2024年9月23日发(作者：卜叶欣)
２０１１年１２月
中国比较医学杂志
ＣＨＩＮＥＳＥ ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＣＯＭＰＡＲＡＴＩＶＥ ＭＥＤＩＣＩＮＥ
Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２０１１
Ｖｏ１．２ｌ ＮＯ．１２
第２ｌ卷第１２期
ＡＰＰ６９５ ％Ｌ突 变转基因小鼠的建立和
病理表型动态分析
王冬梅，李万波，袁树民，全雄志，张海涛，马春梅，曹兴水，张连峰
（中国医学科学院北京协和医学院医学实验动物研究所，卫生部人类疾病比较医学重点实验室，
国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室，北京 １０００２１）
【摘要】 目的
将ＡＰＰ６９５ ”
建立ＡＰＰ６９５ （Ｓｗｅｄｉｓｈ突变）转基因小鼠和评价痴呆表型的发生和发展过程。方法
突变基因插入到小鼠朊蛋白（ｍｏｕｓｅ ｐｒｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ）启动子下游，构建转基因表达载体，通过显
微注射法建立ＡＰＰ６９５ 突变转基因Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠。ＰＣＲ鉴定转基因小鼠的基因表型，Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ检测
ＡＰＰ突变基因表达。Ｔｈｉｏｆｌａｖｉｎ—Ｓ染色检测不同年龄转基因小鼠大脑病理改变。Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫动态观察小鼠行为学
改变。结果 建立了人ＡＰＰ６９５ 转基因小鼠，Ｔｈｉｏｆｌａｖｉｎ—Ｓ染色显示转基因小鼠９月龄时在脑海马区可检测
到老年斑形成，并且在１１、１２月龄时明显增多。Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫结果发现与同月龄野生型小鼠相比，该转基因小鼠５
月龄开始出现学习记忆能力缺陷，７、９、１１月行为学结果证实转基因小鼠的学习记忆能力缺陷随年龄增加而日趋严
重（Ｐ＜０．０５）。结论建立了人ＡＰＰ６９５ 转基因小鼠，并能再现人类阿尔茨海默症的行为学及神经病理学
特征，为阿尔茨海默病发病机制研究和药物研发提供了有价值的动物模型。
【关键词】 朊蛋白；ＡＰＰ瑞士突变；转基因小鼠；水迷宫
【中图分类号】Ｒ３３ 【文献标识码】Ａ 【文章编号】１６７１—７８５６（２０１１）１２－０００５－０５
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｉ．ｉｓｓｎ．１６７１．７８５６．２０１ １．０１２．００２
Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ｏｆ ＡＰＰ６９５。ｗ。ｄ 。“Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ Ｍｏｕｓｅ Ｍｏｄｅｌ ａｎｄ
Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ Ｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ
ＷＡＮＧ Ｄｏｎｇ—ｍｅｉ，ＬＩ Ｗａｎ—ｂｏ，ＹＵＡＮ Ｓｈｕ—ｍｉｎ，ＱＵＡＮ Ｘｉｏｎｇ—ｚｈｉ，ＺＨＡＮＧ Ｈａｉ—ｔａｏ，
ＭＡ Ｃｈｕｎ—ｍｅｉ，ＣＡＯ Ｘｉｎｇ—ｓｈｕｉ，ＺＨＡＮＧ Ｌｉａｎ—ｆｅｎｇ
（１．Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，２．Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｄｉｓｅａｓｅ
Ａｎｉｍａｌ Ｍｏｄｅｌｓ，Ｓｔａｔｅ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ；Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｃｈｉｎｅｓｅ
Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ＆Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｐｅｋｉｎｇ Ｕｎｉｏｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００２１，Ｃｈｉｎａ）
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｇｅｎｅｒａｔｅ ａ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｏｕｓｅ ｌｉｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｈｕｍａｎ ＡＰＰ６９５
ｉｎｓｅｒｔｉｎｇ ｔｈｅ ｍｕｔａｔｅｄ ＡＰＰ６９５ ’
（Ｓｗｅｄｉｓｈ
ｍｕｔａｔｉｏｎ）ａｎｄ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ ｍｏｄｅ１．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｐｌａｓｍｉｄ ｗａｓ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ ｂｙ
ｇｅｎｅ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ ｏｆ ｍｏｕｓｅ ｐｒｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｐｒｏｍｏｔｅｒ
Ｔｈｅ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ
．
ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｂｙ ｍｉｃｒｏｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｇｅｎｏｔｙｐｅ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ＰＣＲ．Ｔｈｅ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ Ｗｅｓｔｅｒｎ
ｂｌｏｔｔｉｎｇ．Ｔｈｅ ｓｅｎｉｌｅ ｐｌａｑｕｅｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｔｈｉｏｆｌａｖｉｎ—Ｓ ｓｔａｉｎｉｎｇ ａｎｄ ｖｉｓｕａｌｉｚｅｄ ｄｉｒｅｃｔｌｙ ｂｙ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ．Ｔｈｅ
ｂｅｈａｖｉｏｒａｌ ｃｈａｎｇｅｓ ｗａｓ ｅｘａｍｉｎｅｄ ｂｙ Ｍｏｒｒｉｓ ｗａｔｅｒ ｍａｚｅ ｔｅｓｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｇｅｎｅｒａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＡＰＰ６９５ ’ ｉｎ ｔｈｅ ｂｒａｉｎ ｔｉｓｓｕｅ Ｔｈｅ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｉｃｅ ｓｈｏｗｅｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｌｅａｒｎｉｎｇ ａｎｄ ｍｅｍｏｒｙ
［基金项目］卫生部项目，实验动物和人类疾病动物模型资源扩展（２００８０２０３６）和十一五新药专项支持（２００９ＺＸ０９５０１－０２６）。
［作者简介］王冬梅（１９７８一），女，博士研究生，主要研究方向：神经退行性疾病。
［通讯作者］张连峰，Ｅ—ｍａｉｌ：ｚｈａｎｇｌｆ＠ｅｎｉｌａｓ．ｏｒｇ。
６ 中国比较医学杂志２０１１年１２月第２１卷第１２期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｃｏｍｐ Ｍ
ｅｄ，Ｏｃｔ０ｂｅｒ ２０１１，Ｖｏ１．２１．Ｎ０．１２
ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｍｏｒｒｉｓ ｗａｔｅｒ ｍａｚｅ ａｔ ５ ｍｏｎｔｈｓ ｏｆ ａｇｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｘｔｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔｓ ｗａｓ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ａｔ ７
９ ａｎｄ ｌ １
．
ｍｏｎｔｈｓ ｏｆ ａｇｅ，ｃｏｍｐａｒｉｎｇ ｗｉｔｈ ｔｈａｔ ｏｆ ａｇｅ—ｍａｔｃｈｅｄ ｗｉｌｄ ｔｙｐｅ ｍｉｃｅ（Ｐ＜０．０５）．Ｓｅｎｉｌｅ ｐｌａｑｕｅｓ ｗｅｒｅ ｖｉｓｕａｌｉｚｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ＣＡ１
ａｒｅａ ｏｆ ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ ａｔ ９ ａｎｄ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ａｔ １２ ｍｏｎｔｈｓ ｏｆ ａｇｅ
Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ Ｔｈｅ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｉｃｅ ｓｈｏｗ ａ ｐｒ０ｇｒｅｓｓｉｒｅ ｄｅｆｔｃｉｔｓ
．
ｏｆ ｌｅａｒｎｉｎｇ ａｎｄ ｍｅｍｏｒｙ ａｎｄ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｅｎｉｌｅ ｐｌａｑｕｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ
，
ｓｕｇｇｅｓｔｉｎｇ ｔｈａｔ ｔｈｉｓ ＡＰＰ
ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｏｕｓｅ ｉｓ ａｎ ｕｓｅｆｕｌ ａｎｉｍａｌ ｍｏｄｅｌ ｏｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ．
【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】Ｐｒｉｏｎ；ＡＰＰ ｓｗｅｄｉｓｈ ｍｕｔａｎｔ；Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｏｕｓｅ：Ｗａｔｅｒ ｍａｚｅ
淀粉样前体蛋白（ａｍｙｌｏｉｄ ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎ．
生物工程技术有限公司），ＰＣＲ试剂购自宝生物工
ＡＰＰ）是一种Ｉ型跨膜糖蛋白，在人体多种组织中均
有表达，研究发现生理状态下的ＡＰＰ参与神经发
程有限公司。ＰＣＲ反应条件：９４℃预变性５ ｍｉｎ，
９４℃变性３０ Ｓ，５４ｏＣ退火３０ｓ，７２ｃＩ＝延伸３０ Ｓ，３５个循
育、神经损伤后修复与再生、突触发生和学习记忆
能力等，在神经系统发育发生及发展中发挥重要的
生理作用 。而发生突变的ＡＰＰ与家族性阿尔茨
海默症（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ＇ｓ ｄｉｓｅａｓｅ，ＡＤ）关系密切，突变的
ＡＰＰ通过淀粉样加工途径产生过多的ＡＩ３，而ＡＩ３也
是ＡＤ中老年斑的主要成份。本文通过转基因技
术，将人的ＡＰＰ６９５ ｍ 转入Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠体
内，构建了神经特异性表达人ＡＰＰ６９５ Ⅳ 转基
因小鼠，并通过行为学及神经病理学方法对该动物
模型进行评价。
１材料和方法
１．１ ＡＰＰ表达载体的构建及转基因 。
本文所研究的ＰｒＰ．ｈＡＰＰ６９５酗 突变转基
因动物模型由本所遗传中心构建，利用点突变方法
使人ＡＰＰ６９５ｃＤＮＡ在５９６碱基和５９７碱基两个位点
产生Ｇ．Ｃ和Ａ．Ｃ的突变，编码氨基酸由赖氨酸突变
为天门冬酰胺，蛋氨酸突变为亮氨酸，称为瑞士突
变。把ＡＰＰ基因克隆到小鼠阮蛋白启动子（ＰｒＰ）的
下游构建ＡＰＰ６９５ 转基因表达载体。转基因
载体用Ｘｂａ Ｉ线性化（宝生物工程有限公司），调整
浓度至５ ｎｇ／ＩｘＬ，用显微注射法将线性化的转基因
载体注射到Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠的受精卵中（小鼠购自
北京华阜康生物科技股份有限公司，ＳＣＸＫ京２００９．
０００７），用ＩＣＲ小鼠作假孕体，制备转基因小鼠。实
验中涉及动物的操作程序已经得到中国医学科学
院医学实验动物研究所实验动物使用与管理委员
会的批准（ＧＣ－０７－２０５５）。
１．２ ＰＣＲ鉴定ＡＰＰ转基因动物的基因表型
转基因小鼠在出生９～１４ ｄ用剪趾法标记，收
集剪下的组织，用碱裂解法提取基因组ＤＮＡ，用
ＰＣＲ检测ＡＰＰ转基因小鼠。ＰＣＲ上游引物为５’一
ＧＡＣＴＧＡＣＣＡＣＴＣＧＡＣＣＡＧＧＴＴＣＴＧ．３’，下游引物为
５’一ＣＴＴＧＴＡＡＧＴＴＧＧＡＴＴＣＴＣＡＴＡＴＣＣＧ．３’（上海
环。ｈＡＰＰ片段为３４４ ｂｐ。
１．３ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ鉴定ＡＰＰ基因在蛋白水平
的表达
选用１月龄的转基因阳性和同窝阴性小鼠，颈
椎脱臼法牺牲小鼠，迅速取出脑组织置匀浆器中，
加人１ ｍＬ的ＲＩＰＡ蛋白裂解液（碧云天公司），蛋白
浓度通过ＢＣＡ法测定（Ｐｉｅｒｃｅ公司Ｐｉｅｒｃｅ ＢＣＡ Ｋｉｔ
试剂盒），取等量蛋白进行ＳＤＳ．ＰＡＧＥ凝胶电泳，随
后将蛋白电转至醋酸纤维素ＮＣ膜上。膜先用５％
脱脂牛奶中室温封闭１ ｈ，加入羊抗ｈＡＰＰ蛋白抗体
（１：５００稀释，Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｔｚ），４ｏＣ杂交过夜。将膜转移
到ＨＲＰ标记的兔抗山羊抗体（１：１５ ０００，Ｐｉｅｒｃｅ
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）中，室温杂交１ ｈ。将膜置于化学发
光液中，曝光、显影及定影。
１．４ ＡＰＰ６９５ ｍ 转基因小鼠模型的病理学动
态观察
选用５、７、９、１１、１２月龄ＡＰＰ６９５ 小鼠及
同月龄野生小鼠，颈椎脱臼法处死小鼠，取脑后用
中性甲醛溶液固定２４ ｈ，取材、脱水、包埋、切片
、
ｔｈｉｏｆｌａｖｉｎ—Ｓ（购自美国Ｓｉｇｍａ公司）荧光检测老年
斑情况，光学显微镜（Ｎｉｋｏｎ，日本）及荧光显微镜观
察（Ｏｌｙｍｐｕｓ，日本）。
１．５ Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫检测ＡＰＰ６９５￣ ｍ 转基因
小鼠的行为学变化
选用５、７、９、１１月龄ＡＰＰ６９５ Ｎ／ 转基因阳
性小鼠每组１０只及同月龄的野生型Ｃ５７／６Ｊ小鼠每
组１０只，利用Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫进行小鼠行为学分析
（Ｅｔｈｏｖｉｓｉｏｎ ＸＴ监测分析软件，Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫系统，
Ｎｏｌｄｕｓ公司，荷兰）。水迷宫实验过程分为连续５
天的隐藏平台获得实验和第６天的空间探索实验两
部分。每天训练４次，每次使小鼠在不同区域下水，
水迷宫按东南西北分为１、２、３、４区域，平台即第五
区域，位于第４区域内。每次游泳时间为６０ Ｓ，每次
训练间隔１ ｈ左右。小鼠没有找到平台的按６０ ｓ计
８ 中国比较医学杂志２０１１年１２月第２１卷第１２期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｃｏｍｐ Ｍｅｄ
，
Ｏｃｔｏｂｅｒ ２０１１。Ｖ０１．２１．Ｎｏ．１２
Ａ
蓁
５）１龄５－ｍｏｎｔｈ ｏｌｄ ｍｉｃｅ
７月龄７－ｍｏｎｔｈ ｏｌｄ ｍｉｃｅ
∞＿） 碍口 Ｉｕ一窭 暑寸 暑 ０＾。口 一寸
９）３龄９－ｍｏｎｔｈ ｏｌｄ ｍｉｃｅ
Ｅ
ｌ１月龄１１－ｍｏｎｔｈ ｏｌｄｍｉｃｅ
一
岔
趔
暴
艴
臣
鸯ＩＩ｝
蝾
善
Ａ：５月龄野生小鼠与转基因模型小鼠寻找隐藏平台的潜伏期比较；Ｂ：７月龄野生小鼠与转基因模型小鼠寻找隐藏平台的潜伏期比较；Ｃ：９
月龄野生小鼠与转基因模型小鼠寻找隐藏平台的潜伏期比较；Ｄ：１１月龄野生小鼠与转基因模型小鼠寻找隐藏平台的潜伏期比较；Ｅ：５—１１
月龄野生小鼠与转基因模型小鼠第４天寻找隐藏平台的潜伏期差值比较。 Ｐ＜０．０５
图４不同年龄小鼠水迷宫实验分析
Ａ：Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｅｓｃａｐｅ ｌａｔｅｎｃｙ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｍｉｃｅ ａｔ ５－ｍｏｎｔｈ ｏｌｄ ａｇｅ；Ｂ：Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｅｓｃａｐｅ ｌａｔｅｎｃｙ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ａｎｄ
ｃｏｎｔｒｏｌ ｍｉｃｅ ａｔ ７－ｍｏｎｔｈ ｏｌｄ ａｇｅ；Ｃ：Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｅｓｃａｐｅ ｌａｔｅｎｃｙ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｍｉｃｅ ａｔ ９－ｍｏｎｔｈ ｏｌｄ ａｇｅ；Ｄ：Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｅｓｃａｐｅ
ｌａｔｅｎｃｙ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｍｉｃｅ ａｔ １ １－ｍｏｎｔｈ ｏｌｄ ａｇｅ；Ｅ：Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ａｖｅｒａｇｅ ｖａｌｕｅ ｏｆ ｔｈｅ ４ｔｈ ｄａｙ ｅｓｃａｐｅ ｌａｔｅｎｃｙ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ａｎｄ
ｃｏｎｔｒｏｌ ｍｉｃｅ ａｔ ５－１１－ｍｏｎｔｈ ｏｌｄ ａｇｅｓ． Ｐ＜０．０５
Ｆｉｇ．４ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｓｃａｐｅ ｌａｔｅｎｃｙ ｉｎ ｈｉｄｄｅｎ ｐｌａｔｆｏｒｍ ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ ｔｒａｉｎｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ｍｉｃｅ ａｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ａｇｅｓ
目前在家族性Ａ Ｄ病人中已鉴别出多个Ａ Ｐ Ｐ
基因的突变位点，这些突变使得ＡＰＰ代谢途径发生
异常改变，是家族性Ａ Ｄ的主要病因。本文所研究
ＩＩ （ｃａｌｃｉｕｍ／ｃａｌｍｏｄｕｌｉｎ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ
Ｉｌｃｔ，ＣａＭＫＩＩｃｔ），小鼠甲状腺素一１（ｔｈｙｒｏｘｉｎｅ．１，
Ｔｈｙ一１）是研究者经常使用的神经组织特异启动子。
的瑞士突变带来的蛋白构象变化使Ａ Ｐ Ｐ蛋白更容Ｔｈｙ一１和ＣａＭＫＩＩｃｔ启动子能够使下游目的基因在海
易被Ｂ．分泌酶切割，导致其通过淀粉样代谢途径生
成的ＡＢ增多，增多的ＡＩ３异常聚集，形成老年斑，进
而影响认知行为。
马、胼胝体、前皮层神经元内特异性高表达 ，而
ＰＤＧＦ和ＰｒＰ启动子可以使目的基因在小脑、大脑、
脊索的神经元广泛高表达 ６’ 。ＰｒＰ启动子更为突
神经特异性启动子通常在进行神经系统疾病
基因治疗和神经生物学研究方面具有非常重要的
出的优点是在神经胶质细胞中也具有活性，而其余
３个启动子不具有这样的功能 。所以我们选择
意义 。其中，小鼠朊蛋白（ｍｏｕｓｅ ｐｒｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ，
ＰｒＰ），人血小板源性生长因子（ｐｌａｔｅｌｅｔ－ｄｅｒｉｖｅｄ
ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ，ＰＤＧＦ），钙／钙调素依赖性蛋白激酶
ＰｒＰ启动子，在其下游插入突变的ＡＰＰ基因建立阿
尔茨海默病（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’Ｓ ｄｉｓｅａｓｅ，ＡＤ）动物模型。
在９月龄时，该转基因小鼠的海马区出现老年
中国比较医学杂志２０１１年１２月第２ｌ卷第１２期
～ 一ｓ）厘鲁艇 铎凶啦
Ｃｈｉｎ Ｊ Ｃｏｍｐ Ｍｅｄ，Ｏｃｔｏｂｅｒ ２０１１，Ｖｏ１．２１ｔ Ｎｏ・１２ ９
一∞一口０ 薯： ０Ｎ Ｔ ＿
如 加 ｍ Ｏ
５Ｙｌ４区
７月４区
９月４区 ｌ１月４区
５－ｍｏｎｔｈ ｏｌｄ
７．ｍｏｎｔｈ ｏｌｄ
９．ｍｏｎｔｈ ｏｌｄ ｌ１．ｍｏｎｔｈ ｏｌｄ
Ｚｏｎｅ ４
Ｚｏｎｅ４
Ｚｏｎｅ４ Ｚｏｎｅ ４
Ｂ
舍Ｓ
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５月４区
７月４区
９Ｙｌ４区
１１月４区
５．ｍｏｎｔｈ ｏｌｄ
７．ｍｏｎｔｈ ｏｌｄ
９ ｍｏｎｔｈ ｏｌｄ
ｌ１．ｍｏｎｔｈ ｏｌｄ
Ｚｏｎｅ４
Ｚｏｎｅ ４ Ｚｏｎｅ ４ Ｚｏｎｅ ４
Ａ：５～１１月龄野生型小鼠与转基因模型小鼠
平台区域停留时间；Ｂ：５～１１月龄野生型小鼠
与转基因模型小鼠穿越平台区域次数。 Ｐ＜０．０５
图５ Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫空间探索实验结果比较
Ａ：Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｔａｒｇｅｔ ｚｏｎｅ ｄｕｒａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ５－１ １－ｍｏｎｔｈ
ｏｌｄ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｍｉｃｅ；Ｂ：Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｔａｒｇｅｔ ｚｏｎｅ
￣ｅｑｕｅｎｅｙ ｂｅｔｗｅｅｎ ５－－１ １－－ｍｏｎｔｈ ｏｌｄ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ
ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｍｉｃｅ．｛Ｐ＜０．０５
Ｆｉｇ．５ Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ６ｔｈ ｄａｙ ｐｒｏｂｅ ｔｒｉａｌ ｔｅｓｔｉｎｇ ｂｙ
Ｍｏｒｒｉｓ ｗａｔｅｒ ｍａｚｅ
斑，１１月，１２月呈年龄依赖性增多，这和ｈｓｉａｏ等 Ｊ
报道的结果相一致。Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫结果显示５月龄
转基因小鼠与同月龄野生小鼠有差异，说明５月龄
转基因小鼠在出现明显老年斑之前就出现了学习
记忆能力障碍。与此相一致，临床上ＡＤ患者神经
病理学改变之前，就会出现轻度的认知障碍 。研
究发现：神经元功能活动调控产生的内源性ＡＩ３可
能是正常机体对神经元持续兴奋的反应，通过从对
神经元兴奋性的负反馈调节，控制神经元兴奋毒性
的发生 ’” 。而当可溶性的Ａｐ过多，聚集成的Ａｐ
寡聚体，能够破坏海马脑片及动物的长时程增强效
应（１ｏｎｇ－ｔｅｒｍ ｐｏｔｅｎｔｉａｔｉｏｎ，ＬＴＰ），降低海马的树突棘
密度；干扰与记忆相关的即刻早期基因的表达；通
过破坏神经信号转导，引起神经元功能障碍、变性、
死亡，直接影响大脑学习记忆…一ｔ３］。Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫
寻找平台隐藏实验中第３天是检测小鼠学习记忆能
力是否存在差异的关键时间点，本实验中发现１１月
龄转基因小鼠与野生型小鼠相比，在第４天仍然存
在差异，说明转基因体小鼠学习记忆能力呈现渐进
性加重。
综上，本文报道的ＰｒＰ—ＡＰＰ６９５ ％ 转基因
小鼠在５月龄开始出现学习记忆能力缺陷和渐进性
加重。在９月龄出现老年斑并呈年龄依赖性增多。
该转基因小鼠的病理表型可以再现人类ＡＤ患者的
渐进性病理表型，是具有应用价值的阿尔茨海默病
小鼠转基因动物模型。ＰｒＰ—ｈＡＰＰ６９５ ｍ％ 转基
因 小 鼠 与ＰＤＧＦ—ｈＡＰＰ７７０ “ 、ＰＤＧＦ—
ｈＡＰＰ６９５ ［
、
ＰＤＧＦ—ｈＡＰＰ６９５ ％ 转
基因小鼠相比，由于ＰｒＰ启动子在神经胶质细胞中
也具有活性，使得该转基因小鼠可用于阿尔茨海默
病神经炎症机制方面的研究，具有更广泛的用途。
参考文献
［１］Ｋｉｍ Ｄ，Ｔｓａｉ ＬＨ．Ｂｒｉｄｇｉｎｇ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｉｎ ＡＤ［Ｊ］．
Ｃｅｌｌ，２００９，１３７（６）：９９７—１０００．
［２］ Ｓｔｏｋｉｎ ＧＢ，Ｌｉｌｌｏ Ｃ，Ｆａｌｚｏｎｅ ＴＬ，ｅｔ ａ１．Ａｘｏｎｏｐａｔｈｙ ａｎｄ ｔｒａｎｓｐｏｒｔ
ｄｅｆｉｃｉｔｓ ｅａｒｌｙ ｉｎ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ＇ｓ ｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．
Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００５，３０７（５７１３）：１２８２—８．
［３］ Ｕｌｉｒｃｈ ＶＭ．Ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ ｂｏｎｅ ａｎｄ ｊｏｉｎｔ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ．
Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ ｖｅｃｔｏｒ ｉｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ
ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ ａｒｔｉｃｕｌａｒ ｃａｒｔｉｌａｇｅ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ，ｐｅｒｉｐｒｏｓｔｈｅｔｉｃ ｏｓｔｅｏｌｙｓｉｓ
ａｎｄ ｂｏｎｅ ｈｅａｌｉｎｇ［Ｊ］．Ａｃｔａ Ｏｒｔｈｏｐ（Ｓｕｐｐ１），２００７，７８（３２５）：
ｌ一６４．
［４］ Ｍｏｅｃｈａｒｓ Ｄ，Ｄｅｗａｅｈｔｅｒ Ｉ，Ｌｏｒｅｎｔ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｅａｒｌｙ ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ
ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｉｃｅ ｔｈａｔ ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｍｕｔａｎｔｓ ｏｆ
ａｍｙｌｏｉｄ ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ ｂｒａｉｎ［Ｊ］．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，１９９９，２７４
（１０）：６４８３—９２．
［５］ Ｒｙａｎ ＫＡ，Ｐｉｍｐｌｉｋａｒ ＳＷ． Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ＧＳＫ－３ ａｎｄ
ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＣＲＭＰ２ ｉｎ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｉｃｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ＡＰＰ
ｉｎｔｒａｅｅｌｌｕｌａｒ ｄｏｍａｉｎ［Ｊ］．Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ，２００５，１７１（２）：３２７—３５．
［６］ Ｓａｓａｈａｒａ Ｍ，Ｆｒｉｅｓ ＪＷ，Ｒａｉｎｅｓ ＥＷ，ｅｔ ａ１．ＰＤＧＦ Ｂ－ｃｈａｉｎ ｉｎ
ｎｅｕｒｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ ｃｅｎｔｒａｌ ｎｅｒｖｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ，ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ ｐｉｔｕｉｔａｒｙ，ａｎｄ ｉｎ
ａ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｏｄｅｌ［Ｊ］．Ｃｅｌｌ，１９９１，６４（１）：２１７—２７．
［７］Ｈｓｉａｏ Ｋ，Ｃｈａｐｍａｎ Ｐ，Ｎｉｌｓｅｎ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｖｅ ｍｅｍｏｒｙ
ｄｅｆｉｃｉｔｓ，Ａｂｅｔａ ｅｌｅｖａｔｉｏｎ，ａｎｄ ａｍｙｌｏｉｄ ｐｌａｑｕｅｓ ｉｎ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｉｃｅ
［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９６，２７４（５２８４）：９９—１０２．
［８］ Ｍｅｓｕｌａｍ Ｍ，Ｓｈａｗ Ｐ，Ｍａｓｈ Ｄ，ｅｔ ａ１．Ｃｈｏｌｉｎｅｒｇｉｅ ｎｕｃｌｅｕｓ ｂａｓａｌｉｓ
ｔａｕｏｐａｔｈｙ ｅｍｅｒｇｅｓ ｅａｒｌｙ ｉｎ ｔｈｅ ａｇｉｎｇ－ＭＣＩ－ＡＤ ｃｏｎｔｉｎｕｕｍ［Ｊ］．
Ａｎｎ Ｎｅｕｒｏｌ，２００４，５５（６）：８１５—８２８．
［９］Ｐｒｉｌｌｅｒ Ｃ，Ｂａｕｅｒ Ｔ，Ｍｉｔｔｅｒｅｇｇｅｒ Ｇ，ｅｔ ａ１．Ｓｙｎａｐｓｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｎｄ
ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｓ ｍｏｄｕｌａｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ａｍｙｌｏｉｄ ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎ［Ｊ］．Ｊ
Ｎｅｕｒｏｓｅｉ，２００６，２６（２７）：７２１２—７２２１．
（下转第２５页）
中国比较医学杂志２０１１年１２月第２ｌ卷第ｌ２期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｃｏｍｐ Ｍｅｄ，Ｏｃｔｏｂｅｒ ２０１１，Ｖｏ１．２１．Ｎｏ－１２ ２５
（上接第９页）
［１０］
Ａｂｒａｍｏｖ Ｅ，Ｄｏｌｅｖ Ｉ，Ｆｏｇｅｌ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ａｍｙｌｏｉｄ—ｂｅｔａ ａｓ ａ ｐｏｓｉｔｉｖｅ
ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｏｆ ｒｅｌｅａｓｅ ｐｒｏｂａｂｉｌｉｔｙ ａｔ ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ
［１ ３］Ｔｏｗｎｓｅｎｄ Ｍ，Ｍｅｈｔａ Ｔ，Ｓｅｌｋｏｅ ＤＪ．Ｓｏｌｕｂｌｅ Ａｂｅｔａ ｉｎｈｉｂｉｔｓ
ｓｐｅｃｉｉｆｃ ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｃａｓｃａｄｅｓ ｃｏｍｍｏｎ ｔｏ ｔｈｅ ｉｎｓｕｌｉｎ
ｓｙｎａｐｓｅｓ［Ｊ］．Ｎａｔ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，２００９，１２（１２）：１５６７—７６．
Ｌｅｓｎ６ Ｓ，Ｋｏｈ ＭＴ，Ｋｏｔｉｌｉｎｅｋ Ｌ，ｅｔ ａ１．Ａ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｍｙｌｏｉｄ－ｂｅｔａ
ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｐａｔｈｗａｙ［Ｊ］．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２００７，２８２（４６）：３３３０５
—
３１２．
ｐｒｏｔｅｉｎ ａｓｓｅｍｂｌｙ ｉｎ ｔｈｅ ｂｒａｉｎ ｉｍｐａｉｒｓ ｍｅｍｏｒｙ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，
２００６，４４０（７０８２）：３５２—３５７．
［１４］方瑾，马春梅，黄澜，等．Ｌｏｎｄｏｎ／Ｓｗｅｄｉｓｈ双突变ＡＰＰ转基
因小鼠的鉴定［Ｊ］．中国比较医学杂志，２００８，１８（５）：２４
［１２］
Ｓｅｌｋｏｅ ＤＪ．Ｓｏｌｕｂｌｅ ｏｌｉｇｏｍｅｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ａｍｙｌｏｉｄ ｂｅｔａ－ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｍｐａｉｒ
ｓｙｎａｐｔｉｃ ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ ａｎｄ ｂｅｈａｖｉｏｕｒ［Ｊ］．Ｂｅｈａｖ Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ，２００８，
１９２（１）：１０６—１１３．
２７．
［修回日期］２０１１－０２—１０
2024年9月23日发(作者：卜叶欣)
２０１１年１２月
中国比较医学杂志
ＣＨＩＮＥＳＥ ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＣＯＭＰＡＲＡＴＩＶＥ ＭＥＤＩＣＩＮＥ
Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２０１１
Ｖｏ１．２ｌ ＮＯ．１２
第２ｌ卷第１２期
ＡＰＰ６９５ ％Ｌ突 变转基因小鼠的建立和
病理表型动态分析
王冬梅，李万波，袁树民，全雄志，张海涛，马春梅，曹兴水，张连峰
（中国医学科学院北京协和医学院医学实验动物研究所，卫生部人类疾病比较医学重点实验室，
国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室，北京 １０００２１）
【摘要】 目的
将ＡＰＰ６９５ ”
建立ＡＰＰ６９５ （Ｓｗｅｄｉｓｈ突变）转基因小鼠和评价痴呆表型的发生和发展过程。方法
突变基因插入到小鼠朊蛋白（ｍｏｕｓｅ ｐｒｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ）启动子下游，构建转基因表达载体，通过显
微注射法建立ＡＰＰ６９５ 突变转基因Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠。ＰＣＲ鉴定转基因小鼠的基因表型，Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ检测
ＡＰＰ突变基因表达。Ｔｈｉｏｆｌａｖｉｎ—Ｓ染色检测不同年龄转基因小鼠大脑病理改变。Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫动态观察小鼠行为学
改变。结果 建立了人ＡＰＰ６９５ 转基因小鼠，Ｔｈｉｏｆｌａｖｉｎ—Ｓ染色显示转基因小鼠９月龄时在脑海马区可检测
到老年斑形成，并且在１１、１２月龄时明显增多。Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫结果发现与同月龄野生型小鼠相比，该转基因小鼠５
月龄开始出现学习记忆能力缺陷，７、９、１１月行为学结果证实转基因小鼠的学习记忆能力缺陷随年龄增加而日趋严
重（Ｐ＜０．０５）。结论建立了人ＡＰＰ６９５ 转基因小鼠，并能再现人类阿尔茨海默症的行为学及神经病理学
特征，为阿尔茨海默病发病机制研究和药物研发提供了有价值的动物模型。
【关键词】 朊蛋白；ＡＰＰ瑞士突变；转基因小鼠；水迷宫
【中图分类号】Ｒ３３ 【文献标识码】Ａ 【文章编号】１６７１—７８５６（２０１１）１２－０００５－０５
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｉ．ｉｓｓｎ．１６７１．７８５６．２０１ １．０１２．００２
Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ｏｆ ＡＰＰ６９５。ｗ。ｄ 。“Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ Ｍｏｕｓｅ Ｍｏｄｅｌ ａｎｄ
Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ Ｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ
ＷＡＮＧ Ｄｏｎｇ—ｍｅｉ，ＬＩ Ｗａｎ—ｂｏ，ＹＵＡＮ Ｓｈｕ—ｍｉｎ，ＱＵＡＮ Ｘｉｏｎｇ—ｚｈｉ，ＺＨＡＮＧ Ｈａｉ—ｔａｏ，
ＭＡ Ｃｈｕｎ—ｍｅｉ，ＣＡＯ Ｘｉｎｇ—ｓｈｕｉ，ＺＨＡＮＧ Ｌｉａｎ—ｆｅｎｇ
（１．Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，２．Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｄｉｓｅａｓｅ
Ａｎｉｍａｌ Ｍｏｄｅｌｓ，Ｓｔａｔｅ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ；Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｃｈｉｎｅｓｅ
Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ＆Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｐｅｋｉｎｇ Ｕｎｉｏｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００２１，Ｃｈｉｎａ）
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｇｅｎｅｒａｔｅ ａ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｏｕｓｅ ｌｉｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｈｕｍａｎ ＡＰＰ６９５
ｉｎｓｅｒｔｉｎｇ ｔｈｅ ｍｕｔａｔｅｄ ＡＰＰ６９５ ’
（Ｓｗｅｄｉｓｈ
ｍｕｔａｔｉｏｎ）ａｎｄ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ ｍｏｄｅ１．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｐｌａｓｍｉｄ ｗａｓ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ ｂｙ
ｇｅｎｅ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ ｏｆ ｍｏｕｓｅ ｐｒｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｐｒｏｍｏｔｅｒ
Ｔｈｅ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ
．
ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｂｙ ｍｉｃｒｏｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｇｅｎｏｔｙｐｅ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ＰＣＲ．Ｔｈｅ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ Ｗｅｓｔｅｒｎ
ｂｌｏｔｔｉｎｇ．Ｔｈｅ ｓｅｎｉｌｅ ｐｌａｑｕｅｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｔｈｉｏｆｌａｖｉｎ—Ｓ ｓｔａｉｎｉｎｇ ａｎｄ ｖｉｓｕａｌｉｚｅｄ ｄｉｒｅｃｔｌｙ ｂｙ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ．Ｔｈｅ
ｂｅｈａｖｉｏｒａｌ ｃｈａｎｇｅｓ ｗａｓ ｅｘａｍｉｎｅｄ ｂｙ Ｍｏｒｒｉｓ ｗａｔｅｒ ｍａｚｅ ｔｅｓｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｇｅｎｅｒａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＡＰＰ６９５ ’ ｉｎ ｔｈｅ ｂｒａｉｎ ｔｉｓｓｕｅ Ｔｈｅ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｉｃｅ ｓｈｏｗｅｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｌｅａｒｎｉｎｇ ａｎｄ ｍｅｍｏｒｙ
［基金项目］卫生部项目，实验动物和人类疾病动物模型资源扩展（２００８０２０３６）和十一五新药专项支持（２００９ＺＸ０９５０１－０２６）。
［作者简介］王冬梅（１９７８一），女，博士研究生，主要研究方向：神经退行性疾病。
［通讯作者］张连峰，Ｅ—ｍａｉｌ：ｚｈａｎｇｌｆ＠ｅｎｉｌａｓ．ｏｒｇ。
６ 中国比较医学杂志２０１１年１２月第２１卷第１２期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｃｏｍｐ Ｍ
ｅｄ，Ｏｃｔ０ｂｅｒ ２０１１，Ｖｏ１．２１．Ｎ０．１２
ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｍｏｒｒｉｓ ｗａｔｅｒ ｍａｚｅ ａｔ ５ ｍｏｎｔｈｓ ｏｆ ａｇｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｘｔｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔｓ ｗａｓ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ａｔ ７
９ ａｎｄ ｌ １
．
ｍｏｎｔｈｓ ｏｆ ａｇｅ，ｃｏｍｐａｒｉｎｇ ｗｉｔｈ ｔｈａｔ ｏｆ ａｇｅ—ｍａｔｃｈｅｄ ｗｉｌｄ ｔｙｐｅ ｍｉｃｅ（Ｐ＜０．０５）．Ｓｅｎｉｌｅ ｐｌａｑｕｅｓ ｗｅｒｅ ｖｉｓｕａｌｉｚｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ＣＡ１
ａｒｅａ ｏｆ ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ ａｔ ９ ａｎｄ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ａｔ １２ ｍｏｎｔｈｓ ｏｆ ａｇｅ
Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ Ｔｈｅ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｉｃｅ ｓｈｏｗ ａ ｐｒ０ｇｒｅｓｓｉｒｅ ｄｅｆｔｃｉｔｓ
．
ｏｆ ｌｅａｒｎｉｎｇ ａｎｄ ｍｅｍｏｒｙ ａｎｄ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｅｎｉｌｅ ｐｌａｑｕｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ
，
ｓｕｇｇｅｓｔｉｎｇ ｔｈａｔ ｔｈｉｓ ＡＰＰ
ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｏｕｓｅ ｉｓ ａｎ ｕｓｅｆｕｌ ａｎｉｍａｌ ｍｏｄｅｌ ｏｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ．
【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】Ｐｒｉｏｎ；ＡＰＰ ｓｗｅｄｉｓｈ ｍｕｔａｎｔ；Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｏｕｓｅ：Ｗａｔｅｒ ｍａｚｅ
淀粉样前体蛋白（ａｍｙｌｏｉｄ ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎ．
生物工程技术有限公司），ＰＣＲ试剂购自宝生物工
ＡＰＰ）是一种Ｉ型跨膜糖蛋白，在人体多种组织中均
有表达，研究发现生理状态下的ＡＰＰ参与神经发
程有限公司。ＰＣＲ反应条件：９４℃预变性５ ｍｉｎ，
９４℃变性３０ Ｓ，５４ｏＣ退火３０ｓ，７２ｃＩ＝延伸３０ Ｓ，３５个循
育、神经损伤后修复与再生、突触发生和学习记忆
能力等，在神经系统发育发生及发展中发挥重要的
生理作用 。而发生突变的ＡＰＰ与家族性阿尔茨
海默症（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ＇ｓ ｄｉｓｅａｓｅ，ＡＤ）关系密切，突变的
ＡＰＰ通过淀粉样加工途径产生过多的ＡＩ３，而ＡＩ３也
是ＡＤ中老年斑的主要成份。本文通过转基因技
术，将人的ＡＰＰ６９５ ｍ 转入Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠体
内，构建了神经特异性表达人ＡＰＰ６９５ Ⅳ 转基
因小鼠，并通过行为学及神经病理学方法对该动物
模型进行评价。
１材料和方法
１．１ ＡＰＰ表达载体的构建及转基因 。
本文所研究的ＰｒＰ．ｈＡＰＰ６９５酗 突变转基
因动物模型由本所遗传中心构建，利用点突变方法
使人ＡＰＰ６９５ｃＤＮＡ在５９６碱基和５９７碱基两个位点
产生Ｇ．Ｃ和Ａ．Ｃ的突变，编码氨基酸由赖氨酸突变
为天门冬酰胺，蛋氨酸突变为亮氨酸，称为瑞士突
变。把ＡＰＰ基因克隆到小鼠阮蛋白启动子（ＰｒＰ）的
下游构建ＡＰＰ６９５ 转基因表达载体。转基因
载体用Ｘｂａ Ｉ线性化（宝生物工程有限公司），调整
浓度至５ ｎｇ／ＩｘＬ，用显微注射法将线性化的转基因
载体注射到Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠的受精卵中（小鼠购自
北京华阜康生物科技股份有限公司，ＳＣＸＫ京２００９．
０００７），用ＩＣＲ小鼠作假孕体，制备转基因小鼠。实
验中涉及动物的操作程序已经得到中国医学科学
院医学实验动物研究所实验动物使用与管理委员
会的批准（ＧＣ－０７－２０５５）。
１．２ ＰＣＲ鉴定ＡＰＰ转基因动物的基因表型
转基因小鼠在出生９～１４ ｄ用剪趾法标记，收
集剪下的组织，用碱裂解法提取基因组ＤＮＡ，用
ＰＣＲ检测ＡＰＰ转基因小鼠。ＰＣＲ上游引物为５’一
ＧＡＣＴＧＡＣＣＡＣＴＣＧＡＣＣＡＧＧＴＴＣＴＧ．３’，下游引物为
５’一ＣＴＴＧＴＡＡＧＴＴＧＧＡＴＴＣＴＣＡＴＡＴＣＣＧ．３’（上海
环。ｈＡＰＰ片段为３４４ ｂｐ。
１．３ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ鉴定ＡＰＰ基因在蛋白水平
的表达
选用１月龄的转基因阳性和同窝阴性小鼠，颈
椎脱臼法牺牲小鼠，迅速取出脑组织置匀浆器中，
加人１ ｍＬ的ＲＩＰＡ蛋白裂解液（碧云天公司），蛋白
浓度通过ＢＣＡ法测定（Ｐｉｅｒｃｅ公司Ｐｉｅｒｃｅ ＢＣＡ Ｋｉｔ
试剂盒），取等量蛋白进行ＳＤＳ．ＰＡＧＥ凝胶电泳，随
后将蛋白电转至醋酸纤维素ＮＣ膜上。膜先用５％
脱脂牛奶中室温封闭１ ｈ，加入羊抗ｈＡＰＰ蛋白抗体
（１：５００稀释，Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｔｚ），４ｏＣ杂交过夜。将膜转移
到ＨＲＰ标记的兔抗山羊抗体（１：１５ ０００，Ｐｉｅｒｃｅ
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）中，室温杂交１ ｈ。将膜置于化学发
光液中，曝光、显影及定影。
１．４ ＡＰＰ６９５ ｍ 转基因小鼠模型的病理学动
态观察
选用５、７、９、１１、１２月龄ＡＰＰ６９５ 小鼠及
同月龄野生小鼠，颈椎脱臼法处死小鼠，取脑后用
中性甲醛溶液固定２４ ｈ，取材、脱水、包埋、切片
、
ｔｈｉｏｆｌａｖｉｎ—Ｓ（购自美国Ｓｉｇｍａ公司）荧光检测老年
斑情况，光学显微镜（Ｎｉｋｏｎ，日本）及荧光显微镜观
察（Ｏｌｙｍｐｕｓ，日本）。
１．５ Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫检测ＡＰＰ６９５￣ ｍ 转基因
小鼠的行为学变化
选用５、７、９、１１月龄ＡＰＰ６９５ Ｎ／ 转基因阳
性小鼠每组１０只及同月龄的野生型Ｃ５７／６Ｊ小鼠每
组１０只，利用Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫进行小鼠行为学分析
（Ｅｔｈｏｖｉｓｉｏｎ ＸＴ监测分析软件，Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫系统，
Ｎｏｌｄｕｓ公司，荷兰）。水迷宫实验过程分为连续５
天的隐藏平台获得实验和第６天的空间探索实验两
部分。每天训练４次，每次使小鼠在不同区域下水，
水迷宫按东南西北分为１、２、３、４区域，平台即第五
区域，位于第４区域内。每次游泳时间为６０ Ｓ，每次
训练间隔１ ｈ左右。小鼠没有找到平台的按６０ ｓ计
８ 中国比较医学杂志２０１１年１２月第２１卷第１２期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｃｏｍｐ Ｍｅｄ
，
Ｏｃｔｏｂｅｒ ２０１１。Ｖ０１．２１．Ｎｏ．１２
Ａ
蓁
５）１龄５－ｍｏｎｔｈ ｏｌｄ ｍｉｃｅ
７月龄７－ｍｏｎｔｈ ｏｌｄ ｍｉｃｅ
∞＿） 碍口 Ｉｕ一窭 暑寸 暑 ０＾。口 一寸
９）３龄９－ｍｏｎｔｈ ｏｌｄ ｍｉｃｅ
Ｅ
ｌ１月龄１１－ｍｏｎｔｈ ｏｌｄｍｉｃｅ
一
岔
趔
暴
艴
臣
鸯ＩＩ｝
蝾
善
Ａ：５月龄野生小鼠与转基因模型小鼠寻找隐藏平台的潜伏期比较；Ｂ：７月龄野生小鼠与转基因模型小鼠寻找隐藏平台的潜伏期比较；Ｃ：９
月龄野生小鼠与转基因模型小鼠寻找隐藏平台的潜伏期比较；Ｄ：１１月龄野生小鼠与转基因模型小鼠寻找隐藏平台的潜伏期比较；Ｅ：５—１１
月龄野生小鼠与转基因模型小鼠第４天寻找隐藏平台的潜伏期差值比较。 Ｐ＜０．０５
图４不同年龄小鼠水迷宫实验分析
Ａ：Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｅｓｃａｐｅ ｌａｔｅｎｃｙ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｍｉｃｅ ａｔ ５－ｍｏｎｔｈ ｏｌｄ ａｇｅ；Ｂ：Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｅｓｃａｐｅ ｌａｔｅｎｃｙ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ａｎｄ
ｃｏｎｔｒｏｌ ｍｉｃｅ ａｔ ７－ｍｏｎｔｈ ｏｌｄ ａｇｅ；Ｃ：Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｅｓｃａｐｅ ｌａｔｅｎｃｙ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｍｉｃｅ ａｔ ９－ｍｏｎｔｈ ｏｌｄ ａｇｅ；Ｄ：Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｅｓｃａｐｅ
ｌａｔｅｎｃｙ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｍｉｃｅ ａｔ １ １－ｍｏｎｔｈ ｏｌｄ ａｇｅ；Ｅ：Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ａｖｅｒａｇｅ ｖａｌｕｅ ｏｆ ｔｈｅ ４ｔｈ ｄａｙ ｅｓｃａｐｅ ｌａｔｅｎｃｙ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ａｎｄ
ｃｏｎｔｒｏｌ ｍｉｃｅ ａｔ ５－１１－ｍｏｎｔｈ ｏｌｄ ａｇｅｓ． Ｐ＜０．０５
Ｆｉｇ．４ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｓｃａｐｅ ｌａｔｅｎｃｙ ｉｎ ｈｉｄｄｅｎ ｐｌａｔｆｏｒｍ ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ ｔｒａｉｎｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ｍｉｃｅ ａｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ａｇｅｓ
目前在家族性Ａ Ｄ病人中已鉴别出多个Ａ Ｐ Ｐ
基因的突变位点，这些突变使得ＡＰＰ代谢途径发生
异常改变，是家族性Ａ Ｄ的主要病因。本文所研究
ＩＩ （ｃａｌｃｉｕｍ／ｃａｌｍｏｄｕｌｉｎ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ
Ｉｌｃｔ，ＣａＭＫＩＩｃｔ），小鼠甲状腺素一１（ｔｈｙｒｏｘｉｎｅ．１，
Ｔｈｙ一１）是研究者经常使用的神经组织特异启动子。
的瑞士突变带来的蛋白构象变化使Ａ Ｐ Ｐ蛋白更容Ｔｈｙ一１和ＣａＭＫＩＩｃｔ启动子能够使下游目的基因在海
易被Ｂ．分泌酶切割，导致其通过淀粉样代谢途径生
成的ＡＢ增多，增多的ＡＩ３异常聚集，形成老年斑，进
而影响认知行为。
马、胼胝体、前皮层神经元内特异性高表达 ，而
ＰＤＧＦ和ＰｒＰ启动子可以使目的基因在小脑、大脑、
脊索的神经元广泛高表达 ６’ 。ＰｒＰ启动子更为突
神经特异性启动子通常在进行神经系统疾病
基因治疗和神经生物学研究方面具有非常重要的
出的优点是在神经胶质细胞中也具有活性，而其余
３个启动子不具有这样的功能 。所以我们选择
意义 。其中，小鼠朊蛋白（ｍｏｕｓｅ ｐｒｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ，
ＰｒＰ），人血小板源性生长因子（ｐｌａｔｅｌｅｔ－ｄｅｒｉｖｅｄ
ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ，ＰＤＧＦ），钙／钙调素依赖性蛋白激酶
ＰｒＰ启动子，在其下游插入突变的ＡＰＰ基因建立阿
尔茨海默病（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’Ｓ ｄｉｓｅａｓｅ，ＡＤ）动物模型。
在９月龄时，该转基因小鼠的海马区出现老年
中国比较医学杂志２０１１年１２月第２ｌ卷第１２期
～ 一ｓ）厘鲁艇 铎凶啦
Ｃｈｉｎ Ｊ Ｃｏｍｐ Ｍｅｄ，Ｏｃｔｏｂｅｒ ２０１１，Ｖｏ１．２１ｔ Ｎｏ・１２ ９
一∞一口０ 薯： ０Ｎ Ｔ ＿
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５Ｙｌ４区
７月４区
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５－ｍｏｎｔｈ ｏｌｄ
７．ｍｏｎｔｈ ｏｌｄ
９．ｍｏｎｔｈ ｏｌｄ ｌ１．ｍｏｎｔｈ ｏｌｄ
Ｚｏｎｅ ４
Ｚｏｎｅ４
Ｚｏｎｅ４ Ｚｏｎｅ ４
Ｂ
舍Ｓ
鞋
５月４区
７月４区
９Ｙｌ４区
１１月４区
５．ｍｏｎｔｈ ｏｌｄ
７．ｍｏｎｔｈ ｏｌｄ
９ ｍｏｎｔｈ ｏｌｄ
ｌ１．ｍｏｎｔｈ ｏｌｄ
Ｚｏｎｅ４
Ｚｏｎｅ ４ Ｚｏｎｅ ４ Ｚｏｎｅ ４
Ａ：５～１１月龄野生型小鼠与转基因模型小鼠
平台区域停留时间；Ｂ：５～１１月龄野生型小鼠
与转基因模型小鼠穿越平台区域次数。 Ｐ＜０．０５
图５ Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫空间探索实验结果比较
Ａ：Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｔａｒｇｅｔ ｚｏｎｅ ｄｕｒａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ５－１ １－ｍｏｎｔｈ
ｏｌｄ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｍｉｃｅ；Ｂ：Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｔａｒｇｅｔ ｚｏｎｅ
￣ｅｑｕｅｎｅｙ ｂｅｔｗｅｅｎ ５－－１ １－－ｍｏｎｔｈ ｏｌｄ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ
ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｍｉｃｅ．｛Ｐ＜０．０５
Ｆｉｇ．５ Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ６ｔｈ ｄａｙ ｐｒｏｂｅ ｔｒｉａｌ ｔｅｓｔｉｎｇ ｂｙ
Ｍｏｒｒｉｓ ｗａｔｅｒ ｍａｚｅ
斑，１１月，１２月呈年龄依赖性增多，这和ｈｓｉａｏ等 Ｊ
报道的结果相一致。Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫结果显示５月龄
转基因小鼠与同月龄野生小鼠有差异，说明５月龄
转基因小鼠在出现明显老年斑之前就出现了学习
记忆能力障碍。与此相一致，临床上ＡＤ患者神经
病理学改变之前，就会出现轻度的认知障碍 。研
究发现：神经元功能活动调控产生的内源性ＡＩ３可
能是正常机体对神经元持续兴奋的反应，通过从对
神经元兴奋性的负反馈调节，控制神经元兴奋毒性
的发生 ’” 。而当可溶性的Ａｐ过多，聚集成的Ａｐ
寡聚体，能够破坏海马脑片及动物的长时程增强效
应（１ｏｎｇ－ｔｅｒｍ ｐｏｔｅｎｔｉａｔｉｏｎ，ＬＴＰ），降低海马的树突棘
密度；干扰与记忆相关的即刻早期基因的表达；通
过破坏神经信号转导，引起神经元功能障碍、变性、
死亡，直接影响大脑学习记忆…一ｔ３］。Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫
寻找平台隐藏实验中第３天是检测小鼠学习记忆能
力是否存在差异的关键时间点，本实验中发现１１月
龄转基因小鼠与野生型小鼠相比，在第４天仍然存
在差异，说明转基因体小鼠学习记忆能力呈现渐进
性加重。
综上，本文报道的ＰｒＰ—ＡＰＰ６９５ ％ 转基因
小鼠在５月龄开始出现学习记忆能力缺陷和渐进性
加重。在９月龄出现老年斑并呈年龄依赖性增多。
该转基因小鼠的病理表型可以再现人类ＡＤ患者的
渐进性病理表型，是具有应用价值的阿尔茨海默病
小鼠转基因动物模型。ＰｒＰ—ｈＡＰＰ６９５ ｍ％ 转基
因 小 鼠 与ＰＤＧＦ—ｈＡＰＰ７７０ “ 、ＰＤＧＦ—
ｈＡＰＰ６９５ ［
、
ＰＤＧＦ—ｈＡＰＰ６９５ ％ 转
基因小鼠相比，由于ＰｒＰ启动子在神经胶质细胞中
也具有活性，使得该转基因小鼠可用于阿尔茨海默
病神经炎症机制方面的研究，具有更广泛的用途。
参考文献
［１］Ｋｉｍ Ｄ，Ｔｓａｉ ＬＨ．Ｂｒｉｄｇｉｎｇ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｉｎ ＡＤ［Ｊ］．
Ｃｅｌｌ，２００９，１３７（６）：９９７—１０００．
［２］ Ｓｔｏｋｉｎ ＧＢ，Ｌｉｌｌｏ Ｃ，Ｆａｌｚｏｎｅ ＴＬ，ｅｔ ａ１．Ａｘｏｎｏｐａｔｈｙ ａｎｄ ｔｒａｎｓｐｏｒｔ
ｄｅｆｉｃｉｔｓ ｅａｒｌｙ ｉｎ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ＇ｓ ｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．
Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００５，３０７（５７１３）：１２８２—８．
［３］ Ｕｌｉｒｃｈ ＶＭ．Ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ ｂｏｎｅ ａｎｄ ｊｏｉｎｔ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ．
Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ ｖｅｃｔｏｒ ｉｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ
ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ ａｒｔｉｃｕｌａｒ ｃａｒｔｉｌａｇｅ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ，ｐｅｒｉｐｒｏｓｔｈｅｔｉｃ ｏｓｔｅｏｌｙｓｉｓ
ａｎｄ ｂｏｎｅ ｈｅａｌｉｎｇ［Ｊ］．Ａｃｔａ Ｏｒｔｈｏｐ（Ｓｕｐｐ１），２００７，７８（３２５）：
ｌ一６４．
［４］ Ｍｏｅｃｈａｒｓ Ｄ，Ｄｅｗａｅｈｔｅｒ Ｉ，Ｌｏｒｅｎｔ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｅａｒｌｙ ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ
ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｉｃｅ ｔｈａｔ ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｍｕｔａｎｔｓ ｏｆ
ａｍｙｌｏｉｄ ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ ｂｒａｉｎ［Ｊ］．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，１９９９，２７４
（１０）：６４８３—９２．
［５］ Ｒｙａｎ ＫＡ，Ｐｉｍｐｌｉｋａｒ ＳＷ． Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ＧＳＫ－３ ａｎｄ
ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＣＲＭＰ２ ｉｎ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｉｃｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ＡＰＰ
ｉｎｔｒａｅｅｌｌｕｌａｒ ｄｏｍａｉｎ［Ｊ］．Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ，２００５，１７１（２）：３２７—３５．
［６］ Ｓａｓａｈａｒａ Ｍ，Ｆｒｉｅｓ ＪＷ，Ｒａｉｎｅｓ ＥＷ，ｅｔ ａ１．ＰＤＧＦ Ｂ－ｃｈａｉｎ ｉｎ
ｎｅｕｒｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ ｃｅｎｔｒａｌ ｎｅｒｖｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ，ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ ｐｉｔｕｉｔａｒｙ，ａｎｄ ｉｎ
ａ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｏｄｅｌ［Ｊ］．Ｃｅｌｌ，１９９１，６４（１）：２１７—２７．
［７］Ｈｓｉａｏ Ｋ，Ｃｈａｐｍａｎ Ｐ，Ｎｉｌｓｅｎ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｖｅ ｍｅｍｏｒｙ
ｄｅｆｉｃｉｔｓ，Ａｂｅｔａ ｅｌｅｖａｔｉｏｎ，ａｎｄ ａｍｙｌｏｉｄ ｐｌａｑｕｅｓ ｉｎ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｉｃｅ
［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９６，２７４（５２８４）：９９—１０２．
［８］ Ｍｅｓｕｌａｍ Ｍ，Ｓｈａｗ Ｐ，Ｍａｓｈ Ｄ，ｅｔ ａ１．Ｃｈｏｌｉｎｅｒｇｉｅ ｎｕｃｌｅｕｓ ｂａｓａｌｉｓ
ｔａｕｏｐａｔｈｙ ｅｍｅｒｇｅｓ ｅａｒｌｙ ｉｎ ｔｈｅ ａｇｉｎｇ－ＭＣＩ－ＡＤ ｃｏｎｔｉｎｕｕｍ［Ｊ］．
Ａｎｎ Ｎｅｕｒｏｌ，２００４，５５（６）：８１５—８２８．
［９］Ｐｒｉｌｌｅｒ Ｃ，Ｂａｕｅｒ Ｔ，Ｍｉｔｔｅｒｅｇｇｅｒ Ｇ，ｅｔ ａ１．Ｓｙｎａｐｓｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｎｄ
ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｓ ｍｏｄｕｌａｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ａｍｙｌｏｉｄ ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎ［Ｊ］．Ｊ
Ｎｅｕｒｏｓｅｉ，２００６，２６（２７）：７２１２—７２２１．
（下转第２５页）
中国比较医学杂志２０１１年１２月第２ｌ卷第ｌ２期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｃｏｍｐ Ｍｅｄ，Ｏｃｔｏｂｅｒ ２０１１，Ｖｏ１．２１．Ｎｏ－１２ ２５
（上接第９页）
［１０］
Ａｂｒａｍｏｖ Ｅ，Ｄｏｌｅｖ Ｉ，Ｆｏｇｅｌ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ａｍｙｌｏｉｄ—ｂｅｔａ ａｓ ａ ｐｏｓｉｔｉｖｅ
ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｏｆ ｒｅｌｅａｓｅ ｐｒｏｂａｂｉｌｉｔｙ ａｔ ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ
［１ ３］Ｔｏｗｎｓｅｎｄ Ｍ，Ｍｅｈｔａ Ｔ，Ｓｅｌｋｏｅ ＤＪ．Ｓｏｌｕｂｌｅ Ａｂｅｔａ ｉｎｈｉｂｉｔｓ
ｓｐｅｃｉｉｆｃ ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｃａｓｃａｄｅｓ ｃｏｍｍｏｎ ｔｏ ｔｈｅ ｉｎｓｕｌｉｎ
ｓｙｎａｐｓｅｓ［Ｊ］．Ｎａｔ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，２００９，１２（１２）：１５６７—７６．
Ｌｅｓｎ６ Ｓ，Ｋｏｈ ＭＴ，Ｋｏｔｉｌｉｎｅｋ Ｌ，ｅｔ ａ１．Ａ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｍｙｌｏｉｄ－ｂｅｔａ
ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｐａｔｈｗａｙ［Ｊ］．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２００７，２８２（４６）：３３３０５
—
３１２．
ｐｒｏｔｅｉｎ ａｓｓｅｍｂｌｙ ｉｎ ｔｈｅ ｂｒａｉｎ ｉｍｐａｉｒｓ ｍｅｍｏｒｙ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，
２００６，４４０（７０８２）：３５２—３５７．
［１４］方瑾，马春梅，黄澜，等．Ｌｏｎｄｏｎ／Ｓｗｅｄｉｓｈ双突变ＡＰＰ转基
因小鼠的鉴定［Ｊ］．中国比较医学杂志，２００８，１８（５）：２４
［１２］
Ｓｅｌｋｏｅ ＤＪ．Ｓｏｌｕｂｌｅ ｏｌｉｇｏｍｅｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ａｍｙｌｏｉｄ ｂｅｔａ－ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｍｐａｉｒ
ｓｙｎａｐｔｉｃ ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ ａｎｄ ｂｅｈａｖｉｏｕｒ［Ｊ］．Ｂｅｈａｖ Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ，２００８，
１９２（１）：１０６—１１３．
２７．
［修回日期］２０１１－０２—１０