2024年6月13日发(作者：候梓露)
基础研究
食品研究与开发
Ｆｏｏｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏ
２０１１年７月
第３２卷第７期 ２ｉ
＝＝－
ＰＥＧ（６０００）一Ｎａ２ＨＰｏ４双水相体系在鹰嘴豆
蛋白萃取中的应用
魏玲。李学琴。盂宪锋，薛来奇
（昌吉学院，新疆昌吉８３１１００）
摘要：￣－ＰＥＧ（６０００）一Ｎａ２ＨＰｏ４双水相萃取鹰嘴豆蛋白进行研究，考察ＰＥＧ的浓度、Ｎａ：ＨＰＯ 的量、恒温超声时间、ｐＨ、
温度等因素对蛋白质萃取率的影响。结果表明：该双水相对鹰嘴豆蛋白的最佳萃取条件：ＰＥＧ（６０００）浓度为１０％．
ＰＥＧ－ｂＮａ２ＨＰＯ４的质量比为１：Ｉ．５，ｐＨｉ７．５，温度４０℃，在此条件下蛋白质萃取率可达到６３．４６％。
关键词：ＰＥＧ（６０００）一Ｎａ２ＨＰＯ４双水相；鹰嘴豆蛋白质；萃取；工艺条件
Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｈｉｃｋｌ￣Ｉｅａ Ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ（ＰＥＧ－ＮａｚＨＰＯ４）Ａｑｕｅｏｕｓ Ｔｗｏ—Ｐｈａｓｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ
ＷＥＩ Ｌｉｎｇ，ＬＩ Ｘｕｅ—Ｑｉｎ，ＭＥＮＧ Ｘｉａｎ－Ｆｅｎｇ，ＸＵＥ Ｌａｉ－Ｑｉ
（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｃｈａｎｇｊｉ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｃｈａｎｇｊｉ ８３１１００，Ｘｉｎｊｉａｎｇ，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃｈｉｃｋｐｅａ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ（ＰＥＧ）－（ＮａＥＨＰＯ４）ａｑｕｅｏｕｓ ｔｗｏ—ｐｈａｓｅ
基金项目：昌吉学院科研基金资助项目（０８ＹＪＺＤ００１）
作者简介：魏玲（１９５６一），女（汉），教授，本科，主要从事应用分析的研究。
随着温度的升高黄酮提取率增加较快，温度达到
８０℃时提取率达到最大，综合各方面因素考虑，正交
试验提取温度以７０℃ ９０℃为宜。
２．２金花葵花黄酮正交试验结果及分析
浸提正交试验极差分析见表２，各因素对黄酮提
最佳工艺条件为Ａ Ｂ Ｃ，Ｄ。，即乙醇浓度６０％、温度
９０℃、时间４ ｈ、固液１：￣１：３５，最大提取率可达３８．６７％。
３结论
本试验结果表明：影响金花葵花总黄酮提取率的
因素依次为：浸提温度＞浸提时间＞固液比＞乙醇浓
取率的影响程度各不相同，大小依次为Ｄ＞Ｃ＞Ｂ＞Ａ，
即提取温度对黄酮提取率的影响最大，其次是提取时
间和固液比，而乙醇浓度对黄酮提取率的影响最小。根
据直观法，可以得出回流法提取金花葵花中总黄酮的
表２正交试验结果分析
Ｔａｂｌｅ ２ Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｔｅｓｔ
度。最佳提取工艺为：乙醇浓度６０％、温度９０℃、时间
４ ｈ、固液１：ｇ１：３５，在此浸提条件下的最大提取率可达
３８．６７％
参考文献：
…１彭志兵，吴正平．高效液相色谱一质谱法分析金花葵花中金丝桃苷
【Ｊ］．安徽农业科学，２００８，３６（２３）：１００２８—１００２９
【２］刘临．原子吸收光谱法测定金花葵中微量元素［Ｊ］．微量元素与健
康研究，２００８，２５（４）：２７—２９
［３３Ｊ 张冬雪．水浸提沙棘果渣总黄酮工艺研究ｆＪ】．国际沙棘研究与开
发，２００８，１２（６）：１０—１３
【４ 张海生，４Ｊ陈锦屏．蜂蛹黄酮的提取及体外抗氧化作用的研究［Ｊ］．食
品科学，２００８，２９（２）：１５８—１６２
［５】吴名全，雷波．金花葵花中总黄酮的提取纯化及含量测定［Ｊ］．农技
服务，２００９，２６（１０）：１２７，１３８
收稿日期：２０１０—１２—０９
－＝＝２２ 魏玲，等：ＰＥＧ（６０００）一Ｎａ２ＨＰＯ 双水相体系在鹰嘴豆蛋白萃取中的应用 基础研究
ｓｙｓｔｅｍｓ ｗａｓ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ．Ｔｈｅ ｍａｉｎ ｆａｃｔｏｒｓ ｏｎ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ｃｈｉｃｋｐｅａ ｐｒｏｔｅｉｎ ｗｅｌ＇ｅ ｄｉｓｃｕｓｓｅｄ Ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｔｈｅ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＰＥＧ，ｔｈｅ ｗｅｉｇｈｔ ｏｆ Ｎａ２ＨＰＯ ｔｈｅ ｔｉｍｅ ｏｆ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ，ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｃｏｎｄｉｉｔｏｎ，ｐＨ．Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ
ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｏｆｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ｃｈｉｃｋｐｅａ ｐｒｏｔｅｉｎ ｗｅｒｅ ａｂｏｕｔ ＰＥＧ（６０００）１０％，ｍａｓｓ ｒａｔｉｏ ｆｏＰＥＧ ａｎｄ Ｎａ２ＨＰＯ４ １：１．５，
ｐＨ ７．５，ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ４０ ｏＣ．Ｆｉｎａｌｌｙ，ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ ａｂｏｖｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｙｉｅｌｄ
ｗａｓ６３．４６％．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：（ＰＥＧ）一（Ｎａ２ＨＰＯ４）ａｑｕｅｏｕｓｔｗｏ－ｐｈａｓｅｓｙｓｔｅｍｓ；ｃｈｉｃｋｐｅａｐｒｏｔｅｉｎ；ｅｘｔｒａｃｔｉｎ￣ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｃｏｎｄｉｉｔｏｎｓ
蛋白质在细胞和生物体的生命活动过程中，起着
氢钠（ＮａＨＳＯ ）；硫酸，氢氧化钠，硫酸铜，硫酸钾，溴甲
十分重要的作用。鹰嘴豆就是一种富含蛋白质的豆类 酚绿，甲基红，乙醇；所有试剂均为分析纯。
植物，新疆的木垒县是鹰嘴豆的主产区。富含多种植物
ＡＢ２０４一Ｎ型电子天平（精度０．０００ １ ｇ）：上海天平
蛋白和１０多种氨基酸等成分。其中纯蛋白质含量高达
厂；ＨＨ—Ｓ恒温水浴锅（精度０．１℃）：江苏金坛县医用仪
２８％以上，其中人体必需的８种氨基酸全部具备，而且 器厂；ＫＱ一１００型超声波清洗机：昆山市超声仪器有限
含量比燕麦还要高出２倍以上【”。由于蛋白质的市场价
公司；ＴＧＬ一１６台式高速离心机：金坛市恒丰仪器厂；微
格昂贵，提高回收率能带来巨大的经济效益，如何提取
量凯氏定氮仪。
高纯度的蛋白质，而且还要使其不失活，这一直是一项
１．２方法
艰巨的工作，所以有关蛋白质在分离纯化中的失活及
１．２．１ 双水相体系的选取及鹰嘴豆蛋白的萃取
其对策在近年来受到很大的关注。
于２０ ｍＬ比色管中，依次加人不同的盐和不同浓度
传统的蛋白质的提取方法对蛋白质的提取都能 的ＰＥＧ溶液，配成不同质量比的体系，充分振荡，并放
得到较高的产率，但对蛋白的活性都有很大的影响。８０
在恒温水浴锅中恒温至盐完全溶解，取出后冷却至室
年代以来，双水相萃取技术是研究比较热门的一种分 温，记录上下相体积比，从而选择相比最佳的双水相体
离技术。双水相萃取技术是通过溶质在两水相之间分
系。在此双水相体系中加入一定量的鹰嘴豆粉，振荡使
配系数的差异而进行萃取的技术。双水相萃取在提取 其充分溶解，并在一定温度下超声一定时间后，取出离
生物活性物质方面有：分相时间短；在接近生理环境的
心５ ｍｉｎ～１０ ｍｉｎ，取下相，测其蛋白质含量，从而得出该
体系中进行萃取，不会引起生物活性物质失活或变性； 体系对鹰嘴豆蛋白的萃取率。
不存在有机溶剂的残留问题，对人体无害；分离过程经
蛋白凰 ：Ｖ２－Ｖ，ｘＮ—ｘ ０．０１４ｘ６．２５×１００
济、简单、能够连续操作；操作条件温和等优点 。正是
ｗ
双水相萃取有如此诸多的优势，这种分离技术已经应
式中： 。为滴定时用去的０．０１ ｍｏＦＬ标准硫酸溶
用到生物活性物质的分离提纯，例如在多肽、氨基酸、
液，ｍＬ；Ｖ 为空白滴定是用去的０．０１ ｍｏｌ／Ｌ标准硫酸溶
酶、金属离子、植物有效成分等方面的研究，它的优势
液，ｍＬ；Ｎ为硫酸标准溶液的当量浓度，ｍｏ］／Ｌ；０．０１４为
逐渐得到了体现。但用双水相萃取技术来萃取豆类蛋
１ ｍｇ当量氮的克数，ｇ；６．２５为氮的蛋白质换算系数；Ｗ
白质的研究还少见报道。本研究提出采用ＰＥＧ（６０００）－
为样品克数，ｇ。
Ｎａ２ＨＰ０４￣水相体系来萃取鹰嘴豆豆粉中的蛋白质。考
萃取率 ＝ ／］／１ ｘｌ００
察了不同的盐、不同的ＰＥＧ浓度对双水相形成的影响，
竹２
以及通过改变鹰嘴豆粉量、酸度、温度和恒温超声时间
式中： 为富含蛋白质相中蛋白质含量，ｇ；Ｍ２￣１］
来选择最佳萃取条件，并在该条件下对鹰嘴豆中蛋白 人体系的鹰嘴豆豆粉中蛋白质的含量，ｇ。
质进行萃取的研究。实验结果证明此方法是可行的。 １．２．２鹰嘴豆蛋白的萃取
准确称取鹰嘴豆粉１５ ｇ－ｒ￣３Ｌ氏定氮瓶中，ＪＪＩＡ２５ ｍＬ
１材料与方法
浓硫酸，再称０．２ ｇ无水硫酸铜和１０ ｇ硫酸钾，加热消化
１．１试剂及仪器
至溶液呈蓝绿色后，再加热消化３０ ａｒｉｎ，冷却至室温，
鹰嘴豆：（市售），研碎后，１２０目过筛。
转入到１００ ｍＬ容量瓶中，加水稀释至刻度线。采用微量
聚乙二醇６ＯＯＯ（ＰＥＧ）；氯化钠（ＮａＯ），溴化钠
凯氏定氮法测该溶液中的含氮量，从而计算出鹰嘴豆
（ＮａＢｒ），磷酸氢二钠（ＮａｚＨＰＯ ），磷酸二氢钠 豆粉中蛋白质的含量。
（ＮａＨ２ＰＯ ），磷酸钠（Ｎａ，Ｐ０ ），硫酸钠（Ｎ ０４），亚硫酸
在５０ ｍＬ离心管中分别加２Ｏ ｍＬ １０％ＰＥＧ溶液、然
基础研究 魏玲，等：ＰＥＧ（６０００）一Ｎａ２ＨＰ０４双水相体系在鹰嘴豆蛋白萃取中的应用
２３＝＝＝一
后再加３ ｇ Ｎａ２ＨＰ０４，在３５ ｃＣ下恒温溶解，使其充分分
相，加０．７００ ０ ｇ鹰嘴豆粉，充分振荡使豆粉充分溶解，
恒温超声１５ ｍｉｎ后，取出离心（大约３ ０００ ｒ／ｍｉｎ）３ ｍｉｎ～
然后分别在同一条ｔ￣－ｖ测各条件下的鹰嘴豆蛋白萃取
率，结果如图ｌ所示。
５ ａｒｉｎ，用微量凯氏定氮法测下相的含氮量，根据鹰嘴
豆粉中的蛋白质含量计算出下相的萃取率。
２结果与讨论
２．１盐及其加入量对双水相体系的影响
于一系列的２０ ｍＬ比色管中，分别加入ｌ０％ＰＥＧ
溶液１０ ｍＬ，再分别改变Ｎａ２ＨＰ０４、ＮａＨ￣ＰＯ４、Ｎａ３ＰＯ４、
ＮａＢｒ、ＮａＣＩ、Ｎａ２ＳＯ４、ＮａＨｓＯ 在体系中的加人量，测定盐
及盐的用量对体系形成的影响。
实验结果表明，ＮａＢｒ、ＮａＣ１、ＮａＨＳＯ 的分相范围较
小且分相能力很差。Ｎａ３ＰＯ 的分相能力较前３种要好，
但容易形成三相，这对提取蛋白质就有一定的影响。当
Ｎａ２ｓＯ 浓度大于２．０ ｇ，体系出现分相，且成相情况较
好。考虑到较大浓度的盐溶液对蛋白质有盐析作用，使
蛋白质变性。且盐的使用量太大，会增加成本。ＰＥＧ／
Ｎａ２ＨＰＯ 双水相体系比ＰＥＧ／ＮａＨ２ＰＯ 体系更易形成，且
当加入１．５ ｇ Ｎａ２ＨＰＯ 时，相比接近于１，这样有利于萃
取。这可能是因为受Ｎａ２ＨＰＯ４和ＮａＨ２ＰＯ的酸度影响，体
系的酸度变化能明显的改变两相得电位差，从而影响
体系的形成问。且考虑盐浓度太大会出现盐析现象，所
以本试验选择ＰＥＧ／Ｎａ：ＨＰＯ４￣ｋ系为宜。
２．２ ＰＥＧ浓度对双水相体系的影响
分别量取１０ ｍＬ １０％、１５％、２０％、２５％ＰＥＧ溶液
于４个２０ ｍＬ［Ｅ色管中，再分别加１．５ ｇ Ｎａ２ＨＰＯ ，在３５℃
下恒温１０ｍｉｎ后，冷却静置，成柑晴况见表１。
表１不同浓度的ＰＥＧ溶液对双水相体系形成的影响
Ｔａｂｌｅ １ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆｄｉｆｅｒｅｎｔ ＰＥＧ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｎ ａｑｕｅｏｕｓ ｔｗｏ－
ｐｈａｓｅ ｓｙｓｔｅｍｓ
由表１可见，随着ＰＥＧ浓度的增加，相比也减小。可
能是随着ＰＥＧ浓度的增加，黏度变大，相界面张力也增
大，溶质在相间的传递和在相中的扩散阻力大大增加，
反而使得相比减小网。所以本实验选择浓度为１０％的
ＰＥＧ溶液为宜。
２．３鹰嘴豆粉加入量对萃取率的影响
于６个５０ ｍＬ离心管中分别加２０ ｍＬ １０％ＰＥＧ溶
液，然后再１ＪＩ１３ ｇ Ｎａ２ＨＰ０４，在３５℃下恒温溶解，使其充
分分相，／ｒｌ－Ｎ）Ｊ￣人鹰嘴豆豆粉０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８ ｇ，
６０
５５
瓣
鬈５０
＊
４５
４０
０．３ ０．４ ０．５ ０．６ ０．７ ０．８
鹰嘴豆粉重量／ｇ
图Ｉ厦嘴豆粉加入量对犟取翠的影响
Ｆｉｇ．１ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｃｈｉｃｋｐｅａｓ ｐｏｗｅｒ ｃｏｎｔｅｎｔ ｔｏ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
由图１可知，随着豆粉量的增加，溶解在下相的蛋
白质的量也逐渐增多，萃取率也逐渐增大，当增大到一
定位置后开始出现缓慢的下降，这可能是因为蛋白质
在下相的溶解度达最大值，且豆粉量过多会减少豆粉
、斟 粹 卜
与水的接触，从而使得溶解度稍微有点下降。当豆粉量
∞
在接近０．７敢 萃取率达最大值６０．１５％，所以本试验选
择豆粉量选择为０．７ ｇ为宜。
２．４温度对萃取率的影响
于５个５０ ｍＬ离心管中分￣ＪＩＪＪＪ１］２ｏ ｍＬ １０％ＰＥＧ溶
液、然后再加３ ｇ Ｎａ２ＨＰＯ ，在３５℃下恒温溶解，使其充
分分相，分别加入０．７ ｇ鹰嘴豆粉，分别在３０、３５、４０、４５、
５０℃下恒温超声相同的时间，然后在其他相同条件下
测各条件下的鹰嘴豆蛋白萃取率，结果如图２所示。
３Ｏ ３５ ４０ ４５ ５Ｏ
温度代
图２温度对萃取率的影响
Ｆｉｇ．２ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｔｏ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
由图２可以看出，随着温度的上升，萃取率也逐渐
增大，温度升高能够加速分子运动，也可以增大蛋白质
的溶解度。但考率到温度太高会使蛋白质变性，所以本
实验选择温度为４０℃。
２．５恒温超声时间对萃取率的影响
于５个５０ ｍＬ离心管中分别加２０ ｍＬ １０％ＰＥＧ溶
液、然后再加３ ｇＮａ２ＨＰＯ ，在３５℃下恒温溶解，使其充
分分相，加入０．７ ｇ的鹰嘴豆粉，在４０℃的温度下进行
Ｉ－＝＝２ 魏玲，等：ＰＥＧ（６０００）一Ｎａ２ＨＰ０４双水相体系在鹰嘴豆蛋白萃取中的应用 基础研究
恒温超声，分别超声５、１０、１５、２０、２５ ｍｉｎ，然后在其它相 ６３．４１％。而且太酸、太碱都会使蛋白质变性嗡。
同条件下测各条件下的鹰嘴豆蛋白萃取率，结果如图３
所示。
仉 ∞ 铋
２．７鹰嘴豆蛋白质的萃取率
在５０ ｍＬ大号离心管中￣１１２ｏ ｍＬ １０％ＰＥＧ溶液，加
３ ｇ Ｎａ２ＨＰＯ ，在３５℃下恒温使其加快溶解，使体系充
分分相，调节体系ｐＨ为７．５，然后冷却至室温，然后加
０．７ ｇ（精确到０．０００ １ ｇ）鹰嘴豆粉，振荡使豆粉充分溶
褂
解，在４０℃下恒温超声１５ｍｉｎ，取出离心（大约３０００ｒ／ｍｉｎ）
料
时ｌ司／ｍｉｎ
圈３恒温超声时间对萃取率的影响
Ｆｉｇ．３ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆｕＲｒａｓｏｕｎｄｔｉｍｅｔｏｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
从图３可知，随着恒温超声时间的加长，萃取率也
逐渐增大，超声时间加长可以使体系充分与豆粉接触，
大大提高了体系溶解蛋白质的量，从而使得下相的萃
取率增大。从图３中可以看出当恒温超声超过１５ ｍｉｎ
后，萃取率就基本不再上升。当恒温超声时间为
１５ ｍｉｎ，此时萃取率为已达６３．４ｌ％，所以本试验选择
恒温超声时间为１５ ｍｉｎ。
２．６体系ｐＨ对萃取率的影响
于５个５０ ｍＬ离心管中分别加２０ ｍＬ １０％ＰＥＧ溶
液、然后再加３ ｇ Ｎａ２ＨＰＯ４，在３５℃下恒温溶解，使其充
分分相，利用Ｂ—Ｒ缓冲溶液调节体系ｐＨ分别为６、７、
７．５、８、９，然后在其它相同条件下测各条件下的萃取
率，结果如图４所示。
６２
６Ｏ
拊
５８
５６
ｐＨ
圈４ ｐＨ对萃取率的影响
Ｆｉｇ．２ ｐＨ ｉｎ ａｑｕｅｏｕｓ ｔｗｏ－ｐｈａｓｅ ｓｙｓｔｅｍ ｔｏ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
由图４可知，体系ｐＨ对被萃取物的分配有很大的
影响，体系的ｐＨ变化能明显的改变两相得电位差，体
系ｐＨ与蛋白质的等电点相差越大，蛋白质在两相中的
分配越不均匀。可以看出随着ｐＨ的增大，萃取率呈现
先上升后下降的趋势，当ｐＨ ７．５时，萃取率达最大
５ ｍｉｎ １０ ｍｉｎ后，取下相测其含氮量，数据见表２。
表２蛋白质的萃取率
Ｔａｂｌｅ ２ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆａｄｄｉｔｉｏｎ ｏｆｏｆｃｈｉｃｋｐｅａｓ ｐｏｗｅｒ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｎ
ｐｒｏｔｅｉｎ ｐａｒｔｉｔｉｏｎｉｎｇ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ
由表２可知体系的萃取率为６３．４６％。
３结论 ．
本文采用ＰＥＧ／ＮａｚＨＰＯ 双水相体系萃取鹰嘴豆中
的蛋白质，具有条件温和、提取速度快、操作简便、价
廉，尤其无毒、无害，有利于后期对蛋白质的纯化及使
用。
１）ＰＥＧ／Ｎａ ＨＰＯ 双水相体系在适宜的萃取条件下
能够对鹰嘴豆蛋白进行提取是可行的。
２）实验结果表明最佳萃取条件为：ＰＥＧ（６０００）ＩＯ％，
ＰＥＧ—Ｎａ２ＨＰＯ４的质量比为１：１．５，ｐＨ为７．５，温度柏℃，豆
粉加入量为０．７ ｇ。
３）ＰＥＧ／Ｎａ２ＨＰＯ４双水相体系对鹰嘴豆蛋白的提取
时蛋白质主要集中在下相。
４）此条件下的萃取率为６３．４６％。
参考文献：
【１】阿米娜，阿布力米提，祖丽哈娅提，等．诺胡提（鹰嘴豆）的开发利
用研究【Ｊ］．新疆农业科学，２００２，３９（１）：４５－４７
［２ 苏永祥，２】孙跃枝．双水相萃取技术的研究现状及应用【Ｊ】．焦作师范
高等专科学校学报，２００７，２３（３）：６３—６５
【３】杨善升，陆文聪，包伯荣．双水相萃取技术及其应用【Ｊ】．化学工程
师，２００４，１０３（４）：３７—４０
【４】王俊华，杨沽，付建红，等．白地霉Ｃｒｙｙｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ￣肪酶
的双水相萃取【Ｊ】．中国生物工程杂志，２００７，２７（６）：７１—７５
【５】胡松青，李琳，肖蕾，等．ＰＥＧ，磷酸盐双水相系统及ＢＳＡ在其中的
分配特性［Ｊ］．广西大学学报，２００２，２７（１）：３０—３４
【６６】 王旭，周庆礼．ＰＥＧ／（ＮＩ－Ｌ）￣０４ｊ叹水相萃取法提取果胶酶的研究嘲．
食品研究与开发，２００７，２８（９）：３４—３６
收稿日期：２０１０－１１－１３
2024年6月13日发(作者：候梓露)
基础研究
食品研究与开发
Ｆｏｏｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏ
２０１１年７月
第３２卷第７期 ２ｉ
＝＝－
ＰＥＧ（６０００）一Ｎａ２ＨＰｏ４双水相体系在鹰嘴豆
蛋白萃取中的应用
魏玲。李学琴。盂宪锋，薛来奇
（昌吉学院，新疆昌吉８３１１００）
摘要：￣－ＰＥＧ（６０００）一Ｎａ２ＨＰｏ４双水相萃取鹰嘴豆蛋白进行研究，考察ＰＥＧ的浓度、Ｎａ：ＨＰＯ 的量、恒温超声时间、ｐＨ、
温度等因素对蛋白质萃取率的影响。结果表明：该双水相对鹰嘴豆蛋白的最佳萃取条件：ＰＥＧ（６０００）浓度为１０％．
ＰＥＧ－ｂＮａ２ＨＰＯ４的质量比为１：Ｉ．５，ｐＨｉ７．５，温度４０℃，在此条件下蛋白质萃取率可达到６３．４６％。
关键词：ＰＥＧ（６０００）一Ｎａ２ＨＰＯ４双水相；鹰嘴豆蛋白质；萃取；工艺条件
Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｈｉｃｋｌ￣Ｉｅａ Ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ（ＰＥＧ－ＮａｚＨＰＯ４）Ａｑｕｅｏｕｓ Ｔｗｏ—Ｐｈａｓｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ
ＷＥＩ Ｌｉｎｇ，ＬＩ Ｘｕｅ—Ｑｉｎ，ＭＥＮＧ Ｘｉａｎ－Ｆｅｎｇ，ＸＵＥ Ｌａｉ－Ｑｉ
（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｃｈａｎｇｊｉ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｃｈａｎｇｊｉ ８３１１００，Ｘｉｎｊｉａｎｇ，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃｈｉｃｋｐｅａ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ（ＰＥＧ）－（ＮａＥＨＰＯ４）ａｑｕｅｏｕｓ ｔｗｏ—ｐｈａｓｅ
基金项目：昌吉学院科研基金资助项目（０８ＹＪＺＤ００１）
作者简介：魏玲（１９５６一），女（汉），教授，本科，主要从事应用分析的研究。
随着温度的升高黄酮提取率增加较快，温度达到
８０℃时提取率达到最大，综合各方面因素考虑，正交
试验提取温度以７０℃ ９０℃为宜。
２．２金花葵花黄酮正交试验结果及分析
浸提正交试验极差分析见表２，各因素对黄酮提
最佳工艺条件为Ａ Ｂ Ｃ，Ｄ。，即乙醇浓度６０％、温度
９０℃、时间４ ｈ、固液１：￣１：３５，最大提取率可达３８．６７％。
３结论
本试验结果表明：影响金花葵花总黄酮提取率的
因素依次为：浸提温度＞浸提时间＞固液比＞乙醇浓
取率的影响程度各不相同，大小依次为Ｄ＞Ｃ＞Ｂ＞Ａ，
即提取温度对黄酮提取率的影响最大，其次是提取时
间和固液比，而乙醇浓度对黄酮提取率的影响最小。根
据直观法，可以得出回流法提取金花葵花中总黄酮的
表２正交试验结果分析
Ｔａｂｌｅ ２ Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｔｅｓｔ
度。最佳提取工艺为：乙醇浓度６０％、温度９０℃、时间
４ ｈ、固液１：ｇ１：３５，在此浸提条件下的最大提取率可达
３８．６７％
参考文献：
…１彭志兵，吴正平．高效液相色谱一质谱法分析金花葵花中金丝桃苷
【Ｊ］．安徽农业科学，２００８，３６（２３）：１００２８—１００２９
【２］刘临．原子吸收光谱法测定金花葵中微量元素［Ｊ］．微量元素与健
康研究，２００８，２５（４）：２７—２９
［３３Ｊ 张冬雪．水浸提沙棘果渣总黄酮工艺研究ｆＪ】．国际沙棘研究与开
发，２００８，１２（６）：１０—１３
【４ 张海生，４Ｊ陈锦屏．蜂蛹黄酮的提取及体外抗氧化作用的研究［Ｊ］．食
品科学，２００８，２９（２）：１５８—１６２
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服务，２００９，２６（１０）：１２７，１３８
收稿日期：２０１０—１２—０９
－＝＝２２ 魏玲，等：ＰＥＧ（６０００）一Ｎａ２ＨＰＯ 双水相体系在鹰嘴豆蛋白萃取中的应用 基础研究
ｓｙｓｔｅｍｓ ｗａｓ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ．Ｔｈｅ ｍａｉｎ ｆａｃｔｏｒｓ ｏｎ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ｃｈｉｃｋｐｅａ ｐｒｏｔｅｉｎ ｗｅｌ＇ｅ ｄｉｓｃｕｓｓｅｄ Ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｔｈｅ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＰＥＧ，ｔｈｅ ｗｅｉｇｈｔ ｏｆ Ｎａ２ＨＰＯ ｔｈｅ ｔｉｍｅ ｏｆ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ，ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｃｏｎｄｉｉｔｏｎ，ｐＨ．Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ
ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｏｆｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ｃｈｉｃｋｐｅａ ｐｒｏｔｅｉｎ ｗｅｒｅ ａｂｏｕｔ ＰＥＧ（６０００）１０％，ｍａｓｓ ｒａｔｉｏ ｆｏＰＥＧ ａｎｄ Ｎａ２ＨＰＯ４ １：１．５，
ｐＨ ７．５，ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ４０ ｏＣ．Ｆｉｎａｌｌｙ，ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ ａｂｏｖｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｙｉｅｌｄ
ｗａｓ６３．４６％．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：（ＰＥＧ）一（Ｎａ２ＨＰＯ４）ａｑｕｅｏｕｓｔｗｏ－ｐｈａｓｅｓｙｓｔｅｍｓ；ｃｈｉｃｋｐｅａｐｒｏｔｅｉｎ；ｅｘｔｒａｃｔｉｎ￣ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｃｏｎｄｉｉｔｏｎｓ
蛋白质在细胞和生物体的生命活动过程中，起着
氢钠（ＮａＨＳＯ ）；硫酸，氢氧化钠，硫酸铜，硫酸钾，溴甲
十分重要的作用。鹰嘴豆就是一种富含蛋白质的豆类 酚绿，甲基红，乙醇；所有试剂均为分析纯。
植物，新疆的木垒县是鹰嘴豆的主产区。富含多种植物
ＡＢ２０４一Ｎ型电子天平（精度０．０００ １ ｇ）：上海天平
蛋白和１０多种氨基酸等成分。其中纯蛋白质含量高达
厂；ＨＨ—Ｓ恒温水浴锅（精度０．１℃）：江苏金坛县医用仪
２８％以上，其中人体必需的８种氨基酸全部具备，而且 器厂；ＫＱ一１００型超声波清洗机：昆山市超声仪器有限
含量比燕麦还要高出２倍以上【”。由于蛋白质的市场价
公司；ＴＧＬ一１６台式高速离心机：金坛市恒丰仪器厂；微
格昂贵，提高回收率能带来巨大的经济效益，如何提取
量凯氏定氮仪。
高纯度的蛋白质，而且还要使其不失活，这一直是一项
１．２方法
艰巨的工作，所以有关蛋白质在分离纯化中的失活及
１．２．１ 双水相体系的选取及鹰嘴豆蛋白的萃取
其对策在近年来受到很大的关注。
于２０ ｍＬ比色管中，依次加人不同的盐和不同浓度
传统的蛋白质的提取方法对蛋白质的提取都能 的ＰＥＧ溶液，配成不同质量比的体系，充分振荡，并放
得到较高的产率，但对蛋白的活性都有很大的影响。８０
在恒温水浴锅中恒温至盐完全溶解，取出后冷却至室
年代以来，双水相萃取技术是研究比较热门的一种分 温，记录上下相体积比，从而选择相比最佳的双水相体
离技术。双水相萃取技术是通过溶质在两水相之间分
系。在此双水相体系中加入一定量的鹰嘴豆粉，振荡使
配系数的差异而进行萃取的技术。双水相萃取在提取 其充分溶解，并在一定温度下超声一定时间后，取出离
生物活性物质方面有：分相时间短；在接近生理环境的
心５ ｍｉｎ～１０ ｍｉｎ，取下相，测其蛋白质含量，从而得出该
体系中进行萃取，不会引起生物活性物质失活或变性； 体系对鹰嘴豆蛋白的萃取率。
不存在有机溶剂的残留问题，对人体无害；分离过程经
蛋白凰 ：Ｖ２－Ｖ，ｘＮ—ｘ ０．０１４ｘ６．２５×１００
济、简单、能够连续操作；操作条件温和等优点 。正是
ｗ
双水相萃取有如此诸多的优势，这种分离技术已经应
式中： 。为滴定时用去的０．０１ ｍｏＦＬ标准硫酸溶
用到生物活性物质的分离提纯，例如在多肽、氨基酸、
液，ｍＬ；Ｖ 为空白滴定是用去的０．０１ ｍｏｌ／Ｌ标准硫酸溶
酶、金属离子、植物有效成分等方面的研究，它的优势
液，ｍＬ；Ｎ为硫酸标准溶液的当量浓度，ｍｏ］／Ｌ；０．０１４为
逐渐得到了体现。但用双水相萃取技术来萃取豆类蛋
１ ｍｇ当量氮的克数，ｇ；６．２５为氮的蛋白质换算系数；Ｗ
白质的研究还少见报道。本研究提出采用ＰＥＧ（６０００）－
为样品克数，ｇ。
Ｎａ２ＨＰ０４￣水相体系来萃取鹰嘴豆豆粉中的蛋白质。考
萃取率 ＝ ／］／１ ｘｌ００
察了不同的盐、不同的ＰＥＧ浓度对双水相形成的影响，
竹２
以及通过改变鹰嘴豆粉量、酸度、温度和恒温超声时间
式中： 为富含蛋白质相中蛋白质含量，ｇ；Ｍ２￣１］
来选择最佳萃取条件，并在该条件下对鹰嘴豆中蛋白 人体系的鹰嘴豆豆粉中蛋白质的含量，ｇ。
质进行萃取的研究。实验结果证明此方法是可行的。 １．２．２鹰嘴豆蛋白的萃取
准确称取鹰嘴豆粉１５ ｇ－ｒ￣３Ｌ氏定氮瓶中，ＪＪＩＡ２５ ｍＬ
１材料与方法
浓硫酸，再称０．２ ｇ无水硫酸铜和１０ ｇ硫酸钾，加热消化
１．１试剂及仪器
至溶液呈蓝绿色后，再加热消化３０ ａｒｉｎ，冷却至室温，
鹰嘴豆：（市售），研碎后，１２０目过筛。
转入到１００ ｍＬ容量瓶中，加水稀释至刻度线。采用微量
聚乙二醇６ＯＯＯ（ＰＥＧ）；氯化钠（ＮａＯ），溴化钠
凯氏定氮法测该溶液中的含氮量，从而计算出鹰嘴豆
（ＮａＢｒ），磷酸氢二钠（ＮａｚＨＰＯ ），磷酸二氢钠 豆粉中蛋白质的含量。
（ＮａＨ２ＰＯ ），磷酸钠（Ｎａ，Ｐ０ ），硫酸钠（Ｎ ０４），亚硫酸
在５０ ｍＬ离心管中分别加２Ｏ ｍＬ １０％ＰＥＧ溶液、然
基础研究 魏玲，等：ＰＥＧ（６０００）一Ｎａ２ＨＰ０４双水相体系在鹰嘴豆蛋白萃取中的应用
２３＝＝＝一
后再加３ ｇ Ｎａ２ＨＰ０４，在３５ ｃＣ下恒温溶解，使其充分分
相，加０．７００ ０ ｇ鹰嘴豆粉，充分振荡使豆粉充分溶解，
恒温超声１５ ｍｉｎ后，取出离心（大约３ ０００ ｒ／ｍｉｎ）３ ｍｉｎ～
然后分别在同一条ｔ￣－ｖ测各条件下的鹰嘴豆蛋白萃取
率，结果如图ｌ所示。
５ ａｒｉｎ，用微量凯氏定氮法测下相的含氮量，根据鹰嘴
豆粉中的蛋白质含量计算出下相的萃取率。
２结果与讨论
２．１盐及其加入量对双水相体系的影响
于一系列的２０ ｍＬ比色管中，分别加入ｌ０％ＰＥＧ
溶液１０ ｍＬ，再分别改变Ｎａ２ＨＰ０４、ＮａＨ￣ＰＯ４、Ｎａ３ＰＯ４、
ＮａＢｒ、ＮａＣＩ、Ｎａ２ＳＯ４、ＮａＨｓＯ 在体系中的加人量，测定盐
及盐的用量对体系形成的影响。
实验结果表明，ＮａＢｒ、ＮａＣ１、ＮａＨＳＯ 的分相范围较
小且分相能力很差。Ｎａ３ＰＯ 的分相能力较前３种要好，
但容易形成三相，这对提取蛋白质就有一定的影响。当
Ｎａ２ｓＯ 浓度大于２．０ ｇ，体系出现分相，且成相情况较
好。考虑到较大浓度的盐溶液对蛋白质有盐析作用，使
蛋白质变性。且盐的使用量太大，会增加成本。ＰＥＧ／
Ｎａ２ＨＰＯ 双水相体系比ＰＥＧ／ＮａＨ２ＰＯ 体系更易形成，且
当加入１．５ ｇ Ｎａ２ＨＰＯ 时，相比接近于１，这样有利于萃
取。这可能是因为受Ｎａ２ＨＰＯ４和ＮａＨ２ＰＯ的酸度影响，体
系的酸度变化能明显的改变两相得电位差，从而影响
体系的形成问。且考虑盐浓度太大会出现盐析现象，所
以本试验选择ＰＥＧ／Ｎａ：ＨＰＯ４￣ｋ系为宜。
２．２ ＰＥＧ浓度对双水相体系的影响
分别量取１０ ｍＬ １０％、１５％、２０％、２５％ＰＥＧ溶液
于４个２０ ｍＬ［Ｅ色管中，再分别加１．５ ｇ Ｎａ２ＨＰＯ ，在３５℃
下恒温１０ｍｉｎ后，冷却静置，成柑晴况见表１。
表１不同浓度的ＰＥＧ溶液对双水相体系形成的影响
Ｔａｂｌｅ １ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆｄｉｆｅｒｅｎｔ ＰＥＧ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｎ ａｑｕｅｏｕｓ ｔｗｏ－
ｐｈａｓｅ ｓｙｓｔｅｍｓ
由表１可见，随着ＰＥＧ浓度的增加，相比也减小。可
能是随着ＰＥＧ浓度的增加，黏度变大，相界面张力也增
大，溶质在相间的传递和在相中的扩散阻力大大增加，
反而使得相比减小网。所以本实验选择浓度为１０％的
ＰＥＧ溶液为宜。
２．３鹰嘴豆粉加入量对萃取率的影响
于６个５０ ｍＬ离心管中分别加２０ ｍＬ １０％ＰＥＧ溶
液，然后再１ＪＩ１３ ｇ Ｎａ２ＨＰ０４，在３５℃下恒温溶解，使其充
分分相，／ｒｌ－Ｎ）Ｊ￣人鹰嘴豆豆粉０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８ ｇ，
６０
５５
瓣
鬈５０
＊
４５
４０
０．３ ０．４ ０．５ ０．６ ０．７ ０．８
鹰嘴豆粉重量／ｇ
图Ｉ厦嘴豆粉加入量对犟取翠的影响
Ｆｉｇ．１ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｃｈｉｃｋｐｅａｓ ｐｏｗｅｒ ｃｏｎｔｅｎｔ ｔｏ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
由图１可知，随着豆粉量的增加，溶解在下相的蛋
白质的量也逐渐增多，萃取率也逐渐增大，当增大到一
定位置后开始出现缓慢的下降，这可能是因为蛋白质
在下相的溶解度达最大值，且豆粉量过多会减少豆粉
、斟 粹 卜
与水的接触，从而使得溶解度稍微有点下降。当豆粉量
∞
在接近０．７敢 萃取率达最大值６０．１５％，所以本试验选
择豆粉量选择为０．７ ｇ为宜。
２．４温度对萃取率的影响
于５个５０ ｍＬ离心管中分￣ＪＩＪＪＪ１］２ｏ ｍＬ １０％ＰＥＧ溶
液、然后再加３ ｇ Ｎａ２ＨＰＯ ，在３５℃下恒温溶解，使其充
分分相，分别加入０．７ ｇ鹰嘴豆粉，分别在３０、３５、４０、４５、
５０℃下恒温超声相同的时间，然后在其他相同条件下
测各条件下的鹰嘴豆蛋白萃取率，结果如图２所示。
３Ｏ ３５ ４０ ４５ ５Ｏ
温度代
图２温度对萃取率的影响
Ｆｉｇ．２ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｔｏ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
由图２可以看出，随着温度的上升，萃取率也逐渐
增大，温度升高能够加速分子运动，也可以增大蛋白质
的溶解度。但考率到温度太高会使蛋白质变性，所以本
实验选择温度为４０℃。
２．５恒温超声时间对萃取率的影响
于５个５０ ｍＬ离心管中分别加２０ ｍＬ １０％ＰＥＧ溶
液、然后再加３ ｇＮａ２ＨＰＯ ，在３５℃下恒温溶解，使其充
分分相，加入０．７ ｇ的鹰嘴豆粉，在４０℃的温度下进行
Ｉ－＝＝２ 魏玲，等：ＰＥＧ（６０００）一Ｎａ２ＨＰ０４双水相体系在鹰嘴豆蛋白萃取中的应用 基础研究
恒温超声，分别超声５、１０、１５、２０、２５ ｍｉｎ，然后在其它相 ６３．４１％。而且太酸、太碱都会使蛋白质变性嗡。
同条件下测各条件下的鹰嘴豆蛋白萃取率，结果如图３
所示。
仉 ∞ 铋
２．７鹰嘴豆蛋白质的萃取率
在５０ ｍＬ大号离心管中￣１１２ｏ ｍＬ １０％ＰＥＧ溶液，加
３ ｇ Ｎａ２ＨＰＯ ，在３５℃下恒温使其加快溶解，使体系充
分分相，调节体系ｐＨ为７．５，然后冷却至室温，然后加
０．７ ｇ（精确到０．０００ １ ｇ）鹰嘴豆粉，振荡使豆粉充分溶
褂
解，在４０℃下恒温超声１５ｍｉｎ，取出离心（大约３０００ｒ／ｍｉｎ）
料
时ｌ司／ｍｉｎ
圈３恒温超声时间对萃取率的影响
Ｆｉｇ．３ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆｕＲｒａｓｏｕｎｄｔｉｍｅｔｏｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
从图３可知，随着恒温超声时间的加长，萃取率也
逐渐增大，超声时间加长可以使体系充分与豆粉接触，
大大提高了体系溶解蛋白质的量，从而使得下相的萃
取率增大。从图３中可以看出当恒温超声超过１５ ｍｉｎ
后，萃取率就基本不再上升。当恒温超声时间为
１５ ｍｉｎ，此时萃取率为已达６３．４ｌ％，所以本试验选择
恒温超声时间为１５ ｍｉｎ。
２．６体系ｐＨ对萃取率的影响
于５个５０ ｍＬ离心管中分别加２０ ｍＬ １０％ＰＥＧ溶
液、然后再加３ ｇ Ｎａ２ＨＰＯ４，在３５℃下恒温溶解，使其充
分分相，利用Ｂ—Ｒ缓冲溶液调节体系ｐＨ分别为６、７、
７．５、８、９，然后在其它相同条件下测各条件下的萃取
率，结果如图４所示。
６２
６Ｏ
拊
５８
５６
ｐＨ
圈４ ｐＨ对萃取率的影响
Ｆｉｇ．２ ｐＨ ｉｎ ａｑｕｅｏｕｓ ｔｗｏ－ｐｈａｓｅ ｓｙｓｔｅｍ ｔｏ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
由图４可知，体系ｐＨ对被萃取物的分配有很大的
影响，体系的ｐＨ变化能明显的改变两相得电位差，体
系ｐＨ与蛋白质的等电点相差越大，蛋白质在两相中的
分配越不均匀。可以看出随着ｐＨ的增大，萃取率呈现
先上升后下降的趋势，当ｐＨ ７．５时，萃取率达最大
５ ｍｉｎ １０ ｍｉｎ后，取下相测其含氮量，数据见表２。
表２蛋白质的萃取率
Ｔａｂｌｅ ２ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆａｄｄｉｔｉｏｎ ｏｆｏｆｃｈｉｃｋｐｅａｓ ｐｏｗｅｒ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｎ
ｐｒｏｔｅｉｎ ｐａｒｔｉｔｉｏｎｉｎｇ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ
由表２可知体系的萃取率为６３．４６％。
３结论 ．
本文采用ＰＥＧ／ＮａｚＨＰＯ 双水相体系萃取鹰嘴豆中
的蛋白质，具有条件温和、提取速度快、操作简便、价
廉，尤其无毒、无害，有利于后期对蛋白质的纯化及使
用。
１）ＰＥＧ／Ｎａ ＨＰＯ 双水相体系在适宜的萃取条件下
能够对鹰嘴豆蛋白进行提取是可行的。
２）实验结果表明最佳萃取条件为：ＰＥＧ（６０００）ＩＯ％，
ＰＥＧ—Ｎａ２ＨＰＯ４的质量比为１：１．５，ｐＨ为７．５，温度柏℃，豆
粉加入量为０．７ ｇ。
３）ＰＥＧ／Ｎａ２ＨＰＯ４双水相体系对鹰嘴豆蛋白的提取
时蛋白质主要集中在下相。
４）此条件下的萃取率为６３．４６％。
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收稿日期：２０１０－１１－１３