2024年3月29日发(作者：蔡悦可)

.血清溶血素含量的测定

1 血清溶血素含量的测定

仪器：离心机、37℃恒温水浴、冰浴、扫描酶标分光光度仪、无菌过滤装置

试剂： 1. 20％压积绵羊红细胞(SRBC)生理盐水细胞混悬液，

2.10％SRBC混悬液，生理盐水，

3.以生理盐水1：10稀释的豚鼠血清1 ml

4.都氏试剂（碳酸氢钠1.0 g、氰化钾0.05g、高铁氰化钾0.2 g、蒸馏水1000 m1）

3 m1

于给药第2天，每鼠腹腔注射20％压积绵羊红细胞(SRBC)生理盐水细胞混悬液0.2

ml，连续给药5天，于最后一次给药后1 h，从小鼠眼眶静脉丛取血，离心分离血清，取

血清用生理盐水稀释500倍，取稀释血清1 ml置试管中，加10％SRBC混悬液0.5 ml，

置冰浴，再加入以生理盐水1：10稀释的豚鼠血清1 ml混合，另设不加血清的空白对照。

移置37℃恒温水浴保温10 min后，立即移冰浴终止反应。用2000r／min离心10 min，

取上清1 ml，加都氏试剂（碳酸氢钠1.0 g、氰化钾0.05g、高铁氰化钾0.2 g、蒸馏水

1000 m1）3 m1，混匀放置10分钟，取上清液用96孔板于扫描酶标分光光度仪540 nm

处比色，测吸光度值(OD)。另取10％SRBC混悬液0.25 ml加都氏试剂3.75 ml，同上测

定OD值，作为半数溶血值。血清溶血素含量以半数溶血值(HC

50

)表示。按下式计算：HC

50

=

样品的OD值／SRBC半数溶血时的OD值×稀释倍数。

淋巴细胞转化

仪器

CO

2

培养箱、离心机、显微镜、无菌过滤装置、组织培养箱。各种吸管

试剂

PHA溶液:称取PHA，用RPMI-1640培养液配成500-1000ug/ml.

RPMI-1640培养液：无菌RPMI-1640培养液中加入20%小牛血清，青霉素（100U/ml)

和链霉素（100ug/ml）用3.5%NaHCO

3

调节PH7.2-7.4,无菌分装，4℃备用

淋巴细胞分离液

抗凝用肝素纳溶液（50U/ml).

方法（详见实验指导P55）

分离抗凝血中的淋巴细胞，将悬液（3×10

6

/ml）注入含PHA的RPMI-1640培养液

小瓶，使PHA最终浓度为50ug/ml,37℃，5%CO

2

培养箱，72h；吸弃2/3上清液，取

底层细胞悬液，移入试管，2000rpm，10min。弃上清，吹打，涂片，干后瑞氏染色，镜

下观察，计算转化率。

结果

转化率=转化的淋巴细胞数（含过渡性）/每份标本淋巴总数*100%

2024年3月29日发(作者：蔡悦可)

.血清溶血素含量的测定

1 血清溶血素含量的测定

仪器：离心机、37℃恒温水浴、冰浴、扫描酶标分光光度仪、无菌过滤装置

试剂： 1. 20％压积绵羊红细胞(SRBC)生理盐水细胞混悬液，

2.10％SRBC混悬液，生理盐水，

3.以生理盐水1：10稀释的豚鼠血清1 ml

4.都氏试剂（碳酸氢钠1.0 g、氰化钾0.05g、高铁氰化钾0.2 g、蒸馏水1000 m1）

3 m1

于给药第2天，每鼠腹腔注射20％压积绵羊红细胞(SRBC)生理盐水细胞混悬液0.2

ml，连续给药5天，于最后一次给药后1 h，从小鼠眼眶静脉丛取血，离心分离血清，取

血清用生理盐水稀释500倍，取稀释血清1 ml置试管中，加10％SRBC混悬液0.5 ml，

置冰浴，再加入以生理盐水1：10稀释的豚鼠血清1 ml混合，另设不加血清的空白对照。

移置37℃恒温水浴保温10 min后，立即移冰浴终止反应。用2000r／min离心10 min，

取上清1 ml，加都氏试剂（碳酸氢钠1.0 g、氰化钾0.05g、高铁氰化钾0.2 g、蒸馏水

1000 m1）3 m1，混匀放置10分钟，取上清液用96孔板于扫描酶标分光光度仪540 nm

处比色，测吸光度值(OD)。另取10％SRBC混悬液0.25 ml加都氏试剂3.75 ml，同上测

定OD值，作为半数溶血值。血清溶血素含量以半数溶血值(HC

50

)表示。按下式计算：HC

50

=

样品的OD值／SRBC半数溶血时的OD值×稀释倍数。

淋巴细胞转化

仪器

CO

2

培养箱、离心机、显微镜、无菌过滤装置、组织培养箱。各种吸管

试剂

PHA溶液:称取PHA，用RPMI-1640培养液配成500-1000ug/ml.

RPMI-1640培养液：无菌RPMI-1640培养液中加入20%小牛血清，青霉素（100U/ml)

和链霉素（100ug/ml）用3.5%NaHCO

3

调节PH7.2-7.4,无菌分装，4℃备用

淋巴细胞分离液

抗凝用肝素纳溶液（50U/ml).

方法（详见实验指导P55）

分离抗凝血中的淋巴细胞，将悬液（3×10

6

/ml）注入含PHA的RPMI-1640培养液

小瓶，使PHA最终浓度为50ug/ml,37℃，5%CO

2

培养箱，72h；吸弃2/3上清液，取

底层细胞悬液，移入试管，2000rpm，10min。弃上清，吹打，涂片，干后瑞氏染色，镜

下观察，计算转化率。

结果

转化率=转化的淋巴细胞数（含过渡性）/每份标本淋巴总数*100%