2024年3月22日发(作者：由典)
2011
年
12
月
第
31
卷第
12
期
文章编号
：1001-6325（2011）12-1326-04
基础医学与临床
Basic＆ClinicalMedicine
December2011
Vol．31No．12
研究论文
重组
ACE2
抑制人脐动脉平滑肌细胞前纤维蛋白
－1
表达及增殖
于
12*32111
茜
，
钟久昌
，
金海燕
，
沈伟利
，
叶佳颖
，
郭俊明
，
周细武
（1.
宁波大学医学院附属李惠利医院
，
浙江宁波
315040；2.
上海交通大学医学院瑞金医院高血压研究所
医学基因组学国家重点实验室上海市血管生物学重点实验室
，
上海
200025；3.
上海交通大学医学院
瑞金医院临床心理科
，
上海
200025）
1（Profilin-1）
表达及细胞增
摘要
：
目的探讨重组血管紧张素转换酶
2（ACE2）
基因对血管平滑肌细胞前纤维蛋白
-
殖的影响
。
方法培养人脐动脉平滑肌细胞
（HUASMC），
用重组
ACE2
基因
（rACE2）
干预
，
进行血管紧张素Ⅱ
（Ang
Ⅱ
）
刺激实验
，1
表达
。
结果与对分别用
MTT
法
、
实时定量
PCR
及
Westernblot
检测
HUASMC
增殖与
Profilin-
HUASMC
中
Profilin-1
表达明显增高
（3.50±0.30vs1.00±0.10，P＜
照组相比
，Ang
Ⅱ
（100nmol/L）
刺激
6h
后
，
0.05）。
重组
ACE2
基因干预显著抑制上述增加
（1.73±0.12vs3.50±0.30，P＜0.05）。
结论
ACE2
基因过表达可
1
表达上调
。
明显逆转
HUASMC
中
Ang
Ⅱ诱导的
Profilin-
1；
高血压病
；
血管紧张素Ⅱ
；
细胞增殖
关键词
：
血管紧张素转换酶
2；
前纤维蛋白
-
中图分类号
：R544.109
文献标志码
：A
RecombinantACE2inhibitsProfilin-1expressionandcellproliferation
inhumanumbilicalarterialsmoothmusclecells
YUXi
1
，ZHONGJiu-chang
2*
，JINHai-yan
3
，SHENWei-li
2
，YEJia-ying
1
，GUOJun-ming
1
，ZHOUXi-wu
1
（larHypertensionResearchLaboratory，SchoolofMedicine，NingboUniversity，Ningbo315211；eyLaboratoryof
MedicalGenomics＆ShanghaiKeyLaboratoryofVascularBiology，InstituteofHypertension，RuijinHospital，SchoolofMedicine，
ShanghaiJiaoTongUniversity，Shanghai200025；．ofMentalHealth，RuijinHospital，SchoolofMedicine，Shanghai
JiaoTongUniversity，Shanghai200025，China）
Abstract：
Objective
Toinvestigatetheeffectsoftherecombinantangiotensin-convertingenzyme2（rACE2）gene
Theculturedhumanum-onProfilin-1expressionandcellproliferationinvascularsmoothmusclecells．
Methods
bilicalarterialsmoothmusclecells（HUASMC）werestimulatedbyAng
Ⅱ
inthepresenceorabsenceofrACE2
gene，HUASMCproliferationandProfilin-1expressionlevelweredeterminedwithMTT，real-timePCRandWest-
respectively．
Results
ernblotting，Comparedwiththecontrol，Profilin-1expressionwassignificantlyincreasedin
HUASMCs（3.50±0.30vs1.00±0.10；n=5～6，P＜0.05）bystimulatingwithAng
Ⅱ
（100nmol/L）for6
hours，whichwasinhibitedbyrACE2geneintervention（1.73±0.12vs3.50±0.30；n=5，6，P＜0.05）．
Con-
clusions
ACE2geneover-expressioncontributestothereversionoftheAng
Ⅱ
-inducedProfilin-1expressionand
proliferationinhumanumbilicalarterialsmoothmusclecells．
Keywords：
angiotensin-convertingenzyme2；Profilin-1；hypertension；angiotensin
Ⅱ
；cellproliferation
收稿日期
：2011－02－22
*
修回日期
：2011－06－15
81170246）；
上海市浦江人才计划项目
（11PJ1408300）
基金项目
：
国家自然科学基金
（30973522，
通信作者
（correspondingauthor）：jiuchangzhong@yahoo．com．cn
于茜重组
ACE2
抑制人脐动脉平滑肌细胞前纤维蛋白
－1
表达及增殖
1327
血管平滑肌细胞
（vascularsmoothmusclecell，
VSMC）
增殖与血管重塑是高血压病的病理特征
，
也
是导致高血压并发症
，
如脑卒中
、
脑出血及心
、
肾功
能衰竭的主要原因之一
［1］
。
前纤维蛋白
-1（Profilin-
1）
参与调控的肌动蛋白的聚合
－
解聚动态平衡
，
在
VSMC
增殖及血管重塑中起着极为重要的作用
，
其
表达及活性异常与高血压病的发生与发展密切相
关
［2－3］
。
血管紧张素转换酶
2（angiotensin-converting
enzyme2，ACE2）
是迄今发现的人类
ACE
第
1
个同
源基因
，
可催化血管紧张素Ⅱ
（angiotensin
Ⅱ
，
Ang
Ⅱ
）
转化为
Ang-（1-7），
是高血压病防治的一个
新候选基因
［4－6］
，
但其对
VSMC
增殖是否起调控作
用目前尚未阐明
。
本研究探讨重组
ACE2
基因对人
脐动脉血管平滑肌细胞
（HUASMC）Profilin-1
表达
及增殖的影响及其可能机制
。
1
材料与方法
1.1
人脐动脉平滑肌细胞的培养
、
鉴定及刺激实验
取正常人剖宫产脐带动脉
，
按常规方法原代培
养及鉴定人脐动脉血管平滑肌细胞
（HUASMC）
［1］
。
待细胞融合状态为
85%～90%
时换无血清培养基
培养
，
进行各种细胞刺激与干预实验
。
在
HUASMC
分别进行
Ang
Ⅱ剂量依赖性
（0、1、10、100
和
1000nmol/L）
及时间依赖性
（0、1、3、6、24
和
48h）
刺激实验
。
在有或无重组
ACE2
基因
（rACE2；
本研
究室保存
）
［1，4］
及
Ang-（1-7）
受体
Mas
拮抗剂
A779
的干预下
，
进行
Ang
Ⅱ刺激实验
。
细胞分为
4
组
：
对
照组
（n=6）；Ang
Ⅱ组
（n=6）；Ang
Ⅱ
+rACE2
干
预组
（n=5）；Ang
Ⅱ
+rACE2+A779
干预组
（n=
5）。
收集上述各组细胞并分别利用
MTT
法
、
实时定
量
PCR
及
Western
印迹法检测
HUASMC
增殖与
Profilin-1
表达
。
1.2
实时定量
PCR
检测
用引物设计软件
（Primer5.0）
设计人
Profilin-
1
和磷酸甘油醛脱氢酶
（GAPDH）
基因引物
（
表
1）。
采用
Trizol
试剂
（Invitrogen）
提取细胞总
RNA，
常规方法合成
cDNA。
使用
SYBRGreen
法
（TAKARA）
在荧光定量
PCR
扩增仪上进行扩增反
应
，
扩增程序为
50℃2min，95℃2min，95℃
30s，55℃30s，72℃30s，40
个循环
，
同时设
人
GAPDH
基因为内参
。
表
1
实时定量
PCR
引物
Table1Primersusedforreal-timePCR
gene
name
accessionNo．primer
product
length（bp）
Profilin-1NM_005022.2
forward：
5'-CCATCGTGGGCTACAAGGAC-3'
reverse：100
5'-TTGCCAACCAGGACACCC-3'
GAPDHNM_002046.3forward：
5'-ACCACAGTCCATGCCATCAC-3'
reverse：452
5'-TCCACCACCCTGTTGCTGTA-3'
1.3Westernblot
采用
BCA
法检测细胞总蛋白浓度
，
取
40
μ
g
细
胞总蛋白上样于
12%
聚丙烯酰胺凝胶中
，
电泳
3h
后通过电转移至
PVDF
膜
。
用
5%
脱脂奶粉室温封
闭
2h
后
，
一抗
4℃
孵育过夜
，
洗膜后用辣根过氧
化酶标记的二抗室温孵育
1h，
接着用化学发光
（ECL）
试剂盒显影曝光
。
最后对
Profilin-1
特异性
条带进行半定量分析
，
采用α
-tubulin
作为内对照
。
结果以目的蛋白
/
内对照吸光度值来表示
。
1.4MTT
检测
采用
MTT
法检测重组
ACE2
基因干预后细胞
增殖
。
具体操作严格按试剂盒说明书进行
。
设立空
白对照和阳性对照组
，
每个样品检测
3
次
，
取其平均
值
。
1.5
统计学分析
采用
SPSS16.0
软件进行统计分析
，
检测结果
以均数
±
标准差
（x
—
±s）
表示
。
采用单因素方差分
析及
t
检验
。
2
结果
2.1
细胞
Ang
Ⅱ剂量与时间刺激实验
与对照组相比
，Ang
Ⅱ呈剂量依赖性增加
HUASMC
中
Profilin-1
的
mRNA
表达
，
其中
100nmol/LAng
Ⅱ使其表达达到峰值
（P＜0.01）
（
图
1）。
选取
100nmol/LAng
Ⅱ进一步行时间依赖
性实验
，Ang
Ⅱ刺激
6h
后
Profilin-1
的表达水平达到
最高值
（P＜0.01）（
图
2）。
2.2
重组
ACE2
干预对
HUASMC
中
Profilin-1
蛋
白表达的影响
与对照组相比
，Ang
Ⅱ
（100nmol/L）
刺激
6h
1328
基础医学与临床
Basic＆ClinicalMedicine2011.31（12）
后
，HUASMC
中
Profilin-1
蛋白表达明显增加
（3.50
±0.30vs1.00±0.10）（P＜0.01），
经重组
ACE2
基
因干预治疗可显著抑制
Ang
Ⅱ诱导的
Profilin-1
蛋
白表达
（1.73±0.12vs3.50±0.30）（P＜0.05）。
而
Ang-（1-7）
受体
Mas
拮抗剂
A779
预处理可阻断
rACE2
的这种血管细胞保护效应
（3.06±0.19vs
1.73±0.12）（P＜0.05）（
图
3）。
2.3
重组
ACE2
基因干预对
HUASMC
增殖的影响
经
Ang
Ⅱ刺激后
HUASMC
增殖明显增加
（n=
5，6，P＜0.05），
而经重组
ACE2
基因干预治疗后细
胞增殖明显降低
（P＜0.05）（
图
4）。
3
讨论
前纤维蛋白
-1（Profilin-1）
是一种低分子质量的
肌动蛋白结合蛋白
，
广泛存在于真核细胞中
［1－3］
。
它能与许多蛋白质配体相互作用
，
是调控心血管系
统信号分子网络相互作用的一个重要枢纽
，
其表达
于茜重组
ACE2
抑制人脐动脉平滑肌细胞前纤维蛋白
－1
表达及增殖
1329
及活性异常与高血压病的发病密切相关
［1－2，7－10］
。
本研究室曾报道高血压大鼠血管
Profilin-1
表达上
调
，
且伴有丝裂原活化蛋白激酶
（MAPK）
磷酸化水
平增加
［10］
。
研究表明
，Profilin-1
可激活
MAPK
磷酸
化信号通路
，
促进肌动蛋白聚合及其细胞骨架动力
学改变
，
加重血管增殖及重塑形成
，
导致血管壁增厚
及腔直径减少
，
促使血管阻力增加
，
最终引起血压升
高
［1－2，8－10］
。
通过基因敲除技术使血管
Profilin-1
表
达下调后
，
血管
MAPK
磷酸化水平下降
，
血管增殖
重塑现象减轻
，
血压下降
［2］
。
由此推测
，Profilin-1
可能是一种新的高血压预测因子
。
本研究发现
，
在体外培养的
HUASMC
中
Ang
Ⅱ
可呈剂量依赖性增加
Profilin-1
表达
，
同时伴有细胞
增殖
。
提示
，Ang
Ⅱ可能通过促进
Profilin-1
表达造
成
VSMC
增殖及血管重塑
。ACE2
基因主要通过促
参考文献
：
1］ZhongJC，YeJY，JinHY，etal．Telmisartanattenuates
aortichypertrophyinhypertensiveratsbythemodulationof
ACE2andProfilin-1expression［J］．RegulPept，2011，
166：70－79．
2］Moustafa-BayoumiM，AlhajMA，El-SayedO，etal．Vas-
cularhypertrophyandhypertensioncausedbytransgenic
overexpressionofprofilin1［J］．JBiolChem，2007，282：
37632－37639．
3］RomeoGR，MoultonKS，KazlauskasA．Attenuatedex-
pressionofProfilin-1confersprotectionfromatherosclerosis
intheLDLreceptor－nullmouse［J］．CircRes，2007，
101：357－367．
4］ZhongJC，BasuR，GuoD，etal．Angiotensinconverting
enzyme2suppressespathologicalhypertrophy，myocardial
fibrosisandcardiacdysfunction［J］．Circulation，2010，
122：717－728．
5］
吴玮
，
钟久昌
，
郭俊明
．
血管紧张素转化酶
2
作为心血
管纤维化干预新靶点
［J］．
基础医学与临床
，2010，30：
778－781．
6］Castro-ChavesP，CerqueiraR，PintalhaoM，etal．New
进
Ang-（1-7）
的生成来对抗
Ang
Ⅱ
-AT1
信号的作
用
［4］
。Ang-（1-7）
可通过其特异性
Mas
受体促进缓
激肽
、
一氧化氮及前列腺素释放
，
发挥其扩血管
、
抗
氧化
、
抑制心血管增殖及重塑等生理作用
［4－5］
。
本
研究发现
，
经重组
ACE2
基因干预治疗后可抑制
HUASMC
中
Ang
Ⅱ诱导的
Profilin-1
表达水平增加及
Ang
Ⅱ的促细胞增殖效应
，
而应用
Mas
受体拮抗剂
A779
预处理干预后可阻断
rACE2
的这种效应
，
表
明
ACE2
的血管细胞保护作用可通过
Ang-（1-7）-
Mas
信号来实现
。ACE2
基因通过拮抗
Ang
Ⅱ的作
用
，
可调控
Profilin-1
介导的血管平滑肌细胞增殖重
塑信号通路
，
从而实现其血管保护功效
，
提示通过各
种手段干预
ACE2
及
Profilin-1
表达及活性
，
可望成
为高血压病等血管重塑性疾病防治的新途径
。
pathwaysoftherenin-angiotensinsystem：theroleofACE2
incardiovascularpathophysiologyandtherapy［J］．Expert
OpinTherTargets，2010，14：485－496．
7］CaglayanE，RomeoGR，KappertK，etal．Profilin-1isex-
pressedinhumanatheroscleroticplaquesandinduces
atherogeniceffectsonvascularsmoothmusclecells［J］．
PLoSOne，2010，5：e13608．
8］DingZ，GauD，DeasyB，etal．Bothactinandpolyproline
interactionsofProfilin-1arerequiredformigration，inva-
sionandcapillarymorphogenesisofvascularendothelial
cells［J］．ExpCellRes，2009，315：2963－2973．
9］HassonaMD，AbouelnagaZA，ElnakishMT．Vascularhy-
pertrophy-associatedhypertensionofprofilin1transgenic
mousemodelleadstofunctionalremodelingofperipheral
arteries［J］．AmJPhysiolHeartCircPhysiol，2010，298：
H2112－2120．
10］
叶佳颖
，
钟久昌
，
金海燕
，
等
．
替米沙坦对高血压大鼠
血管
Profilin-1
及
ERK
磷酸化水平的影响
［J］．
心血管
康复医学杂志
，2010，19：166－169．
［
［
［
［
［
［
［
［
［
［
2024年3月22日发(作者：由典)
2011
年
12
月
第
31
卷第
12
期
文章编号
：1001-6325（2011）12-1326-04
基础医学与临床
Basic＆ClinicalMedicine
December2011
Vol．31No．12
研究论文
重组
ACE2
抑制人脐动脉平滑肌细胞前纤维蛋白
－1
表达及增殖
于
12*32111
茜
，
钟久昌
，
金海燕
，
沈伟利
，
叶佳颖
，
郭俊明
，
周细武
（1.
宁波大学医学院附属李惠利医院
，
浙江宁波
315040；2.
上海交通大学医学院瑞金医院高血压研究所
医学基因组学国家重点实验室上海市血管生物学重点实验室
，
上海
200025；3.
上海交通大学医学院
瑞金医院临床心理科
，
上海
200025）
1（Profilin-1）
表达及细胞增
摘要
：
目的探讨重组血管紧张素转换酶
2（ACE2）
基因对血管平滑肌细胞前纤维蛋白
-
殖的影响
。
方法培养人脐动脉平滑肌细胞
（HUASMC），
用重组
ACE2
基因
（rACE2）
干预
，
进行血管紧张素Ⅱ
（Ang
Ⅱ
）
刺激实验
，1
表达
。
结果与对分别用
MTT
法
、
实时定量
PCR
及
Westernblot
检测
HUASMC
增殖与
Profilin-
HUASMC
中
Profilin-1
表达明显增高
（3.50±0.30vs1.00±0.10，P＜
照组相比
，Ang
Ⅱ
（100nmol/L）
刺激
6h
后
，
0.05）。
重组
ACE2
基因干预显著抑制上述增加
（1.73±0.12vs3.50±0.30，P＜0.05）。
结论
ACE2
基因过表达可
1
表达上调
。
明显逆转
HUASMC
中
Ang
Ⅱ诱导的
Profilin-
1；
高血压病
；
血管紧张素Ⅱ
；
细胞增殖
关键词
：
血管紧张素转换酶
2；
前纤维蛋白
-
中图分类号
：R544.109
文献标志码
：A
RecombinantACE2inhibitsProfilin-1expressionandcellproliferation
inhumanumbilicalarterialsmoothmusclecells
YUXi
1
，ZHONGJiu-chang
2*
，JINHai-yan
3
，SHENWei-li
2
，YEJia-ying
1
，GUOJun-ming
1
，ZHOUXi-wu
1
（larHypertensionResearchLaboratory，SchoolofMedicine，NingboUniversity，Ningbo315211；eyLaboratoryof
MedicalGenomics＆ShanghaiKeyLaboratoryofVascularBiology，InstituteofHypertension，RuijinHospital，SchoolofMedicine，
ShanghaiJiaoTongUniversity，Shanghai200025；．ofMentalHealth，RuijinHospital，SchoolofMedicine，Shanghai
JiaoTongUniversity，Shanghai200025，China）
Abstract：
Objective
Toinvestigatetheeffectsoftherecombinantangiotensin-convertingenzyme2（rACE2）gene
Theculturedhumanum-onProfilin-1expressionandcellproliferationinvascularsmoothmusclecells．
Methods
bilicalarterialsmoothmusclecells（HUASMC）werestimulatedbyAng
Ⅱ
inthepresenceorabsenceofrACE2
gene，HUASMCproliferationandProfilin-1expressionlevelweredeterminedwithMTT，real-timePCRandWest-
respectively．
Results
ernblotting，Comparedwiththecontrol，Profilin-1expressionwassignificantlyincreasedin
HUASMCs（3.50±0.30vs1.00±0.10；n=5～6，P＜0.05）bystimulatingwithAng
Ⅱ
（100nmol/L）for6
hours，whichwasinhibitedbyrACE2geneintervention（1.73±0.12vs3.50±0.30；n=5，6，P＜0.05）．
Con-
clusions
ACE2geneover-expressioncontributestothereversionoftheAng
Ⅱ
-inducedProfilin-1expressionand
proliferationinhumanumbilicalarterialsmoothmusclecells．
Keywords：
angiotensin-convertingenzyme2；Profilin-1；hypertension；angiotensin
Ⅱ
；cellproliferation
收稿日期
：2011－02－22
*
修回日期
：2011－06－15
81170246）；
上海市浦江人才计划项目
（11PJ1408300）
基金项目
：
国家自然科学基金
（30973522，
通信作者
（correspondingauthor）：jiuchangzhong@yahoo．com．cn
于茜重组
ACE2
抑制人脐动脉平滑肌细胞前纤维蛋白
－1
表达及增殖
1327
血管平滑肌细胞
（vascularsmoothmusclecell，
VSMC）
增殖与血管重塑是高血压病的病理特征
，
也
是导致高血压并发症
，
如脑卒中
、
脑出血及心
、
肾功
能衰竭的主要原因之一
［1］
。
前纤维蛋白
-1（Profilin-
1）
参与调控的肌动蛋白的聚合
－
解聚动态平衡
，
在
VSMC
增殖及血管重塑中起着极为重要的作用
，
其
表达及活性异常与高血压病的发生与发展密切相
关
［2－3］
。
血管紧张素转换酶
2（angiotensin-converting
enzyme2，ACE2）
是迄今发现的人类
ACE
第
1
个同
源基因
，
可催化血管紧张素Ⅱ
（angiotensin
Ⅱ
，
Ang
Ⅱ
）
转化为
Ang-（1-7），
是高血压病防治的一个
新候选基因
［4－6］
，
但其对
VSMC
增殖是否起调控作
用目前尚未阐明
。
本研究探讨重组
ACE2
基因对人
脐动脉血管平滑肌细胞
（HUASMC）Profilin-1
表达
及增殖的影响及其可能机制
。
1
材料与方法
1.1
人脐动脉平滑肌细胞的培养
、
鉴定及刺激实验
取正常人剖宫产脐带动脉
，
按常规方法原代培
养及鉴定人脐动脉血管平滑肌细胞
（HUASMC）
［1］
。
待细胞融合状态为
85%～90%
时换无血清培养基
培养
，
进行各种细胞刺激与干预实验
。
在
HUASMC
分别进行
Ang
Ⅱ剂量依赖性
（0、1、10、100
和
1000nmol/L）
及时间依赖性
（0、1、3、6、24
和
48h）
刺激实验
。
在有或无重组
ACE2
基因
（rACE2；
本研
究室保存
）
［1，4］
及
Ang-（1-7）
受体
Mas
拮抗剂
A779
的干预下
，
进行
Ang
Ⅱ刺激实验
。
细胞分为
4
组
：
对
照组
（n=6）；Ang
Ⅱ组
（n=6）；Ang
Ⅱ
+rACE2
干
预组
（n=5）；Ang
Ⅱ
+rACE2+A779
干预组
（n=
5）。
收集上述各组细胞并分别利用
MTT
法
、
实时定
量
PCR
及
Western
印迹法检测
HUASMC
增殖与
Profilin-1
表达
。
1.2
实时定量
PCR
检测
用引物设计软件
（Primer5.0）
设计人
Profilin-
1
和磷酸甘油醛脱氢酶
（GAPDH）
基因引物
（
表
1）。
采用
Trizol
试剂
（Invitrogen）
提取细胞总
RNA，
常规方法合成
cDNA。
使用
SYBRGreen
法
（TAKARA）
在荧光定量
PCR
扩增仪上进行扩增反
应
，
扩增程序为
50℃2min，95℃2min，95℃
30s，55℃30s，72℃30s，40
个循环
，
同时设
人
GAPDH
基因为内参
。
表
1
实时定量
PCR
引物
Table1Primersusedforreal-timePCR
gene
name
accessionNo．primer
product
length（bp）
Profilin-1NM_005022.2
forward：
5'-CCATCGTGGGCTACAAGGAC-3'
reverse：100
5'-TTGCCAACCAGGACACCC-3'
GAPDHNM_002046.3forward：
5'-ACCACAGTCCATGCCATCAC-3'
reverse：452
5'-TCCACCACCCTGTTGCTGTA-3'
1.3Westernblot
采用
BCA
法检测细胞总蛋白浓度
，
取
40
μ
g
细
胞总蛋白上样于
12%
聚丙烯酰胺凝胶中
，
电泳
3h
后通过电转移至
PVDF
膜
。
用
5%
脱脂奶粉室温封
闭
2h
后
，
一抗
4℃
孵育过夜
，
洗膜后用辣根过氧
化酶标记的二抗室温孵育
1h，
接着用化学发光
（ECL）
试剂盒显影曝光
。
最后对
Profilin-1
特异性
条带进行半定量分析
，
采用α
-tubulin
作为内对照
。
结果以目的蛋白
/
内对照吸光度值来表示
。
1.4MTT
检测
采用
MTT
法检测重组
ACE2
基因干预后细胞
增殖
。
具体操作严格按试剂盒说明书进行
。
设立空
白对照和阳性对照组
，
每个样品检测
3
次
，
取其平均
值
。
1.5
统计学分析
采用
SPSS16.0
软件进行统计分析
，
检测结果
以均数
±
标准差
（x
—
±s）
表示
。
采用单因素方差分
析及
t
检验
。
2
结果
2.1
细胞
Ang
Ⅱ剂量与时间刺激实验
与对照组相比
，Ang
Ⅱ呈剂量依赖性增加
HUASMC
中
Profilin-1
的
mRNA
表达
，
其中
100nmol/LAng
Ⅱ使其表达达到峰值
（P＜0.01）
（
图
1）。
选取
100nmol/LAng
Ⅱ进一步行时间依赖
性实验
，Ang
Ⅱ刺激
6h
后
Profilin-1
的表达水平达到
最高值
（P＜0.01）（
图
2）。
2.2
重组
ACE2
干预对
HUASMC
中
Profilin-1
蛋
白表达的影响
与对照组相比
，Ang
Ⅱ
（100nmol/L）
刺激
6h
1328
基础医学与临床
Basic＆ClinicalMedicine2011.31（12）
后
，HUASMC
中
Profilin-1
蛋白表达明显增加
（3.50
±0.30vs1.00±0.10）（P＜0.01），
经重组
ACE2
基
因干预治疗可显著抑制
Ang
Ⅱ诱导的
Profilin-1
蛋
白表达
（1.73±0.12vs3.50±0.30）（P＜0.05）。
而
Ang-（1-7）
受体
Mas
拮抗剂
A779
预处理可阻断
rACE2
的这种血管细胞保护效应
（3.06±0.19vs
1.73±0.12）（P＜0.05）（
图
3）。
2.3
重组
ACE2
基因干预对
HUASMC
增殖的影响
经
Ang
Ⅱ刺激后
HUASMC
增殖明显增加
（n=
5，6，P＜0.05），
而经重组
ACE2
基因干预治疗后细
胞增殖明显降低
（P＜0.05）（
图
4）。
3
讨论
前纤维蛋白
-1（Profilin-1）
是一种低分子质量的
肌动蛋白结合蛋白
，
广泛存在于真核细胞中
［1－3］
。
它能与许多蛋白质配体相互作用
，
是调控心血管系
统信号分子网络相互作用的一个重要枢纽
，
其表达
于茜重组
ACE2
抑制人脐动脉平滑肌细胞前纤维蛋白
－1
表达及增殖
1329
及活性异常与高血压病的发病密切相关
［1－2，7－10］
。
本研究室曾报道高血压大鼠血管
Profilin-1
表达上
调
，
且伴有丝裂原活化蛋白激酶
（MAPK）
磷酸化水
平增加
［10］
。
研究表明
，Profilin-1
可激活
MAPK
磷酸
化信号通路
，
促进肌动蛋白聚合及其细胞骨架动力
学改变
，
加重血管增殖及重塑形成
，
导致血管壁增厚
及腔直径减少
，
促使血管阻力增加
，
最终引起血压升
高
［1－2，8－10］
。
通过基因敲除技术使血管
Profilin-1
表
达下调后
，
血管
MAPK
磷酸化水平下降
，
血管增殖
重塑现象减轻
，
血压下降
［2］
。
由此推测
，Profilin-1
可能是一种新的高血压预测因子
。
本研究发现
，
在体外培养的
HUASMC
中
Ang
Ⅱ
可呈剂量依赖性增加
Profilin-1
表达
，
同时伴有细胞
增殖
。
提示
，Ang
Ⅱ可能通过促进
Profilin-1
表达造
成
VSMC
增殖及血管重塑
。ACE2
基因主要通过促
参考文献
：
1］ZhongJC，YeJY，JinHY，etal．Telmisartanattenuates
aortichypertrophyinhypertensiveratsbythemodulationof
ACE2andProfilin-1expression［J］．RegulPept，2011，
166：70－79．
2］Moustafa-BayoumiM，AlhajMA，El-SayedO，etal．Vas-
cularhypertrophyandhypertensioncausedbytransgenic
overexpressionofprofilin1［J］．JBiolChem，2007，282：
37632－37639．
3］RomeoGR，MoultonKS，KazlauskasA．Attenuatedex-
pressionofProfilin-1confersprotectionfromatherosclerosis
intheLDLreceptor－nullmouse［J］．CircRes，2007，
101：357－367．
4］ZhongJC，BasuR，GuoD，etal．Angiotensinconverting
enzyme2suppressespathologicalhypertrophy，myocardial
fibrosisandcardiacdysfunction［J］．Circulation，2010，
122：717－728．
5］
吴玮
，
钟久昌
，
郭俊明
．
血管紧张素转化酶
2
作为心血
管纤维化干预新靶点
［J］．
基础医学与临床
，2010，30：
778－781．
6］Castro-ChavesP，CerqueiraR，PintalhaoM，etal．New
进
Ang-（1-7）
的生成来对抗
Ang
Ⅱ
-AT1
信号的作
用
［4］
。Ang-（1-7）
可通过其特异性
Mas
受体促进缓
激肽
、
一氧化氮及前列腺素释放
，
发挥其扩血管
、
抗
氧化
、
抑制心血管增殖及重塑等生理作用
［4－5］
。
本
研究发现
，
经重组
ACE2
基因干预治疗后可抑制
HUASMC
中
Ang
Ⅱ诱导的
Profilin-1
表达水平增加及
Ang
Ⅱ的促细胞增殖效应
，
而应用
Mas
受体拮抗剂
A779
预处理干预后可阻断
rACE2
的这种效应
，
表
明
ACE2
的血管细胞保护作用可通过
Ang-（1-7）-
Mas
信号来实现
。ACE2
基因通过拮抗
Ang
Ⅱ的作
用
，
可调控
Profilin-1
介导的血管平滑肌细胞增殖重
塑信号通路
，
从而实现其血管保护功效
，
提示通过各
种手段干预
ACE2
及
Profilin-1
表达及活性
，
可望成
为高血压病等血管重塑性疾病防治的新途径
。
pathwaysoftherenin-angiotensinsystem：theroleofACE2
incardiovascularpathophysiologyandtherapy［J］．Expert
OpinTherTargets，2010，14：485－496．
7］CaglayanE，RomeoGR，KappertK，etal．Profilin-1isex-
pressedinhumanatheroscleroticplaquesandinduces
atherogeniceffectsonvascularsmoothmusclecells［J］．
PLoSOne，2010，5：e13608．
8］DingZ，GauD，DeasyB，etal．Bothactinandpolyproline
interactionsofProfilin-1arerequiredformigration，inva-
sionandcapillarymorphogenesisofvascularendothelial
cells［J］．ExpCellRes，2009，315：2963－2973．
9］HassonaMD，AbouelnagaZA，ElnakishMT．Vascularhy-
pertrophy-associatedhypertensionofprofilin1transgenic
mousemodelleadstofunctionalremodelingofperipheral
arteries［J］．AmJPhysiolHeartCircPhysiol，2010，298：
H2112－2120．
10］
叶佳颖
，
钟久昌
，
金海燕
，
等
．
替米沙坦对高血压大鼠
血管
Profilin-1
及
ERK
磷酸化水平的影响
［J］．
心血管
康复医学杂志
，2010，19：166－169．
［
［
［
［
［
［
［
［
［
［