0.2
3
0.8
菌液中H
2
O
2
含量的测定：根据表8中确定的条件，依次加入各溶液，其中菌液为原待测液
稀释5倍，50℃恒温水浴中保温17min,取出后经流水冷却3min，在630nm处以ddH
2
O为参
比测定吸光度A
630
.根据标准方程，计算待测液中H
2
O
2
的含量。重复3次。